Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Клонирование и молекулярно-генетическое исследование функциональной роли гена brpB в модельном штамме Streptomyces lividans TK и у продуцента биалафоса S. hygroscopicus ATCC 21705 Табаков, Вячеслав Юрьевич

Данная диссертационная работа должна поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Табаков, Вячеслав Юрьевич. Клонирование и молекулярно-генетическое исследование функциональной роли гена brpB в модельном штамме Streptomyces lividans TK и у продуцента биалафоса S. hygroscopicus ATCC 21705 : автореферат дис. ... кандидата биологических наук : 03.00.15 / ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов.- Москва, 1994.- 22 с.: ил. РГБ ОД, 9 94-1/953-9

Введение к работе

Актуальность темы.

Актиномицеты рода Streptomyces являются микроорганизмами с четко дифференцированным жизненным циклом, включающим стадии полигеномного мицелия и гаплоидных спор. Осуществление программы жизненного цикла у стрептомицетов предполагает активирование и использование групп генов,, детерминирующих процессы первичного и вторичного метаболизма. Фенотипическими проявлениями вторичного метаболизма являются дифференциация коло.ний этих микроорганизмов и синтез биологически активных веществ.

Одна из групп биологически активных веществ - антибиотики, широко используется в хозяйственной деятельности человека.

В настоящее время особую актуальность в молекулярной генетике Streptomyces приобретает исследование механизмов, обеспечивающих дифференциальную" экспрессию генов первичного и вторичного метаболизма, а также- компонентов системы регуляции, принимающих участие в их переключении.

Штамм Streptomyces hyfjroscopicus АТСС 21705,- продуцент анти
биотика гербицида биалафоса является хорошей моделью для исследо
вания структурно-функциональной организации системы первичной
инициации и регуляции генов антибиотикообразования у'стрептомице
тов. . ' ' . , .

Цель работы и задачи исследования. ' .

Целью настоящей работы являлось исследование -механизмов специфической регуляции экспрессии генов биосинтеза антибиотика гербицида биалафоса в' штамме продуценте Streptomyces hygroscopicus АТСС 21705.

В соответствии с этой целью поставлены следующие задачи:

клонирование хромосомных детерминантов, обеспечивающих позитивную регуляцию генов биосинтеза биалафоса;

анализ функционирования'клонированных генов в гетерологич-ном штамме S.' lividans ТК54;

- разработка системы введения клонированных генов в штамм
S. hygroscopicus АТСС21705;

- изучение влияния клонированных генов на уровень устойчивости и биосинтеза биалафоса в штамме продуценте.

Научная новизна результатов.

- клонирован фрагмент размером 1.45 т. п. н. Хромосомной ДНК
S. hygroscopicus с геном ЬгрВ, осуществляющим позитивную регуляцию
гена устойчивости к биалафосу bar в модельном штамме S. lividans
ТК64;' ' . , .

- сконструирована челночная конъюгативная плазмида pVGTB24 и
осуществлен перенос пдаэмидных копий гена ЬгрВ в штамм продуцент
биалафоса S. hygroscopicus; показано, что в результате интеграции
этой плазмиды по гомологии с клонированным фрагментом происходит
снижение устойчивости эксконъюгангов S. hygroscopicus (pV8TB24) и
их антибиотической и продуктивности; теоретически рассмотрены ме
ханизмы функционирования ЬгрВ как регулятора кластера генов био
синтеза' антибиотика биалафоса;

- адаптирована методика межродовой . конъюгации Е. сої і -'
Streptomyces для передачи конъюгативных плазмид в промышленные
штаммы продуценты биалафоса (S/ hygroscopicus) и хлрртетгациклина
(S. aureofaciens);. / .'' .

- показана возможность конъюгативной передачи из Е. сої і ко
нъюгативных плазмид и.фагов Streptomyces в промышленно' важный
"штамм Rhodocoocus rhodochrous ИЗ, образующий основной фермент би
оконверсии акрилового нитрила в акриламид - нитрилазу;

- радаботан биологический метод качественного и количест
венного определения биалафоса и других веществ, 'обладаюшиХчтлута- :
минсинтетазной активностью, в т.ч. в культуральной жидкости мик-
роорганизмов! продуцентов; показано, что более низкая, биологичес-
кая активность мономерных аналогов глутаииновой. кислоты обуслов-.
лена специфичностью системы трансмембранного переноса этих соеди^
нений. ", '.

Научно-практическая значимость работы и использование полученных результатов.

Результаты, полученные в ходе настоящей работы, могут быть использованы для:

  1. Изучения молекулярных механизмов взаимодействия продукта клонированного гена ЬгрВ с ДНК-мишеныа и инициации транскрипции регулона, ответственного за биосинтез биалафоса.

  2. Конструирования векторов, способных интегрировать в хромосому, штаммов-реципиентов путем' гомологичной рекомбинации.

  3. Межродового переноса конъюгативных плазмид из Е. сої і в промышленные штаммы Streptornyces и другие микроорганизмы семейства актиномицетов.

  4. Качественного и количественного анализа соединений, обладающих антигдутаминсинтетазной активностью.

Апробация работы и публикации по теме исследований: Основные результаты работы были представлены к защите на заседании межлабораторного семинара подсекции "Генетика актиномицетов" института БНИИгенетикз от 24 июня 1993 г. Отдельные материалы докладывались на шести научных конференциях, в т. ч. трех международных. В общей сложности подготовлено к публикации ІЗ печатных работ (список представлен на 20 стр. автореферата).

Структура и объем работы.

Диссертация построена по традиционному' плану и содержит раз
делы: .введение, обзор литературы, материалы.и методы, результаты
экспериментов, обсуждение, выводы и список цитируемой литературы
( наименований). ' -

Диссертация. содержит рисунков и таблиц.

Полный объем работы страниц.