Введение к работе
Актуальность проблемы. Вопрос об организации эукариотического генома, количестве генов' в геномах высших организмов и аспектах их регуляции- является фундаментальной проблемой биологии. Тесно связанным с данной проблемой является вопрос о структурно-функциональной организации интерфазных хромосом. Drosophila melanogaster в настоящее- время представляет собой модельную систему, наиболее полно изученную цитологически и генетически, но, несмотря на огромное количество данных, вопросы организации и функционирования генома дрозофилы остаются решенными не до конца. Детальный анализ сравнительно небольших участков генома Drosophila melanogaster, используя комбинацию различных подходов, представляется наиболее информативным для разрешения данной проблемы. Цель и задачи исследования. Целью данной работы является молекулярно-генетический анализ района 9F12-10A7 и характеризация последовательностей индивидуального хромомера - диска 10А1-2, расположенного в данном районе. Исходя из этого конкретные задачи данного исследования состоят в следующем:
-
Молекулярное клонирование района 9F12-10A7, включенного в делецию Df(1)v13, методом хромосомной "ходьбы"
-
Локализация точек разрыва хромосомных перестроек в районе на физической карте
-
Локализация инсерций Р-элементов в районе 9F12-10A7 на физической карте.
-
Анализ транскрипционной активности последовательностей диска ЮА1-2 на разных стадиях развития дрозофилы и в разных тканях
-
Более подробная характеризация транскрипционно активных участков, соответствующих "молчащей" ДНК в диске ЮА1-2.
Научная новизна. Молекулярно-генетически проанализирован участок политенной хромосомы, детально изученный ранее цитологически и генетически. Были сопоставлены цитологическая', генетическая и молекулярная карты в районе 10А1-2-10А7. Показано, что "молчащая" ДНК в диске 10А1-2 содержит участки, транскрипционно активные на разных стадиях развития дрозофилы и в нескольлих тканях. Установлено, что ДНК в составе диска 10А1-2 является транскрипционно
неактивной в клетках слюнных желез. Выявлен и охарактеризован новый локус в диске 10А1-2, не обнаруженный при цитогенетическом анализе. На основании проведенных экспериментов предсказано наличие до 20 функционально неродственных единиц (генов) в составе диска 10А1-2. Получены и частично охарактеризованы кДНКовые клоны, соостветствушие определенным ранее генетическим локусам 1(1)ВР5 и 1(1)ВР8. Практическая ценность. Полученные в работе результаты имеют теоретическое значение для дальнейшего анализа структурно-функциональной организации интерфазных хромосом и эукариотического генома.
Апробация работы Материалы диссертационной работы были представлены на VI Всесоюзном совещании по структуре и функции хромосом (Пушино,' 1988); 6-ом (Одесса, 1989) совещании по генетике дрозофилы; vu Всесоюзном симпозиуме "Молекулярные механизмы генетических процессов" (Москва, / 1990); 9-ом Всесоюзном симпозиуме "Структура и функции клеточного ядра" (Гродно, 1990).
Публикации. Основные результаты диссертационной работы изложены в четырех научных публикациях.
Структура и обЪем работы. Диссертация состоит из введения, шести глав, разделенных на параграфы, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Общий объем работы 158 страниц, 2 таблицы и 21 .рисунок.