Введение к работе
Актуальность тем». В последние годы метод дозревания и оплодотворения оспитов крупного рогатого скота находит все более широкое применение в практике животноводства. Полученные с помощью оплодотворения ю- vi tr-o эмбрионы используют для трансплантации, а такте для разработки методов клеточное и генетической инженерии. Однако нестабильность результатов и невозможность стандартизации технологических параметров проведения экспериментов вызывают необходимость изучения процессов, моделирующих события, отражающие механизмы фолликуло- и оогенеэа {Suma^lc , 1993).
Как известно, у крупного рогатого скота в процессе селекции фолликулов, завершающемся доминированием одного из них, вовлекайте." паракринные, эндокринные и аутокринные сигналы. Детальное понимание отих процессов, определяющих рост и дифференцировку опуляторных фолликулов у крупного рогатого скота, является, предпосылкой для развити" новых методик и усовершенствовании уже существующих режимов контроля за овуляцией, суперовуляїріей и дозреванием ооцитов {Япа-лссиг- / , I99D. Моделирование процесса дозревания ооцитов в культуральних средах с клеточными элементами фолликула, в частности, с гранулезой позволяет определять роль-фолликулярного эпителия в завершении мейоза, приобретении компетенции созревших ооцитов к дальнейшему оплодотворения и потенции полученных эмбрионов к пролонгированному развитию.
Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось выяснение и уточнение влияния клеток гранулезы и продуктов их секреции на ме/стические преобразования хромосом у коров, оплодотворение ооцитов и развитие эмбрионов; определение характера взаимодействия соцнта и клеток кумулюса в системе ооцит-кумулюс при ік гнефолликулярном дозревании. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
изучить характер ооцит-кумулгасных взаимодействий при созревании ооцитов с использованием различных культуральних систем;
гыявить хромосомные нарушения в ооцитах в процессе их дозревания в различных культуральних системах и типы хромосомных нарушений п эмбрионах крупного рогатого скота, полученных
/к. і'і/«! в условиях применения клеток гранулезы;
охарактеризовать пролиферативнуга активность клеток грану-лезы при воздействии на них некоторых биологически активных веществ (белков фолликулярной жидкости - Ш'К , сыворотки крови, гормонов, факторов роста) путем изучения синтеза ДНК и клетках;
определить эффект гиперконцентрацин эстрадиола, как одного из продуктов секреции клеток гранулези на мейоз ооцитов коров.
Научная новизна. Разработана система культивировании ооци-тов на основе бессывороточных сред, кондиционированных клетками гранулезы. В качестве заменителя сыворотки предложены ЙН молекулярной массой свыше 65 кДа. Впервые в условиях применение предложенной системы изучены временные параметры созревания ооци-тов, получены эмбрионы на стадиях морулы и бластоцисти.
Установлен характер влияния рекомбинантного бычьего соматотропного гормона (6СТГ) на завершение мейоза ооцитов коров. Выявлены оптимальные концентрации эстрациола, 6СГГ, благоприятно влияющих на созревание ооцитов коров и их оплодотьоряемость.
Практическая значимость. Предло«аны методы культивирования ооцитов коров с использованием культуры, клеток гранулезы на основе бессывороточных сред, а также добавки 6СЇГ ь среды (в концентрации b нг/мл), позволяющие повысить выход оплодотворенных яйцеклеток и ранних эмбрионов на стадиях морулы и бластоцисти.
Апробация работы. Основные результаты исследований доложены и обсуждены на отчетах лаборатории культивирования эмбрионов в I9bb-I993 гг., на аспирантских сессиях 19(39-1991 гг., на Всесоюзной научной конференции "Физиология продуктивных животных -решению Продовольственной программы СССР" (Тарту, I9C9), на 1-й Международной научной конференции молодых ученых и специалистов (Киев, 1994), на Международном симпозиуме "Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов сельскохозяйственных животных" (Санкт-Петербург, 1994).
Публикации. По теме исследований опубликовано 9 работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и предложений, списка использованной литературы, включающего 185 источников, в т.ч. 140 иностранных. Работа изложена на //^страницах машино-