Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Остеоартроз: понятие, эпидемиология 12
1.2. Этиология и патогенез первичного остеоартроза 14
1.3. Генетические аспекты патогенеза первичного остеоартроза 19
1.4. Современные методы доклинической диагностики ОА 26
1.5. Интегральные анкетные методики оценки выраженности клинических симптомов и тяжести течения ОА, а также эффективности проводимой терапии 31
Глава 2. Материалы и методы исследования 34
2.1. Характеристика методов исследования 34
2.2. Характеристика обследованных групп 41
Глава 3. Клиническая оценка выраженности симптомов ао в исследуемой группе 47
3.1. Выраженность клинических симптомов ОА в исследуемой выборке 47
3.2. Обсуждение 58
Глава 4. Анализ функциональной активности рибосомных генов у больных оа и связей с особенностями клинического течения 60
4.1. Функциональная активность рибосомных генов в исследуемой выборке 60
4.2 Корреляционный анализ исследуемой выборки 67
4.3 Исследование взаимного действия ФАРГ и факторов риска ОА на клинические проявления ОА 79
4.4. Анализ активности районов ядрышковых организаторов в клетках лимфоцитов у больных остеоартрозом 90
4.5.Обсуждение 92
Глава 5. Оценка вероятностного риска развития оа и прогнозирования эффективности консервативной терапии заболевания 93
5.1. Оценка вероятностного риска развития ОА, в зависимости от комплекса факторов риска и ФАРГ 93
5.2. Оценка вероятностной эффективности консервативной терапии ОА, в зависимости от тяжести заболевания и ФАРГ 96
5.3. Обсуждение 100
Заключение 103
Выводы 105
Практические рекомендации 106
Литература
- Генетические аспекты патогенеза первичного остеоартроза
- Характеристика обследованных групп
- Выраженность клинических симптомов ОА в исследуемой выборке
- Анализ активности районов ядрышковых организаторов в клетках лимфоцитов у больных остеоартрозом
Введение к работе
Актуальность проблемы. Остеоартроз (ОА) относится к группе заболеваний с неизменно растущей распространённостью и высокой частотой инвалидизации и, до настоящего времени, не поддающихся радикальному лечению. Основными симптомами ОА являются: боль в пораженных суставах и нарушение их функции, ухудшение качества жизни больных. Проблемы распространения ОА требуют постоянно растущих расходов из бюджета на здравоохранение, в том числе на консервативное и хирургическое лечение.
В России остеоартрозом (ОА) страдают приблизительно 80% населения в возрастной группе старше 60 лет, при этом более половины из них имеют различные ограничения движений в крупных суставах, а 25% не справляются с выполнением основных ежедневных обязанностей по самообслуживанию [Андреева Т.М. и соавт., 2014]. В нашей стране в этой возрастной группе преобладают женщины с характерным для них развитием клинически ярко выраженного ОА коленных суставов, значительно ограничивающего двигательную активность из-за практически постоянных болей в поврежденных суставах. [Фоломеева О.М. и соавт., 2008]
В России, имеется тенденция к росту заболеваемости первичным ОА даже в молодых возрастных группах, причем за последние пять лет данная цифра составила 21% [Макарова М.В. и соавт., 2015].
Экономический ущерб, связанный с ростом заболеваемости первичным ОА, в западноевропейских странах составляет от 1 до 2,5% внутреннего валового национального продукта, включая, как прямые затраты на медицинское обслуживание и лечение, так и расходы, связанные со стойкой утратой трудоспособности в среднем возрасте.
Остеоартроз по степени снижения качества жизни занимает лидирующие позиции, опережая желудочно-кишечные, респираторные и сердечнососудистые заболевания, является основной причиной ограничения в выполнении общественно-социальных функций и утраты трудоспособности. Наряду с ишемической болезнью сердца, алкоголизмом, диабетом и депрессией, остеоартроз входит в число пяти основных факторов, обусловливающих наиболее продолжительное и стойкое нарушение здоровья населения.
Современная наука рассматривает ОА как гетерогенную группу заболеваний суставов различной этиологии, но со сходными биологическими, морфологическими и клиническими признаками и исходом, приводящим к потере хряща, повреждению субхондральной кости, синовиальной оболочки, внутрисуставных связок, суставной капсулы и периартикулярных мышц [Litwiс А. еt аl., 2013; Frаnсеn M еt аl., 2011].
Причины развития ОА принято делить на: генетические и негенетические, факторы действия внешней среды. К факторам действия внешней среды относят: различные травмы, перегрузки суставов и занятия спортом. К негенетическим факторам относятся: возраст, избыточная масса тела,
состояние постменопаузы у женщин, различные дисплазии костной ткани [Кашеварова Н.Г. и соавт., 2014]. К генетическим факторам относятся: пол, различные мутации в структуре гена Сol2А, этническую принадлежность пациента. Действие комплекса этих предрасполагающих факторов приводит к нарушению цитоархитектоники и прочностно-аммортизирующих качеств суставного хряща. Цепи коллагена II типа и межклеточного матрикса, являются основными компонентами суставного хряща. Синтез данных компонентов суставного хряща обеспечивается адекватной работой белоксинтезующего аппарата хондроцитов. Регуляция работы белоксинтезующего аппарата клеток, в том числе и хондроцитов суставного хряща, на цитогенетическом уровне обеспечивается рибосомными генами, кодирующими структуру большой и малой субъединиц рибосом. [Иванов В.П. и соавт., 2012].
Таким образом, значение рибосомных генов в патогенезе первичного остеоартроза может оказаться очень важным, т.к. они регулируют уровень белкового синтеза на генетическом уровне [Иванов В.П. и соавт., 2015], участвуют в построении цепей проколлагена и межклеточного матрикса суставного хряща [Аndrеw еt аl., 2013].
Необходимость изучения вклада цитогенетического компонента в патогенез первичного остеоартроза крупных суставов и возможное влияние рибосомных генов на клиническое течение первичного ОА крупных суставов определили актуальность проведения настоящего исследования.
Цель исследования:
Оценить активность рибосомных генов и ее модифицирующее влияние на течение и клинические проявления первичного остеоартроза крупных суставов у больных.
Задачи исследования:
-
Разработать новую модель форму анкет для комплексного медико-генетического консультирования больных остеоартрозом на основе имеющихся индексов и шкал.
-
Оценить функциональную активность рибосомных генов у больных остеоартрозом крупных суставов.
-
Изучить влияние функциональной активности рибосомных генов на клинические проявления и особенности течения первичного остеоартроза.
-
На основе оценок функциональной активности рибосомных генов и комплекса различных факторов риска ОА разработать способ для вероятностного прогнозирования развития первичного остеоартроза и тяжести его течения.
-
На основе оценки функциональной активности рибосомных генов, клинических проявлений и особенностей течения первичного остеоартроза, разработать способ для вероятностного прогнозирования эффективности стандартизированной консервативной терапии первичного остеоартроза.
Научная новизна исследования:
Основным научным результатом исследования явилось впервые проведенное изучение функциональной активности рибосомных генов у больных первичным остеоартрозом крупных суставов. Разработан комплексный медико-генетический подход к консультированию больных первичным остеоартрозом. Установлены взаимосвязи между уровнями активности рибосомных генов и выраженностью клинических симптомов, а также особенностями течения первичного остеоатроза. Разработаны способы вероятностного прогнозирования риска развития заболевания и оценки эффективности стандартизированной консервативной терапии первичного остеоартроза.
Научно-практическая значимость работы:
Результаты выполненной работы открывают новые перспективы для более глубокого понимания вклада генетических процессов в патогенез первичного остеоартроза и позволяют проведение ранней доклинической диагностики заболевания.
Проведение медико-генетического консультирования с использованием специализированных анкет позволяет не только выявить ключевые генетические взаимодействия, но и идентифицировать спектр возможных средовых факторов риска, способных спровоцировать возникновение или обострение данной патологии.
Полученная концептуальная модель вовлеченности уровня активности рибосомных генов в патогенез и особенности клинического течения первичного остеоартроза крупных суставов позволяет применять программы ранней профилактики заболевания, а также определить направление тактики лечения остеоартроза, в зависимости от уровня активности рибосомных генов.
Полученные данные представляют интерес для специалистов в области цитогенетики, травматологов-ортопедов.
Полученные результаты использованы при чтении специальных курсов по медицинской и клинической генетике, патофизиологии заболеваний опорно-двигательной системы в вузах медицинского и медико-биологического профиля, а также на курсах повышения квалификации для медицинских работников.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Новая модель комплексного медико-генетического обследования больных первичным остеоартрозом крупных суставов позволяет оценить вклад факторов риска заболевания и генетического компонента в патогенез заболевания.
-
Активность рибосомных генов у больных первичным остеоартрозом достоверно ниже, чем у здоровых людей.
-
Особенности клинических проявлений первичного остеоартроза зависят от уровня активности рибосомных генов.
-
Низкая и средняя активность рибосомых генов обусловливает более раннее и тяжелое течение первичного остеоартроза.
-
Способы для вероятностного прогнозирования развития первичного остеоартроза и эффективности стандартизированной консервативной терапии остеоартроза, позволяют диагностировать заболевание на доклинических стадиях и давать обоснование для более радикального подхода к лечению.
Внедрение в практику.
Результаты исследования внедрены в педагогическую работу кафедры биологии, медицинской генетики и экологии ФГБОУ ВО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедры травматологии и ортопедии ФГБОУ ВО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Апробация работы и публикации.
Результаты работы представлены на Х юбилейном съезде травматологов России (Москва 2015), 79-й ежегодной Международной научной конференции молодых ученых медиков (Курск, 2013), 80-й ежегодной Международной научной конференции молодых ученых медиков (Курск, 2014), 81-й ежегодной Международной научной конференции молодых ученых медиков (Курск, 2015), VI съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (ВОГиС) (Ростов-на-Дону 2014 год), ежегодной научно-практической конференции с международным участием «Проблемы и инновации в травматологии, ортопедии и комбустиологии» (Воронеж 2015), Х юбилейной международной конференции молодых ученых медиков (Курск 2016). По тематике работы опубликовано 9 печатных работ (из них 2 в журналах ВАК).
Личный вклад автора.
Автор непосредственно планировал и проводил клинические обследования пациентов и лабораторные цитогенетические анализы образцов полученной крови. Клиническое обследование заключалось в первичном обследовании пациентов с применением специализированных анкет, с целью установления полного и развернутого диагноза, определения спектра факторов риска заболевания и особенностей клинического течения остеоартроза. Цитогенетическое исследование проводилось с целью получения препаратов метафазных хромосом лимфоцитов периферической крови, для оценки уровня активности рибосомных генов. Данные исследования проводились с использованием заимствованных и разработанных автором методик исследования. Автором производилось клиническое наблюдение за пациентами при первичном и последующих осмотрах, цитогенетические исследования, выполнялись регистрация и обработка первичных данных на всех этапах работы. Полученные в ходе клинико-лабораторного исследования цифровые данные статистически обработаны и интерпретированы автором самостоятельно.
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 2 изданиях, входящих в список изданий, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации для опубликования результатов диссертационных исследований.
Структура и объем диссертации
Генетические аспекты патогенеза первичного остеоартроза
В основе патогенеза первичного ОА лежит нарушение прочностно-аммортизирующих свойств суставного хряща, обусловленных нарушением равновесия анаболических и катаболических процессов в гиалиновом хряще [Brаndt еt аl., 2008].
Основным механизмом патогенеза первичного ОА, является дегенерация гиалинового хряща, развивающаяся вследствие недостаточного синтеза протеогликанов хондроцитами и нарушения структуры межклеточного матрикса суставного хряща посредством фрагментации протеогликановых агрегатов [Григорьева с соавт., 2007; Бадокин с соавт., 2009; Hеrrеrо-Bеаumоnt еt аl., 2009].
В настоящее время принят мультифакториальный подход к этиологии заболевания с учетом влияния комплекса факторов риска внешней среды и наличия генетической предрасположенности.
Факторы риска развития первичного ОА можно разделить на три основные группы: негенетические факторы, генетические, а также факторы действия окружающей среды.
К генетическим факторам риска развития ОА относятся: пол, этническая принадлежность пациентов, наследственные нарушения коллагена II-го типа, мутации в гене, кодирующем коллаген II-го типа и другая наследственная патология костей и суставов.
Негенетическими факторами риска являются: пожилой возраст, избыточная масса тела, состояние постменопаузы у женщин, дефекты развития и приобретенные заболевания и травмы костей и суставов.
К факторам действия внешней среды относятся: тяжелые физические нагрузки в течении длительного времени, тяжелые условия трудовой и профессиональной деятельности, тяжелые травмы суставов, активные занятия спортом.
Возрастные (инволютивные) изменения в опорно-двигательной системе увеличивают риск развития остеоартроза, однако наибольшее влияние на патогенез заболевания оказывают при сочетанном воздействии с другими факторами риска развития ОА [А. Shаnе Аndеrsоn еt аl., 2010].
Большое количество работ посвящено увеличению частоты развития первичного ОА у женщин после наступления менопаузы, что позволяет рассматривать данное состояние, как фактор риска развития ОА. Доказано, что эстрогены оказывают потенциальную защитную роль на суставной гиалиновый хрящ, а также участвуют в поддержании гомеостаза суставных тканей. Резкий рост распространенности ОА среди женщин в состоянии менопаузы [Lаwrеnсе еt аl.,1998; Mаhаjаn еt аl., 2005] обусловлен наличием рецепторов к эстрогенам (ЕRS) в суставных тканях [Ushiyаmа еt аl.,1999; Kаhlеrt еt аl., 1997; Rоmаn-Blаs еt аl., 2009], что позволяет говорить о наличии патогенетической связи между развитием дегенеративных процессов в суставном хряще с потерей эндокринной функции яичниками.
Избыточная масса тела является одним из ведущих факторов риска развития ОА как за счет механической перегрузки опорных суставов [Кратнов А.Е. с соавт., 2008; Денисов Л.Н. с соавт., 2010], та и за счет повышенный выработки адипокинов, повреждающих гиалиновый хрящ, субхондральную кость и синовиальную оболочку[Riсhtеr еt аl., 2015; Fеlsоn еt аl., 2004]. Характер трудовой деятельности также относится к ведущим факторам риска развития ОА. Высокий уровень физической активности, энегозатратности при выполнении профессиональных обязанностей, является фактором, увеличивающим риск возникновения остеоартроза [Blаgоjеviс еt аl., 2010]. Однако развитие ОА в большинстве случаев обусловлено сочетанным действием комплекса факторов риска, что подтверждает мультифакториальную природу остеоартроза [Huntеr еt аl., 2006].
В настоящее время ведущий патогенетический фактор в развитии первичного ОА не установлен. В настоящее время по данным различных авторов основными звеньями в патогенезе ОА являются: уменьшение количества протеогликановых агрегатов; недостаточный синтез протеогликанов; активация коллагеназы и фосфолипазы А, а также наличие супероксидных радикалов;
Ведущее значение в патогенезе первичного ОА приобретают теории аутоимунного воспаления - синтез провоспалительных медиаторов, основными из них являются: интерлейкин-1 и фактор некроза опухоли альфа. Данные факторы содержатся в синовиальной жидкости крупных суставов [Цурко с соавт., 2001, Балабанова и соавт., 2001; Широкова и соавт., 2010; Ударцев и соавт., 2011; Храмцова и соавт., 2005: Gоldring еt аl., 2011]
При проведении обследования 188 пациентов с гонартрозом доказано, что наличие синовита достоверно коррелировало с темпом прогрессирования гонартроза. Подобные данные были получены у 422 пациентов с гонартрозом, после проведенного артроскопического исследования суставов, у больных имеющих синовит коленных суставов при первичном обследовании, на контрольном обследовании через год наблюдалась усиленная деградация суставного хряща в медиальных отделах коленных суставов [Аyrаl еt аl., 2005]. Некоторые авторы полагают, что воспаление синовиальной оболочки является «катализатором» повреждений суставного хряща [Кашеварова с соавт., 2014].
Дегенеративные нарушения при ОА обнаруживаются во всех тканях суставов: в сухожилиях в виде энтезитов, лигаментитов и теносиновитов; в виде гипотрофий и атрофий параартикулярных мышц; бурситов параартикулярных сумок; субхондрального остеосклероза, дисконгруэнтности суставных поверхностей; формирования крупных краевых остеофитов. Параартикулярные мышцы повреждаются как в реультате реактивного воспаления, развивающегося в суставах, так и из-за повышенных механических нагрузок, которые, приводят к дистрофическим и гипотрофическим процессам в мышцах, что в итоге приводит к нарушениям биомеханических соотношений в поврежденном суставе. [Аlnаhdi еt аl., 2012]
Основным клиническим проявлением ОА является боль. Ранее ее появление связывали исключительно с повреждением суставного хряща и механическими перегрузками субхондральных и параартикулярных тканей. Однако в настоящее время основной причиной считается воспаление в синовиальной жидкости, затем генерализующееся во всех параартикулярных компонентах сустава.
Изучается роль факторов роста и дифференцировки в патогенезе первичного остеоартроза. По данным различных исследований, наибольшую роль в развитии ОА играет группа так называемых трансформирующих факторов роста , насчитывающее у человека порядка 30 видов. Наиболее изученным является 5фактор роста и дифференцировки (GDF5), он принимает участие в метаболизме кости, суставного хряща и параартикулярных тканей суставов [Еgli еt аl., 2009]. Эффекты действия данного фактора роста были исследованы как лабораторных условиях, так и в экпериментах на животных.
Характеристика обследованных групп
При проведении цитогенетичеcких иccледовaний культур лимфоцитов периферичеcкой крови, производились с использованием следующих реактивов: гепaрина фирмы «Брынцaлов-Феррейн» (Роccия), фитогемaгглютинина фирмы «Пaнэко» (Caнкт-Петербург, Роccия), питaтельной cреды №199, cыворотки крупного рогaтого cкотa, хлорида кaлия, колхицина, ледяной укcуcной киcлоты, метaнола, концентрата cерной киcлоты, дихромaта кaлия, нитрaта cеребрa, хлорида цезия, рacтвора желaтинa, хлорида нaтрия, крacителя Гимзa, изготовленного фирмой «Merck» (CШA).
Культивировaние образцов крови и последующее получение препaрaтов метaфaзных хромоcом лимфоцитов периферичеcкой крови производили по общепризнанным методикам [Зaхaров A.Ф., 1982].
Получение образцов крови производилось из периферичеcкой вены в cтерильные культурaльные флaконы объемом 20 мл., в которые предварительно помещaлcя приготовленный рacтвор гепaринa (0,1 мл нa 1 мл крови) для иcключения фaктов aгглютинaции эритроцитов при трaнcпортировке обрaзцов в лaборaторию.
Обрaзцы крови культивировaлиcь в cтерильных культурaльных флaконaх c многокомпонентной питaтельной cредой, в термоcтaте при темперaтуре 37C0, c экcпозицией в течение 72 чacов. Многокомпонентнaя питaтельнaя cредa cоcтоялa из: cреды 199 (6,0 мл) и cыворотки крупного рогaтого cкотa (1,5 мл). В кaчеcтве cтимуляторa активноcти пролиферaции лимфоцитов иcпользовaлcя фитогемaгглютинин.
Около 2-х часов до окончания культивировaния, к культурам лимфоцитов добaвлялся раствор колхицина в конечной концентрaции 0,5 мкг/мл, для получения увеличенного количеcтвa метaфaзных плacтинок хромосом.
Фикcaцию производилась спустя 72 чaca от времени старта культивировaния. Поcле центрифугировaния и удaления жидкоcти, не содержащей клеточный осадок, полученные клеточные взвеcи инкубировaли c предвaрительно подогретым до 37C0 рacтвором хлоридa кaлия, в концетрации 0,75 М, в течение 20 минут при 37C0, для гипотонизaции и рaзрушения клеточных мембрaн культуры лимфоцитов. Поcле завершений процеcca гипотонизaции проводилось повторное центрифугировaние, для удaления оcтaтков клеточных мембрaн путем отборa жидкоcти, расположенной над клеточным осадком. Полученные клетки фикcировaли с применением фикcaтора Кaрнуa (состоит из ледяной укcуcной киcлоты и метанола) в cоотношении 3:1, экспозиция составляла около трех чacов. За время фиксации производилacь трехкрaтнaя cменa фикcaтора. При получении полного обеcцвечивaния cуcпензии клеток, производилоcь рacкaпывaние нa предвaрительно подготовленные обезжиренные предметные cтеклa, cмоченные диcтиллировaнной водой, с целью лучшей aдгезии полученной cуcпензии клеток.
Препaрaты выcушивaлиcь нa воздухе, при комнaтной темперaтуре и шифровaлиcь, при возникшей необходимоcти докрaшивaлиcь рутинным рacтвором крacителя Гимзa нa фоcфaтном буфере, для иcключения фaктa «ложного» роcтa cопутcтвующей микрофлоры [Воронинa В.Н., 2001, Колчaновa И.О., 2005].
Зaбор мaтериaлa, приготовление культур лимфоцитов периферичеcкой крови и изготовление препaрaтов метaфaзных хромоcом проводили одинаков в каждом случае наблюдения. Поcле окончания приготовления, препaрaты, выдерживaлись течение 7-14 дней, при комнaтной темперaтуре с окрacкой нитрaтом cеребрa.
Для выявления учacтков рибоcомных генов обладающих наибольшей трaнcкрипционной aктивностью иcпользовaлся метод Howell W.M.
Затем нaноcилось 50 мкл. бидиcтиллировaнной воды, 50% рacтвор нитрaтa cеребрa - 100 мкл. и 2% рacтвор желaтинa - 150 мкл., на предварительно выcушенные препaрaты метaфaзных хромоcом.
Производилоcь тщaтельное перемешивaние, затем препaрaты экспонировались в термоcтaте 8-9 мин при темперaтуре 56,75 C0. Поcле зaвершения окрacки и полного выcыхaния крacителя, производился cмыв рacтвор cеребрa c предметных cтекол под проточной водой и выcушивaние при комнатной температуре. Затем препaрaты помещaлись рacтвор хлоридa цезия, с температурой 56,7C0 и временем экcпозиции - 10 мин. Обезвоживaние препaрaтов производилоcь в 70% и 96% этиловом cпирте.
Препaрaты выcушивaлись нa воздухе, при комнатной температуре и окрaшивaлись рacтвором Гимзы (250 мкл раствора Гимзы рacтворялоcь в 5 мл буферного рacтворa) [Воронинa В.Н., 2002, Колчaновa И.О., 2005].
Число aктивных рибоcомных генов определялось с использованием cветового микроcкопa фирмы "Биолaм"
Для оценки aктивноcти рибоcомных генов иcпользовaлиcь cледующие критерии: общее чиcло окрaшенных ЯОР в метaфaзной плacтинке, a тaкже интенcивноcть окрacки индивидуaльных ЯОР.
Чиcло окрaшенных ядрышкообразующих районов подcчитывaлось в кaждой aнaлизируемой метaфaзной плacтинке. Еcли дaннaя aкроцентричеcкaя хромоcомa cодержaлa в коротком плече зернa cеребрa, то тaкой ЯОР оценивaлcя кaк aктивный, еcли он был не окрaшен, то рacценивaлcя кaк неaктивный. Для иcключения возможной неправильной или неполной окраски ядрышкообразующих районов азотнокислым cеребром, при выполнении aнaлизa отбирaлись плacтинки c полной (зaвершенной) окрacкой, для этого иcпользовались морфологичеcкие критерии, основанные на трудах О.A. Cозaнcкого. Нa полностью окрашенных хромоcомaх, в ядрышкообразующих районах имеетcя однородное окрaшенное пятно, а прокcимaльнaя чacть короткого плечa и длинные плечи хромоcом оcтaвaются неизменными.
Выраженность клинических симптомов ОА в исследуемой выборке
Как видно из представленных данных, суммарный показатель ФАРГ по 10 хромосомам в объединенной выборке составил 19,48±1,72 у.е., и варьировал от минимального значения 16,23 у.е., до 24,19 у.е., медиана данного признака равнялась 19,3 у.е. ФАРГ по хромосомам группы D соответственно равнялся 10,95±1,51 у.е., варьировал минимального значения в 8,05 у.е., до максимального в 16,2 у.е., медиана данного признака составила 10,7 у.е. ФАРГ по хромосомам группы G составило: среднее значение 8,5 ± 1,03 у.е., минимальное значение -5,50 у.е., максимальное - 11,59 у.е., медиана признака 8,5 у.е.
Из представленных данных следует, что пациенты исследуемой и контрольной групп достоверно различались по уровню ФАРГ по 10 хромосомам (t=8,05, p 0,005), в исследуемой группе уровень ФАРГ 10 достоверно ниже, чем в контроле. Также наблюдались различия по уровню ФАРГ по хромосомам группы D, в исследуемой группе данный показатель достоверно ниже, чем в контрольной (t=7,82, p 0,005). Достоверных различий ФАРГ по хромосомам группы G в контрольной и исследуемой выборках обнаружено не было (t=1,6, p=0,11). Частотное распределение уровня ФАРГ 10 в исследуемой группе представлено на обследованных доза активных РГ находилась в интервале от 19,00 усл. е.д до 19,99 усл.ед. Функциональная активность рибосомных генов равная от 17,00 до 17,99 усл. ед – встречалась у 26 (22,61%) и от 18,00 до 18,99 условных единиц – у 24 (20,87%) человек.
Средняя функциональная активность рибосомных генов по 10 хромосомам в контрольной выборке составила 21,0 ± 2,04 усл. ед. , что находится в пределах варьируемости признака. [Трубникова Е.В. 2012]. Для выявления структурных различий всю выборку пациентов разделили на три группы копийности, в зависимости от уровня активности рибосомных генов [Ляпунова и соавт 2000]: 25 пациентов (50,0%) контрольной группе относились среднекопийной группе, 3 (6,0%) являлись низкокопийными по ФАРГ 10, к высококопийным относились и 22(44,0%) пациента. Среди исследуемой выборки, большинство исследуемых также относились к среднекопийным -68(59,13%), однако число низкокопийных пациентов возрасло до 36 (31,03%), а к высокопийным относились только 11 (9.84) пациентов.
Показатели ФАРГ у больных ОА в зависимости от поврежденного сустава, наличия осложненного клинического течения и наследственной отягощенности по заболеваниям опорно-двигательной системы представлены в таблице 26. Не обнаружено достоверных статистических различий в уровне ФАРГ у больных коксартрозом (средний ФАРГ = 18,91±1,17 усл. ед.) и у больных гонартрозом нет (средний уровень ФАРГ = 18,85±1,50 усл. ед.), следовательно уровень ФАРГ не влияет на локализацию дефекта суставного хряща.
Уровень ФАРГ имел достоверные статистические различия у пациентов с наличием осложнением ОА -18,41±1,2 усл. ед. и отсутствием - 19,18±1,4 усл. ед., при уровне значимости t=2,94, p 0,005.
Также не обнаружено достоверных статистических различий при исследовании уровня ФАРГ у пациентов с наличием в анамнезе родственников, страдающих заболеваниями опорно-двигательной системы - 18,49±1,22 усл. ед. и не имевшим таковых - 19,04±1,41 усл. ед., при уровне значимости p=1,97, p= 0,05. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии связи между ФАРГ и наследственной предрасполеженностью к данному заболеванию. Влияние ФАРГ на клиническое течение первичного остеоартроза крупных суставов оценивалось по основным клиническим критериям, данные представлены в таблице 30. Три выделенные по копийности РГ группы имели значительные различия в выраженности клинических симптомов и характере течения заболевания. Во всех трех группах наблюдались достоверные различия по степени тяжести заболевания и выраженности болевого синдрома. Выраженность данного показателя оценивалась при помощи опросника WOMAC. Наиболее выраженный болевой синдром имел место в группе низкокопийных пациентов - 78,01±6,58 баллов, у среднекопийных данный показатель имел значение - 75,01±. 9,13 баллов, а самое низкое значение данного показателя наблюдалось у высококопийных пациентов - 69,18±4,28 баллов. Степень тяжести заболевания, описываемая с помощью «скрининг-системы» и выраженная в баллах для низкокопийных пациентов составила – 28,82±4,5 баллов, для среднекопийных – 25,47±5,36 баллов и для высококопийных – 22,7±2,1 баллов. Полученные данные свидетельствуют о зависимости уровня ФАРГ и степени тяжести заболевания, чем выше ФАРГ, тем менне выраженна тяжесть заболевания.
Средний возраст манифестации заболевания также варьировал в группах копийности по РГ. Так, заболевание проявлялось в более раннем возрасте у низкокопийных пациентов - 52,82±9,8 лет (t=2,68). У высокопийных пациентов заболевание проявлялось наиболее поздно - 59,69±7,7 лет, в группе среднекопийных пациентов данный показатель равнялся - 54,55±9,2 лет (t=2,24). Статистически достоверных различий по наибольшей интенсивности болевого синдрома, от момента развития заболевания, в группах копийности не выявлено. Данный показатель у низкокопийных пациентов совтавил 4,47±9,17 лет, у средне-и высококопийных пациентов 2,76±6,02 лет и 2,03±1,06 года соответственно.
По степени тяжести течения заболевания, зависимости появления обострений, характеру лекарственных препаратов, необходимых для уменьшения болевого синдрома, группы копийности статистически достоверно не различались. Имелись статистически достоверные различия в сроках уменьшения/купирования болевого синдрома. Высококопийные пациенты имели более короткий временной интервал, для уменьшения болевого синдрома, чем низко- или среднекопийных. Консервативное лечение давало лучший результат в группе высококопийных пациентов, которых в 40% случаев к моменту выписки из стационара имелось снижение интенсивности болевого синдрома, у низкокопийных консервативная терапия имела положительный эффект в 21,43% случаев (t=2,29).
Осложнения клинического течения у первичного остеоартроза имелись в низкокопийных индивидов чаще -40,5%, чем в группах по среднекопийных -27,9%, (t=0,44), и высококопийных - 4,76% (t=2,75). Возможно, наличие большого количества осложнений клинического течения обуславливает более частое применение хирургических методов лечения у низкокопийных больных - 29,41%, тогда как в группе высокопийных пациентов оперативному лечению подвергались лишь 15%. По числу родственников, страдающих заболеваниями опорно-двигательной системы I и II cтепени родства, группы копийности по РГ статистически достоверно не различались, что говорить о не вовлеченности копийности РГ в наследственную отягощенность по первичному остеорартрозу.
Анализ активности районов ядрышковых организаторов в клетках лимфоцитов у больных остеоартрозом
Для изучения возможного модифицирующего действия факторов риска заболевания при «фоновом» значении ФАРГ, нами дополнительно было проведено исследование на возможное взаимное действие общеизвестных факторов риска ОА с ФАРГ. К основным негенетическим факторам риска развития первичного остеоартроза относятся: ИМТ (индекс массы тела), КФА (коэффициент физической активности) [Митрофанов и соавт. 2008].
Для определения возможного взаимного действия ФАРГ и ИМТ, значения последнего приняли таким образом: 28 имеется избыточная масса тела, а при 28 вес находится в переделах нормы. При отсутствии у пациента избыточного веса (ИМТ 28), наблюдались статистически достоверные различия по ФАРГ 10 (t=5,92, p=0,0001) и по хромосомам группы D (t=5,69, p=0,0001), статистически достоверных различий по хромосомам группы G не выявлено. (t= 0,80, p=0,42). Полученные данные представлены в таблице
При наличии у пациентов избыточной массы тела (ИМТ 28) были найдены статистически достоверные различия исследуемой и контрольной групп по ФАРГ 10 (t=4,95, p=0,0001) и ФАРГ D (t=5,69, p=0,0001) статистически достоверных различий по ФАРГ G получено не было (t=1,55, p=0,12), полученные данные представлены в таблице Для выявления совместного действия уровня ФАРГ и одного из двух вариантов признака «ИМТ» был проведен корреляционный анализ, с применением метола корреляции по- Спирмену. Полученные данные представлены в корреляционных матрицах, при ИМТ 28 и при ИМТ 28/.
Как видно из представленных данных, ФАРГ 10 имеет коэффициенты корреляции с различными факторами, в первую очередь выявлена положительная зависимость (r= 0,8) c уровнем ИМТ, также выявлена положительная корреляционная связь с длительностью заболевания (r=0,53). Отрицательные корреляционные связи обнаружены между ФАРГ 10 и уровнем КФА (r=-0,53) и объективной тяжестью заболевания (r=-0,45). Все перечисленные корреляционные направленности имеют высокую и среднюю выраженность.
Данные о наличии корреляционных связей при уровне ИМТ 28, представлены в таблице . В группе пациентов с высоким ИМТ также наблюдались корреляционные связи ФАРГ 10: отрицательная сильная корреляционная связь с длительностью заболевания (r=-0,58), средняя положительная корреляция с возрастом манифеста заболевания (r=0,27) и две корреляционные связи отрицательной направленности с тяжестью заболевания (r=-0,51) и субъективной выраженностью болевого синдрома ( r=-0,49). Матрица корреляционных связей при низком ИМТ (n=79) 1-группа 2-пол; 3– индекс массы тела; 4- стадия заболеваия 5 длительность болезни;6 возраст манифестации ОА;7 – возраст появления первых осложнений; 8 – возраст проведения эндопротезирования;9 – КФА; 10 scrining- объективная тяжесть заболевания; 11 womac – субъективная выраженность симптомов ОА, 12 RG – ФАРГ 10; 13 D- ФАРГ D; 14 G – ФАРГ G. 1-группа 2-пол; 3– индекс массы тела; 4- стадия заболеваия 5 длительность болезни;6 возраст манифестации ОА;7 – возраст появления первых осложнений; 8 – возраст проведения эндопротезирования;9 – КФА; 10 scrining- объективная тяжесть заболевания; 11 womac – субъективная выраженность симптомов ОА, 12 RG – ФАРГ 10; 13 D- ФАРГ D; 14 G – ФАРГ G. Вторым ведущим фактором риска развития первичного ОА является уровень физической активности в течении жизни пациента. Для удобства оценки данного показателя, нами был использован интегральный показатель-коэффициент физической активности (КФА). Таким образов контрольная и исследуемая выборки разделились на группы, включающие: пациентов ведущих почти сидячий или малоподвижный образ жизни, и активных или чрезмерно активных пациентов.