Введение к работе
Актуальность темы. Важным направлением современной биотехнологии в животноводстве, позволяющим более полно использовать генетический потенциал ооцитов самок, является экстракорпоральное оплодотворение созревших in vitro ооцитов. Кроме практического значения в воспроизводстве сельскохозяйственных животных, особенно однополого вида - крупного рогатого скота, экстракорпоральное оплодотворение ооцитов и культивирование ранних эмбрионов могут рассматриваться как база для разработки перспективных методов клеточной и генетической инженерии - деление эмбрионов, клонирование, создание генетических мозаиков и перенос генов в зиготы и ранние эмбрионы.
В настоящее время достигнут существенный прогресс в биологии оплодотворения in vitro у ряда млекопитающих. Так, у 20 видов млекопитающих зарегистрировано оплодотворение ооцитов вне организма. У некоторых видов после пересадки эмбрионов реципиентам получено живое потомство. Однако в технологии экстракорпорального созревания и оплодотвореїшя ооцитов имеется рад нерешенных задач. И одна из них - создание оптимальных условии созревания и оплодотворения, обеспечивающих высокий выход ооцитов, компетентных к оплодотворению и дальнейшему развитию в эмбрионы на стадиях морцлы и бластоцисти.
Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось изучение влияния тканевой культуры фолликулов на мейотичеокое созревание и оплодотворение иг vitro ооцитов коров. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
разработать оптимальные условия созревания ооцитов на основе тканевой культуры фолликулов;
исследовать динамику мейотического созревания ооцитов на тканевой культуре фолликулов;
изучить влияние тканевой культуры фолликулов на оплодо-творяемость ооцитов и выход эмбрионов;
изучить мейотпческие преобразования хромосом в ооцитах коров, прокультивированных в условиях тканевой культуры с ис- . пользованием гормонов и белков фолликулярной жидкости;
провести цитоморфологическую оценку структурных элементов ткани фолликулов при их культивировании.
Научная новизна работы. Разработан способ культивирования ооцитов на основе тканевой культуры фолликулов. Предложена оре-да культивиривания для тканей фолликулов, обеспечивающая оптимальные условия созревания ооцитов. Изучена динамика созревания ооцитов в условиях тканевой культуры фолликулов. Установлено, что включение е среду культивирования ткани фолликулов оказывает положительное влияние на мейотическое созревание и оплодотворение ооцитов коров. Впервые получены эмбрионы на стадиях морулы и бластоцисти при использовании разработанной системы культивирования.
Практическая значимость работы. Предложен модифицированный метод культивирования ооцитов коров с использованием тканевой культуры фолликулов, позволяющий повысить выход оплодотворенных яйцеклеток и ранних эмбрионов на стадиях морулы и бластоцисти. Данный метод рекомендуется использовать в биотехнологии культивирования и. оплодотворения ооцитов коров.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены на отчетных сессиях аспирантов ВНИИРГЖ (1990, 1991 гг.), на Всесоюзном научно-техническом совещании "Проблемы развития биотехнологии в животноводстве" (Дубровицы, 1990), на научно-практической конференции "Биотехнология и воспроизводство в животноводстве" (Горки, 1991).
Публикации. По теме диссертации опубликовано три работы.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, результатов и обсуадения, выводов и списка использованной литературы, включающего хаб источников, в том числе 142 иностранных. Работа изложена на log страницах машинописного текста и содержит I рисунок, 13 таблиц, f микрофотографий.