Введение к работе
Актуальность rem. Открытие В.К.Ыиловаиовым, И.И.Соколовской, И.В.Смирновым (1972) с приоритетом (1947) метода длитеяь-" ного сохранения спермы сельскохозяйственных животных в глубоко-заморояенном состоянии позволило пересмотреть систему организации их воспроизводства. Использование данного метода в практике ; животноводства позволяет интенсифицировать воспроизводство кн~ вотных на основе широкомасштабной генетической селекции. Поэтому дальнейшие прогресс в повышении продуктивности животноводства в значительной степени зависит от эффективности метода криоконсервации спермы сельскохозяйственных животных.
фундаментальные исследования Шилованов, 1964; Octseko,, 1969; 1978; Пакенас и др., 1975; Наук, 1976, 1987; Kagase, Graham, Kiwa, 1964; Grahaai, 1973) яегли В основу разработки, практически приемлемых технологий криоконсервации семени быков- ( производителей. Вместе с тем, еще высок процент гамет, которые не восстанавливают свои функции после деконсервации, что требует, дальнейоей разработки эффективных синтетических сред и прие--мов технологической обработки спермы при криоконсервации.
В последние годы во многих странах мира довольно интенсивно проводятся исследования по разработке высокоэффективных способов длительного сохранения сперіш баранов-производителей в гяу-бокозамороженном состоянии (Милованов и др., 1974, 1981; Наук, 1972, 1987; Касыыов, Ашимов, 1975; Платов, 1979, 1981; Salamon, 1969,* Colas, 1975; Jones, 1975).
Отсутствие эффективного способа криоконсервации спермы ба-ранов-произёодитеяей сдерживает ускорение селекционно-племенной работы в овцеводстве.
. В связи с этим важнейшей задачей в области репродукции ни-
воїншс является дальнейшее выяснение структуры, метаболизма и функции гамет различных видов кивотних в ответ на действие низких температур.
Поскольку наиболее чувствительными структурами гамет к действию низких температур являются биомембраны за счет' усиления перекисного окисления и фазовых переходов липидов, нарушения слабых связей между пипидами и белками (Наук, 1974, 1967), то приоритетным является поиск условия стабилизации структуры биомембран гаыет животных при криоконсервации. Проведение таких исследований определяется необходимостью разработки эффективных синтетических сред и режимов криоконсервации спермы барана и быка.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение влияния антиоксидонтов на морфофункциональное состояние спермиев баранов и быков и на этой основе разработка синтетически* сред и;приемов их криоконсервации.
Для достижения цели намечалось решение следующих основных задач:
I..Изучить влияние общих яипидов актиномицетое^мексидол (С0П-І), тритона Х-ЮО и селенита натрия на морфофизиологические показатели гамет быков и баранов-производителеА при их криоконсервации.
2. Выявить действия условий охлаждения, замораживания и оттаивания на физиологические показатели гемет баранов.
3. Разработать и испытать в производственных условиях синте-; тические среды и приемы криоконсервации гамет баранов и быков в форме гранул.
v . Научная новизна работы. Впервые изучено действие общих липидов актиномицетов, мексидола и тритона Х-ЮО на морфофуикциональ-
ные показатели гамет быков и баранов при их криоконсервации. Получены новые данные, свидетельствующие о том, что общие липиды актиномицетов обладают как антиокислительными, так и антимикроб-' ными свойствами. Шявлены оптимальные условия технологической обработки спермы баранов при криоконсервации; охлаждение спермы с 30 до 4С со скоростью 0,4С/мин, выдержка при 4С в течение 2 часов, земорэяивание при температуре -140 в течение 2 минут и оттаивание с помощью аэродинамического размораживателя при температуре 60 С.
Разработаны лактоэо-общие липиды актиномицетов глицерино-желточнед (авторское свидетельство $ 1498489), яактоэо-мексидод-глицерино-желточнай (авторское свидетельство $ 1634268) и лапто-зо-тритон Х-100-глицерино-желточная среды (авторское свидетельство $ I5408I7), проверка которых показала их высокую эффективность.
Теоретическое и фактическое значение работы. Теоретическое значение работы состоит в раскрытии особенностей влияния различных антиокскдаитов на морфофутционаяьные показатеяи гакот бора-нов при криоконсервации и установлении у общих якпидов актиномицетов антиокислительного и антимикробного действия.
Разработанные новые синтетические среда и приемы технологической обработки спермы быка и барана при криокнеервации её в форме гранул более эффективны по сравнешга с существующими средами для отих целей и могут быть использованы в производстве» Основные положения, выносимые на защиту. . I* Общие яипиды актиномицетов, кексидол (С0П-І), тритон Х-ЮО обладают защитным эффектом при криоконсервации гамет быка и барана, а общие липиды актиномицетов проявляют антиокиалитвяь-ное и антимикробное действие.
) - '
?, Разработанные синтетические среды лактозо-общие липиды актиномицетов-глицерино-желточная и лактозо-мексидоло-глицери-на-желточная для криоконсервации спермы барана и быка более эффективные, чем существующие среды для этих целей,
3. Оптимальным режимом технологической обработки сперш с использованием ЛОЛАГЖ-среды является: охлаждение спермы с 30 до 4 со скоростью 0,4С/мин» выдержка при 4С в течение 2 часов, ааиораживание при температуре -І40С в течение 2 минут и оттаивание с помощью аэродинамического размораживателя при температуре 60С.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на Всесоюзном симпозиуме "Реконструкция, стабилизация и репарация биологических мембран" (Благовещенск, 1989), Всесоюзной конференции "Биовнтиоксидант" (Черноголовка, 1989), Всесоюзном симпозиуме "Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа" (Киев, 1989), Всесоюзной конференции "Згиаиология продуктивных животных" (Тарту, 1989), Республиканское конференции "Проблемы научного обеспечения животноводства" (Кишинев, J99Q), Международно» конвенции "Биологические основы высокоР продуктивности сельскохозяйственных животных" (Боровск, 1990), Всесоюзном симпозиуме "Стресс, адаптация и дисфункции" (Кишинев, 1991), ежегодных васеданиях лаборатории криобиологии и Института физиологии АН FM (I936-I99I).
. Материалы диссертации опубликованы в 14 печатных работах.
Работа изложена на страницах машинописного текста, со
держит J>8 таблиц и 4 рисунка» Список использованной лите
ратуры включает источника, в том числе иностранных
а.второ8.'
нлгеиіаш и метода
Объектом исследований служила сперма баранов остфризскрй и каракульской, а быков черно-пестрой пород.
Для исследования отбирали эякуляты с подвижностью гамет не ниже 8 баллов и концентрацией I млрд/мл для быков и 2 млрд/мл для баранов.
Оценку качества оттаянной спермы баранов и быков по подвижности гемет проводили под микроскопом при 450-кратном увеличении по 10-балльной шкале. Концентрацию гамет определяли с помощью
фоїовлвктроколлоримвгра.
Сперму баранов и быков-производителей замораживали в форме . открытых гранул на фторопластовых пластинах объемом 0,2 и 0,1. мя соответственно.
Скорость снижения температуры в момент замораживания измеряли при помощи термопары, вмонтированной в гранулы с семенем.
Оттаивание сперш проводили с помощь» специального аэродинамического аппарата при температуре 60С.
Определение оптимальной концентрации Сахаров и полиолов проводили методом треугольных систем по В.К.НиЯованову (1962), при испытании ентиоксицантов использовали эквивалентные молярные концентрации со смещением от оптимума в сторону гипо- и гипермоляр-ности до появления отрицательных эффектов.
Антиокцелительную активность яипидов определяли по методике Бурлакова Е.Б. и др. (1975).
Активность глутамино-аспврагиновой трвнеаминаэы в плазме семени баранов-производителей определяли по методу Beytmaiii -. -Frankel, (1967), спектрофотометрически на приборе СФ-26 при длине волны БЗО нм.'
. Изучение морфологических изменений акросомы гамет баранов и
быков проводили с помощью фазоконтрастной микроскопии с использованием интерферационного микроскопа IPI-5 (Польша) под иммерсией при 1500-кратном увеличении, просматривая в каждом образце по 300 гамет и рассчитывая их процент с интактными акро-сомами. *
Устойчивость гамет баранов к низкотемпературному шоку определяли по ГОСТ 20909.4-75.
Научно-производственные опити по испытанию ириозшдитных сред для криоконсервации гамет баранов проводили- в совхозе "Роза Молдавии" Леовского и "XX Партсъезд" Теленештского районов. Результаты осеменения учитывали по итогам окота овец.
Научно-производственные опыты по осеменению коров проводили в хозяйствах зоны обслуживания Страшенского и Сннжерейского госплёыпредприятий по накоплению спермы сельскохозяйственных животных..
Результаты осеменения коров учитывали по итогам ректального обследования коров через 60-90 дней и отелам.
Цифровой материал обработан методом вариационной статистики по .Е.К.Меркурьевой (1964) и Г.Ф.Лакину (1980).(