Содержание к диссертации
Введение
Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
Глава I. Основные принципы центральной регуляции гонадотропной функции гипофиза 7
Глава 2. Моноамины мозга в регуляции гонадотропной функции 19
Глава 3. Серотонин и его роль в гйпоталамической регуляции гонадотропной функции гипофиза 27
Часть 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 44
1. Радиоиммунологическое определение концентрации лютеинизирующего гормона 51
2. Статистическая обработка полученных результатов 53
Часть 3. СОБСТВЕННЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 56
Глава I. Влияние серотонина на активность нейронов преоптической области гипоталамуса при его микроионофоретическом подведении 56
Глава 2. Влияние микроионофоретического введения серотонина в преоптическую область переднего гипоталамуса на уровень лютеинизирующего гормона в крови и гипофизе 64
Глава 3. Реакция нейронов аркуатной омасти гипотала муса на мйкроионофоретйческое подведение серотонина 80
Глава 4. Влияние микроионофоретического введения серотонина в область гипоталамуса на содержание люгеинизирующего гормона в крови и гипофизе 87
Глава 5. изучение роли различных типов серотониновой рецепции в механизме гипоталамической регуляции гонадотропной функции ГИПОФИЗА 103
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 122
ВЫВ-ОДЫ 139
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ 141
- Основные принципы центральной регуляции гонадотропной функции гипофиза
- Радиоиммунологическое определение концентрации лютеинизирующего гормона
- Влияние серотонина на активность нейронов преоптической области гипоталамуса при его микроионофоретическом подведении
Основные принципы центральной регуляции гонадотропной функции гипофиза
Представления о гипоталамической регуляции гонадотропной функции передней доли гипофиза сложились задолго до того, как было открыто явление нейросекреции и к настоящему времеаи накоплен богатейший экспериментальный материал, показывающий зависимость тройных функций передней доли гипофиза от нейросекреции, характерной для ядер гипоталамуса.
По современным представлениям гипоталамус, играя интегратив-ную роль в отношении экстро- и интерорецепторной информации, поступающей из различных отделов мозга, является тем органом, где происходит переключение нервных сигналов на гуморальные. Он выполняет функцию заключительной нервной структуры, которая, концентрируя и трансформируя на своих элементах информацию, поступающую от таких отделов ЦНС, как амигдала, гиппокамп, септум, ретикулярная формация и другие, несет на себе специфическую роль регулятора тройных функций гипофиза.
Harris (I960), основываясь на богатом опыте экспериментальных исследований, высказал предположение, что гипоталамус, через который опосредуется влияние на секреторную деятельность гипофиза, вместе с тем представляет собой морфо-функциональный центр, в котором фокусируется информация от желез эндокринной системы.
В исследованиях, изучающих механизм регуляции репродуктивных функций, выделяют две контрольные системы ( Gorski , 197.9): внутреннюю и внешнюю. Внутренняя система включает в себя: ЦНС. (гипоталамус), гипофиз, гонады. Внешняя - это общие афферентные стимулы или первичные чувствительные входы, которыми являются зрительные, обонятельные и тактильные экстро-сенсоры. В последние годы уделяется особое внимание роли ЦНС и в частности различных областей гипоталамуса в регуляции секреции гонадотропинов.
Радиоиммунологическое определение концентрации лютеинизирующего гормона
Определение концентрации лютеинизирующего гормона проводилось с помощью радиоиммунологического метода двойных антител, разработанному Niswender et al (1968) и модифицированным в нашей лаборатории физиологии эндокринной системы (Бабичев с сотрудниками, 1976).
Радиоиммунологическая реакция определения лютеинизирующего гормона в пробах производилась в рабочем буфере: 0,01 М фосфатный буфер (рН=7,5), содержащий 1% БСА; 0,01$ раствор мертиолата в 0,15М растворе NaCl. Реакцию проводили в полиэтиленовых пробирках заводского изготовления, в которые последовательно вносили 0,4 мл рабочего буфера, 100 мкл антител к лютеинизирующему гормону, 100 мкл стандартного разведения лютеинизирующего гормона для построения калибровочной кривой или 100 мкл исследуемого образца.
При построении калибровочной кривой использовались возрастающие концентрации очищенного гормона NIAMDD-Rat-LH-RP-1 производства Национального Института артритов и заболеваний обмена веществ, Бетезда, США. Применялись следующие концентрации гормона 125 нг, 250 нг, 500 нг, 1000 нг, 2000 нг. Определения как в калибровочной кривой, так и в исследуемых образцах плазмы или гипофиза проводили в 2 или в 3 параллельных пробирках.
Пробы инкубировали 24 часа при 8С, после чего добавляли 100 мкл меченного гормона I 2о (20.000 имп/мин на пробу) и продолжали инкубацию при той же температуре еще сутки. Для осаждения комплекса антиген-антитело в каждую пробирку вносили 100 мкл антител против У-глобулиновой фракции крови морский свинок (получаемых из Института эпидемиологии и микробиологии АМН СССР) в разведении . Расчет концентраций лютеинизирующего гормона производили по калибровочной кривой с пересчетом на международный стандарт, поскольку стандарт NIAMDD-Rat-LH-RP-1 содержит 0,03 единицы международного стандарта.
Влияние серотонина на активность нейронов преоптической области гипоталамуса при его микроионофоретическом подведении
Настоящая серия исследований была выполнена на 77 циклирую-щих самках крыс, весом 200-250 г. В ходе экспериментов была исследована активность 308 спонтанно работающих нейронов преоптической области. Анализ нейронной активности показал, что в общем пуле исследованных клеток в ответ на микроионофоретическое подведение серотонина 97 нейронов, т.е. 31,5% давали реакцию активации, 95 нейронов тормозилось, что составляло 30,8%-, а 116 нейронов - 37,7% не реагировало на серотонин. Таким образом, при рассмотрении полученных данных без учета стадий эстрального цикла среди нейронов преоптической области не наблюдается специфической закономерности в преобладании какой-либо реакции на серотонин. Однако, при рассмотрении полученных данных в соответствии с ходом эстрального цикла, выявлено, что чувствительность и преобладающая направленность ответов нейронов циклического центра существенно изменяется (рис.4).
На стадии диэструс-I (Д-І) нам не удалось обнаружить достоверных различий среди исследованных нейронов преоптической области клеток с реакцией активации или торможения на серотонин. Активация наблюдалась у 29,5 + 6,9% из 44 нейронов, исследованных в этой стадии цикла
