Введение к работе
. Данная работа посвящена изучению полиморфизма и экспрессии двух новых генов DMA и DMB, обнаруженных в локусе второго класса комплекса гистосовместимости.
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Исследование новых генов комплекса гистосовместимости DMA и DMB имеет значение прежде всего для углубления представлений о механизмах формирования иммунного ответа.
Определение аллелей белков комплекса гистосовместимости играет ключевую роль при выборе пары донор-реципиент. Успех трансплантации как способа лечения некура-бельных заболеваний сердца, печени, почек, легких, поджелудочной железы, костей, сетчатки в большой степени зависит от тканевой совместимости донора и реципиента. Особенное значение приобретает определение совместимости при пересадках костного мозга, когда неполная совместимость донора и реципиента требует иного, более интенсивного ведения больного после пересадки, а несовместимость по двум аллелям белков комплекса гистосовместимости приводит к реакциям отторжения. Подбор донора, идентичного по всем известным белкам комплекса гистосовместимости, не всегда позволяет избежать отторжения. В связи с этим встает задача поиска и анализа новых генов второго класса, ответственных за реакции типа "трансплантат против хозяина" и "хозяин против трансплантата".
В настоящее время также изучается роль комплекса гистосовместимости в развитии ряда ассоциированных с ним заболеваний. Подобных заболеваний насчитывается по различным оценкам несколько десятков, большинство из них имеют аутоиммунную природу. Изучение ассоциаций генов второго класса комплекса гистосовместимости и заболеваний аутоиммунной природы представляется важным как с точки зрения определения групп риска, так и изучения молекулярных механизмов развития заболеваний.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В ходе данной работы был показано отсутствие полиморфизма гена DMA, полиморфизм же гена DMB ограничивается тремя аллелями, характеризующимися однонуклеотидными заменами в третьем экзоне, при доминировании одного мажорного аллеля. Отсутствие полиморфизма в области, кодирующей антигенпрезентирующую область
молекулы DM свидетельствует против необходимости типиро-вать данные гены при трансплантациях.
Описаны различные формы матричной РНК гена DMB, две из которых могут приводить к существованию нетипичной для белков комплекса гистосовместимости второго класса конститутивной секреции формы р-цепи.
Предположено, что белки второго класса комплекса гистосовместимости участвуют в процессинге белков. На это указывают:
жесткая малополиморфная структура димера DM,
нестабильность его на мембране из-за отсутствия трансмембранного домена как минимум у половины молекул,
описанные в настоящей работе особенности строения белка.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Результаты исследования полиморфизма генов DMA и DMB и их экспрессии свидетельствуют о том, что продукты этих генов не принимают участия в иммуноагрессивных реакциях, развивающихся в результате пересадки костного мозга, и, следовательно, их можно исключить из списка генов, по которым необходимо проводить типирование пары донор-реципиент при трансплантациях.
Обнаруженная ассоциация ревматоидного артрита с редкими аллелями гена DMB может быть использована для оценки генетического риска, а также для исследований этиологии этого заболевания.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью данной работы было изучение структуры и полиморфизма новых генов DMA и DMB, обнаруженных в локусе HLA второго класса.
Исходя из практической важности изучения генов второго класса комплекса гистосовместимости были сформулированы следующие задачи:
изучить полиморфизм генов DMA и DMB,
оценить необходимость молекулярно-генетического типирования генов DMA и DMB при трансплантациях,
охарактеризовать экспрессию продуктов генов на уровне транскрипции в клеточных линиях и в крови здоровых доноров,
исследовать ассоциации аллелей генов DMA и DMB с заболеваниями, для которых показана роль генов второго класса комплекса гистосовместимости.
1. Показано, что ген DMA не полиморфен. Определен
полиморфный участок гена DMB. Определены частоты алле
лей гена DMB.
-
Показано, что среди больных ревматоидным артритом повышен процент минорных аллелей гена DMB.
-
Найдено три формы мРНК гена DMB, одна из которых кодирует трансмембранный белок, а две другие — секреторную форму того же белка.
4. Показано, что различные формы мРНК гена DMB ге
нерируются в результате альтернативного сплайсинга.
ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов и материалов исследования, полученных результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 116 страницах, содержит 6 таблиц и 31 рисунок. Список литературы включает 89 работ.