Введение к работе
Актуальность томи. В "Основных направлениях развития СССР на І98І-І985 годы и на период до I9S0 года" предусмотрено увеличение производства продукции животноводства, в том число и овцеводства. Решение этой задачи, наряду с другими, зависит от интенсивного использования высокоценных племенных животных путем широкого применения искусственного осеменения хаток. Такое воспроизводство дает возможность получить от лучших племенных производителей большое .количество потомства, «то повысит эффективность племенной работы в животноводстве.
Разрешение проблеми ускоренного воспроизводства стада во многом зависит от успешного внедрения в производство новейших достижений науки и практики, новых методов регулирования процессов воспроизводства и технологических приемов искусственного осеменения животных.
а научных исследованиях, направленных на развитие интенсификации сельскохозяйственного производства, зажное значение приобретает изучение возможности глубокого замораживания и длительного сохранения семени барана.
Метод глубокого замораживания'' л длительного хранения семени бшеа давно разработан и успешно применяется в практике ияенего а молочного скотоводства» Благодаря этому становится возможшм накапливать большие запасы замороженного семени, длительно хранить и перевозить на любые расстояния.
В овцеводстве яти возможности не получили сока широкого распространения и методы длительного хранения семени барана продолжает подвергаться совершенствованию.
В условиях Армянской ССР Гі^5ВУ6й~[З^Щ^$^Щв~Я~ДШіЄЖььмо
НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА Моск. езлілкохоз. &кяа»ч*и мм. К, А. 7і*мирнче&і I
и«8 toJJu№&№
хранение семени барана открывает большие перспективы для существенной рационализации системы искусственного осеменения овец. Широкое внедрение этого метода в практику овцеводства республики позволит накопить большие запасы замороженного семени ценных- баранов и использовать их в любом хозяйстве, а также существенно повысить эффективность селекционной работы, направленной на развитие полутонкорунного овцеводства в Армянской ССР.
Разработкой и совершенствованием метода глубокого замораживания семени барана занимались многие исследователи, В результате были разработаны различные варианты хранения семени барана в замороженном состоянии. .
Среди способов замораживания семе л баранов, разработанных различными авторами«большой интерес представляет технология длительного хранения семени барака по методу ВИХа* теоретически обоснованная В.К.Миловановым. Основные успехи по этим даннш состоят в защите живчиков барана от переписного окисления липидов мембран и в 1'лубохоцервикально» введении семени. А*Н.Варнавеким и Др./1976У на этой основе предложен состав среды для разбавления семени барана.
Основываясь на результатах биологических, биофизических я биохимических исследований пои криконсервации семени барана. В, К. Ыяло-валов и др. /1980/ разработали эффектиэную научно-обоснованную среду для разбавления семени, необходимую при замораживании в целях длительного хранения»
Для предотвращении перекксного окисления фосфолипидов в живчиках к их защиты от токсичных продуктов распада во время подготовки семени к замораживанию В.К.Ыиловановда была обоснована необходимость обработки сенеки противоокисляпшями веществами — антиокси-даыаии.
. _ 5 - "
Цель и задачи исследования» Основная цель данного исследования - разработать новый технологический вариант замораживания семени барана, пригодный в условиях Армении, выяснить его биологическую и экономическую эффективность и внедрить * практику овцевод-' ства республики. Для достижения этой цели поставлены следующие задачи:
-
Выяснить влияние различных актиоксидантов в среде на предохранение семени барана от окисления в период подготовки к замораживанию.
-
Выявить сезонные изменения качества семени баранов и его оплодотворяющей способности в зависимости от сезона накопления.
-
Усовершенствовать инструменты для искусственного осеменэнля овец замороженным семенем.
Все исследования были.направлены на установление возможности
широкого внедрения метода длительного хранения селени барана в
практику овцеводства Армении, усовершенствование технологии замо
раживания.и техники введения семени в цервнкалышй кэнал шейки
матки, а также на повышение оплодотворяющей способности оттаянно
го семени. .
- Научная новизна. Впервые *в качестве антиоксиданта в составе
разбавляющей среды был применен монозтаноламин. Его прекмущестьа
состоят в доступности, дешевизне и технологичности использования
препарата. .-'.' . - .
Были усовершенствованы: красящие метчики, позволяющие упростить трудоемкий процесс выборки маток в охоте; оттаиватель. с помощью которого оттаивание семени происходит за 15-20 сек.; шприц-катетер, способствующий глубокоцервикальному введет» семени в канал шейки матки на глубину до 4 см*
Практическая ценность работы. Введение зтаноламина в синтетическую среду в качестве антиоксиданте, подавляет окислительные процессы в семени барана во время подготовки его л замораживанию, что способствует сохранении жизнеспособности и оплодотворяющей способности оттаянного семени.
Усовершенствование„устройств и инструментов для замораживания и осеменения овец оттаянным семенем позволяет повысить эффективность осеменения овцематок эаморэжекнш семенем.
В целой разработанные приемы повывают экономическую эффективность использования оттаянного семени баранов.
Реализация результатов исследования. Результаты исследований- ' были кспохьзованн при замораживании семени /в большом количестве/ баранов Сгегошаванского ПК /I960 г./ и Ыхчянского ГОС /1991 г./ республики и для разработки рекомендаций по глубокому замораживанию, длительному сохранению и использованию семени барака в условиях Армянской ССР.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены: на научной сессии АрмНИИЖиВ, посвященной 150-летию вхождения Армении ь состав России /Ереван, ГЭ78 г./; на научной сессии АрмНИШиВ, посвященной итогам выполнения научно-исследовательских работ /Ереван, 1979 г./; на научной сессни-АрмНИШиВ, посвященной ПО-й'годовщине со дня рождения В.И.Ленина /Ереван, I960 г./; на расширенном производственном заседании сотрудников отдела биологии разино-кзния и искусственного осеменении сельскохозяйственных животных и заседании Ученого совета АрмНИШиЯ/1981 г./. -
Объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, методики, результатов собственных исследований и их обсуждения,* выводов и практических предложений. Она изложена на IS страницах
- 7 - . .* .
машинописи, содержит 45 таблиц и 9 рисунков. Список использован- « ной литературы включает.175 работ, из них 23 зарубежных авторов.
МАТЕРИАЛ и методика ИССЛЕДОВАНИЯ - . , .
. Экспериментальная часть работы была выполнена на племенной
овцеводческой ферма колхоза с. Мац Парни, а также на товарной фер
ме совхоза "Лусахпюр" Спитакского района^ t *
Лабораторные исследования и обработка подученного, материала 4
проведены в отделе биологии размножения и искусственного осемеье-
ния сельскохозяйственных животных Научно-исследовательского, инсти-
тута животноводства и кормопроизводства с 197? по 198I г.* ' » .
I. Совершенствование синтетической среды, s, предназначенной для разбавления семени барана ь
Первый этап исследовании заключался в испытании предложенной
ранее синтетической среды* предназначенной для разбавления семени
барака перед замораживанием. . ,,
С этой целью семя барана после соответствующей оценки и часової* выдержки при комнатной температуре было разбавлено йДГА-ТИЙ-глю-козной средой с токоферолом' /А.Н.Варнавсккй, В.А,Варнавская, /, которая содержит следуире компоненты: сахароза - б г» глюкоза -0,6 г» ЭДГА /этидендиаминтетрацвтат/.-.0,8 г,.ТРИС /оксиметнд/ — 0,28 г, глицерин - 4 мл, стрептоцид - 0,2, пенициллин -50 тыс.ед., стрептомицин-SO тыс.ед:,. желток куриного яйца - 20 мл,*альфа-токоферол - Z мл /30$/, вода дистиллированная - до 100 мл.
Подготовку семени, егр замораживание и оттаивание проводили по технологии, предложенной отделом биологии воспроизведения ШДа., " ' Замороженным семенем всего было осеменено 150 маток*.
В период ягнения по двум группам опытных к контрольных маток-были изучены, число объягнившихся маток, пол ягнят* число абортов, живая масса ягнят при рождении, при отъеме от матерей и в годовалом возрасте* число одкнцовых и двойневых ягнят и настриг шерсти.
:' 2. Установление влияния антиоксидантов на жизнеспособность семени после замораживания и оттаивания
ВЛОІиловановші н В'.С.Голубем /1973/ было установлено, что
под воздействием кислорода происходит разрушение фосфодипвдов,вхо
дящих в состав мембран живчиков, приводящее к образованию токсич
ных для них продуктов.'
Чтобы предохранить семя от окислительных процессов во время подготовки его к аамораживанио, В.К.Ыиловановш, А*Н«Варнавскиы, В.А.Варнавской /1976/ были применены различные антиоксиданти /токоферол, БОТ, сантохнн, ди-трет-бутил-крезоя и др./.
В наших опытах в состав среды /ЭДГД-ТИЮ-глюкоза-токоферол/ взамен токоферола был введен моноэтанодамин или этаноламин фосфорнокислый. Таким образом, были приготовлены и подвергнуты сравнительному изучение три среды: гдТА-ТРИС-глвкоза-токоферол, ЭДГА-. Тгас-глвкоэа-этанодамин, ЭДТА-ТВ1С~глюшэа-ютаноламин фосфорнокислий*
Количество этаноламина в среде была 25 мг, а этаноламина фосфорнокислого 25-30 мг.
Альфд-токофорол или витамин Е /^^^ ** концентрированный ыасляннчный раствор — впервые был введен в.среду для заморакюа— нил семени К*Г.Касымов1Ы /1975 / с цель зашиты живчиков от агглютинации и холодового удара.
Примененный в данной работе в качестве антвокенданта этанол-амин бык выделен Триером вз фосфолипидов бобовых семян в І9ІІ г. .
...-9--.'
В 1941 г, Г.В.Камалян доказал, иго этаноламик в организме ведет себя как антиоксидант, способствующий снижению содержания органических перекисей и увеличение фосфоляпкдов в тканях.
В Армянской ССР различный исследователями этаноламик был использован для консервирования кормов /A.M. Карапетян, Л.Р.Канаяк, ІІ.Г.Гаспарян, Ю.Н.Погосяк и др., 1972/. '
Этанолаюш или колаыин /НОСН^, СН^Н^/ относится к группе биоі-гекных аминов. По внешнему виду это маслянистая жидкость* хорошо растворяется в воде, принимает участие в окислительно-восстановительных процессах, оказывает действие ка ферментные системы,участ-вует в обмене белка, фосфора к улучшает процесс пищеварения.
Этаноламик фосфорнокислый получил Караджян А. в 1979 г. /авторское свидетельство » 891057/ //^/HgO^CHgOtj^HgPO^. Это кристаллический порошок* белого цвета, хорошо растворяется в воде. Этаноламик фосфорнокислый имеет слабо щелочную реакцию /рН 7-8,5/.
Ряд неследователей /А.Ы.Караджяк, Д.Р*Канаян,.Д.С.Адамян и др., 1974/ доказал положительное влияние этаноламина фосфорнокислого на переваримость питательных веществ кормов и усвояемость азота у животных.
Чтобы выяснить оплодотворяющую способность семени, замороженного в вышеупомянутых трех синтетических средах в производственных условиях совхоза "Лусахпор* Спитакского района Армянской ССР Ляп* осеменены оттаянным семенем три группы овцематок,ш> 100 животных в.каждой.
- *io -.-
3. Выявление сезонного изменения качества семени и его опяодотворявщей способности в зависимости . * *. ,* от сезона взятия семени
Седа замораживали от трех баранов-производителей с полутонким
характером шерстного покрова нового типа» разводимых в условиях
Ширахской зоны Армянской ССР» .'.. ...
Все СВЄЖЄВЗЯТШ ЭЯКуЛЯТЫ,ВЗЯТЫе ВЄСНОЙ, ЛеТОМ, ОСеКЫ) И ЗИМОЙ!
были оценены по объему» подвижности, резистентности, разбавлены вышеуказанными средами, заморожены, оттаяны и подвергнуты изучению после разбавления .до замораживания и после оттаивания.
В течение всего года /веской, летом, осенью, зимой/ была под-
* готовлены и заморожены no 40-50 лоз. Всі з было заморожено 400 доз семени. Осеменение было проведено в Яусахпюрском совхозе Спитак-
. ского района.;
*'
4. Краткая характеристика подопытных " ,. .' овец нового типа
Тип полутонкорунных овец создан путем скрещивания тонкорунно-' грубошерстных маток с бараками-цигайской породы и последующим разведением "в себе" трехпородных помесей желательного типа /автор* С.Б.Григорян/.
Эти животные имеют хорошо выраженный горнопастбтаный тт.крзп-куо конституции и удовлетворительную оброслость рунной шерстью всех частей тела. Средняя живая масса баранов составляет 81,1+0,1 кг, маток - 49,6+0,17 кг. Настриг шерсти этих животных равен соответственно 5,5+0,5 и 3,5+0,02 кг.
Овцы нового типа отличаются достаточно высокой длиной шерсти. Средняя высота их штапеля составляет: баранов-орохзводителей --
- II - ;
13,6 ом, маток -11,3 см. Шрсть белая с хоролеЗ упругости),
Руно штадельно-косичное и штапельное строение гоняной 56-58 качеств о виходом чистого волокна 62-65?,
РЕЗУЛЬШЦ ИССЛЕДОВАНИЙ* Одеяла качества овежввэятого семеня
*
Объем'аянуяята.. Результаты четырехлетнего Л977-І980 гг./
иаучелия показав» в таблице I. *
'Таблица I
Объем эякулятов баранов /мл/ -
Инд. * барана
И,*
М±/п
1.08+0,08
1,20+0,03
1,14+0,*05
0,98+0,04 1,09+0,04 0,98+0,03
1,02+0,02
1,15+0.03 1,07+0,03 1,21*0,03 1,15+0,02
1,14+0,07 0,93+0,06 1,0. 06
Из приведенных в таблице Z данных видно, что" между-отдельны
ми производителями, использованными в І977-Ї980 гг., существенной
разницы по объему эякулята не било, . .
Подвижность живчиков. Подвижность жявчяяов разных баранов по данным исследований 1977-1980 гг. мало варьировала и была в пределах 0,8-0,9.
Коягантсашя живчиков. - Результаты наших исследований по определению яоншятрации живчиков в еякуляте подопытных баранов-производителей приведены в таблице 2.
Таблица 2
Концентрация живчиков (млрл/мя)
555: * :- Li*. .. ; м+ м-.
3,3+0,16 3,1+0,11
3,2+0,09
2,8+0,14 2,99+0,09 2,90+0,1 2,93+0,06
3,15+0.05 3.04+0,05 2,95+0,05 3,04+0,03
3,12+0,06 3,11+0,03,
3,12+0,04
- ІЗ -
Приведенные данные, говорят о высокой кондаптравди живчиков в эяяулятах подопытных баранов ори вариациях от 1,8 до 4,5 млрд/ил в разные годы ну разивх баранов.
Резистентность живчиков. Результати атнх исследований, при
веденные в таблице 3, показывают, что резистентность живчиков в
различные годы и от разных баранов варьирована, яо била на доста
точно высоком уровне. .
Таблица 3 Резистентность живчиков /тно./
- 14 - "
Качество свежевзятого семени но сезонам пда. Результати изучения качества свежевзятого семеня по сезонам гсяа привалены в таблшда 4, яэ которой видно, что смя баранов, взятое в различные сезоны года, мало различалось по оонсвпім показателям /объем эякулята, подвижность, конв&нтращи, резистентность/.
.'-.'' Таблица 4
Основные показатели свежевзятого семени по сезонам года
Качество семени
Сезон взятия семени :В сред-
зима твесяа ї лето госеяь : год
Объем эякулята, мл 0.9S 1,05 1,25 1,23 1,12
±0,04 0,06 ±0,03 +0,08 +0,03
Подвижность живчиков 0,86 0,86 0,88 0,87 0,87
Коядентрация. млщ/мл 3,35 3,10 3,30 3,35 3,27
Резистентность, тяо. 29,3 30,0 31,1 ' 30,5 30,3
±0.62 +0,68 ±0.47 ±0,5 ±0,4
На ссновалии анализа приведенных данных можно прийти к заключению о возможности равномерного использования баранов-производителей в течения всего года.
Сравнительное испытание, синтетической, сдедн. Первый этап исследования заключался в 'сравнительном вештання действия ва живчики синтетической среда с окевдаятсы /токоферол/ и без него /табл. 5/.
С этой целы> в сравнительном разрезе были изучены ЭДТА-ТРИС-глехоэа-токоферольная среда и та же среда без токоферола о тем, чтобы убедиться"В-значении введения токоферола в среду для раэ-бавченля сеыеня Сарана ж его глубокого эамораживжия.
Сравнительное пзучэние качества семени» разбавленного средами
. , ' Таблица 5
-Основные показатели качества живчиков после оттаивания
Качество семеяк
! Среда
ЗДТА-ТІИС-глюкоза-ї Та же спеда вез токо-
токоферол j ферола /контроль/
1977 г. : 1978 р.: 1977 г. ї 1978 г.
Подвижность, Лил. 0,43 0,46 0,41 0,41
Резистентность, тыо. 14,4+0,46 14,1+0,29 13,4±0,ЗЭ 13,3+0,31
при^Т^С^час? 6,8+0,31 6,9+0,26 6,0+0,33 6,2+0,29
с токоферолом в качестве антяоиоидаата в без него,показало, что добавление токоферола улучшало подвижность, резистентность и пе-рехяваемость живчиков, подверженных глубок ому замораживааи».
Влияние' различных автвоксидавтов в среде. Второй етап исследования включал выяснение влияния различных антиоксидантов в среде ва предохранение живчиков Саранов от окисления в период подготовки семени ц заморажяваннв.
По методу БИЕа предложено применять либо природный противо-окаслитель - витамин Е /альфа-тад сферах/, либо синтетические противоокислители фенольного ряда.
Мы .испытали в качестве антиокислителей, кроме токофарола,также препараты на группы этаволаминоэ, е именно: монозтаноламлн.в зтаволамин фосфорнокислый. Работу проводили в трэх вариантах. В первом, варианте был введен аифатожоферол - 2 мл ЗСмасляяото , раствора. Во втором варианте вместо него — этаяодамкя /20-25 мг/ и в третьем варианте - атаноламвя фосфорнокислий /25-00 мг/, после предварительного определения оптимальных ковгентрапий этих
-.16--
антиоксидантов в среде /табл. 6/.
Основане показатели качества живчиков
"','- после оттаивания
Таблица 6
Среда
Качество семени
адТА-ТИіС- tSWA-TFHC- :ЭДСГА-ТРИС-глю-
глюноза-токо-:гнвяоза-вта- :коэа-этаяоламин
ферсл :аоламян : фосфорнокислий
1979 r:I9S0 г: 1979 г: 1980 г:І979 ГГІ9Є0 г;
Подвижность, &U> я. Резистентность, тыс.
Выживаемость пря
0,45
14,7 ±0.62
6;5 +0,30
за-за да за за;
6;3 6,3 7,1 - 6,2 6,2
+0,25+0,20+0,31 +0,40 ±0*30
-Сравнительное изучение подвижности, резистентности и выживаемости семеня показало, что оттаянное семя варана, разбавленное средой, содержащей антиоксидант этааоламин, во исследуемым шка-зателям'яеустуоает семени, разбавленному средой с токоферолом /табл. 6/.
В таблице 7 показаны результаты замораживания и оттаивания семеня, взятом зимой,, весной, летом и осенью я разбавленного средой, содержащей антиоксидант этаноламнн.
Из таблицы 7 видно, что етанолачин по действию на качество семени после оттаивания ее уступает токоферолу.
Таблта 7
Основные показателя качества оттаянного , семеки по сезонам года
Результата осеменения овдематок замороженным семенем.
Результат» осеменения овец эадорояенным оттаян ним. семенем с применением в составе среда.токоферола в ктеопэе антиоксиданте показаны в таблице 8.
Сравнительны!! ан отиз полученного фактического материала по проценту ягнения подопытных овец дает осноэание заключить, что в условиях Спитакакого,района Армянской ССР подготовка семени барана ЭДГА-ТРИС-глювоао-токойерольной рредой перед его замораживанием дает вполне удовлетдорятельиые результаты.
Среда
Таблица 8 Результаті! ягнения овец пря использования сред» о токоферолом
1978 г., Т- 1979 г" : '
осе- :из них:объят:? ят-:осе-:из влх:объяг:!Е яг-
мене-;учтено:яи- :неяия:мене-:учтево:ни- :неякя-
во ::по яг-:лось : :яо :оо яг-:лось :
овец :нению : : . ;овец :яешп> : ;
ЭДТА-ТРИС-
глэмюэа- 2а 25 , II 44,0 139 135 73 54,0
токоферол " - : 9,9 +4,3
Та же среда
без токоферо- 31 27 S 29,6 108 103 31 30,1
да /контроль/ +8,1 - +4,5
Из таблицы 8 видно, что применение токоферола в составе среди значительно погасило продан» ягнения,особенно в 1979 г. при ста-, тиотичеоки достоверных различиях /lot -3,8/.
Результаты ооеменения мате*: замороженная семенем о иоимене-'
нием синтетических сред о иаэличннмя антиоксидантами. В 1979 я
1980 гг. бала подготовлены и подвергнуто сравнительному испнта-
ьив три среды: ЭДГА-ИИС-глюяоза-токофероя; ЭДГА-ТРЙС-глюкоза-
этаяоАашш; ЭДТА-ТРИС-глюкоэа-этанолашш фоофоряокшчвя. Осемене
ние проводили однократно в одну охоту го 0,2 мл оттаянного семе-
вя в дозе, '"..-
Из таблицы 9 видно, что иопользовшие втаноламияа а качестве антчоксиданта дало практически,такой же результат, как в применение токоферола. Хуже были результата от применения эталояамияа фосфорнокислого,
.Основываясь на зтих экспериментальных данных, можно констэ-тирогать, что от осеменения маток намороженным семенем с защитой
Таблица 9
Результаты ягнения овец в связи ,с применением
разных аатиоксвдаятов в среде для раэсааяения овмени
моноэтеяолгмияоы бети получены вполяе удовлетворительные результати.
Действие глубина введения семеня в шейку матки овец на ре
зультат осеменения заморохенянм-отташявм семеяем яоказаво в таб
лице т0. ,
Приведенные в таблице 10 данные понаанваот заачиталъаое улучшение результатов ягвеяия при глубоком ввадаави замороженного семени в шейку матий при использования любой испытуемой орздв.
Таблица 10 Результаты ягнения маток в зависимости от глубины введения семени в шейку матки
ченже результатов ягвеяия маток, осеиеаеянвх аааорсжеянш семенем, взятым в различные сезона года /табл. XX/.
На основании анализа данных, приведенных в таблице XX,можно заключить, что йараны-ирокзводлтели нового типа круглый год способны давать вполне пригодное для глубокого замораживания семя с получением практически одинакового процектаягненкя, независимо от сезона взятия семени и его замораживания.
Таблица II
Результаты ягнения овец,, осемененных заморожен выи семенем, взятии,в разные сезоны года
: Аягси-
: окси-: данты
*
:
:
:
:Свехе--: взятое . : сеия :/контроль/
Экономическая эффективность глубокого *'.- . "' замораживания, длительного сохранения -. " и использования семени баранов '--.'"
' ' - *