Введение к работе
Актуальность проблемы. В современных условиях глобального загрязнения окружающей среды особое мест опюдиіся разрабоїко систем профилактики неблагоприятного воздействия конгамннантов на органи ш, в которой важная роль принадлежит целенаправленной рационализации алиментарного фактора с целью придания ему лечебно-нрофнлактнческнх эффектов (Г.И. Бондарев ,А.Н.Мартинчнк,198Л; 198-4; В.Д. Ваи.чанен, (985; В.А.Доценко,Г.И.Боігдарсп,А.Н.Мартннчик. 1987:В.АТутельян.Г.И. Ь'онда-рев, А.А^Мартинчик, 1987; В.Л.Доценко .1988;!990:В.А.Княжев с соапт., 1993;В.А.Тутельян, 1993; Н.Б. Рымарь-Щербина с соавт., 1995;В.Г. Новоселов, 1996). В настоящее время данный раздел нутрноцнологии с учетом указанного выше интенсивно развивается в направлениях изыскания новых источников нутрнцевіиков, обоснования их лечебно-профилактического действия (В.И.Смоляр с соавт., 1993;В.А.Тугельян, 1993). В данном плане осі то гея невостребованными огромные живогные и растительные ресурсы, прежде всего, в свяли с отсугсганем научного обоснования их оздоровительных эффектов. Следует огметип>, что в целях профилактики и лечения остаются невостребованными не только используемые в питании населения пищевые продукты, но и неут или тируемое сырье, которое можег стать экономичным нсгочииком получения эффективных нутрицевтиков ( Л.И.Борисочкнна,19ЯЗ;А.А.Аргемо!1 с соавт., 1988;В.И.Смоляр ,1988,В.Н. Корзун с сопсг.,1993;В.А. Тутельян.1993).
Особенностью агропромышленного комплекса Дальневосточного региона является развитое оленеводство, а также лицензированная добыча морских млекопитающих, популяции которых в последние годы в связи с эффективными природоохранными мероприятиями значительно возросли, и стал возможен регулируемый их промысел в большом обьеме, значимом для признания данного сырья в качестве способного внести весомую квоте в обеспечение полноценности пищевых рационов (А.М.Юдин, 1973,1988; Ж.Б. Левинтон,1989;П.А. Моисеев, 1989 ). В месте с тем при комплексной переработке данных представителей фауны Дальнего Востока остаются неутилизнруемыми значительные количества крови, которая, если учитывать результаты изучения крови других млекопитающих , а частности крупною рогатого скота, может содержать важные, зачастую дефицитные в питании населения ігутриентьі (белок.минеральные вещества,ряд витаминов), ферменты и другие биологически активные компоненты (Л.М.Юдин,1973;1988;Ю.И.Добряков,1977;В.Г.Высоцкий,И.С.Зилова,198 6;В.Н. Корзун с соавт., 1993), что можег обусловил, возможность получения изданного сырья не только пищевой продукции с целью рационализации рационов питания населения, но й специализированных продуктов питания лечебно-профилактической направленности (Т.Ф.Чнркнна с соавт.. 1984; В.А. Петров с соавт., 1995).
При утилизации.крони наземных и промысловых морских млекопитающих Дальнего Востока, п частности для пищевых целей, и создания на основе данного сырья лечебно-профилактических продуктов, могут в какой-то мере быть решены экологические проблемы, связанные с дополнительным органическим загрязнением объектов окружающей среды (И.В. Клчнветтер, 1980: В.П.Зайцев с соавт..1980;В.А.Петров с соавт.,1988; АЛ. Монисов с соавт.1994).
С учетом указанного выше становится очевидной необходимость многоплановых технологических и медико-биологических исследований, направленных на рациональную утилизацию и внедрение в питание населения продукции на основе экономичного сырья, которые до настоящего времени тіе проводились, о чем спидетелъстпуют результаты информационного поиска но теме данной работы. Однако представляются безусловно актуальными, наряду с технологическими разработками в указанном направлении, широкие медико-биологические исследования, которые в первую очередь должны быть направлены на изучение вопросов безопасности продукции, создаваемой на основе крови наземных и промысловых морских млекопитающих (В.А.Тутельян,1988; 1993;В.А.Доценко,1990;А.А. Монисов ссоав>..1994;И.Р.Свяхолская, 1995).
Не менее важным аспектом комплексной оценки крови как пищевого сырья и продукции на его основе является изучение пищевой ценности, для чего необходимы широкие исследования химического состава новых пищевых обьектов с целью определения их места в общей классификация пищевых продуктов. Результаты данных исследований могут стать основой для прогнозирования в попой пищевой продукции лечебно-профилактических свойств, которые должны быть научно обоснованными, п частности в рамках модельных экспериментов.
Таким образом, настоящая работа ( № государствен! :ой регистрации темы 01930008573 ) , предпринятая с целью решения технологических и медико-биологаческих вопросов пищевого использования ранее неутили-зируемого, нетрадиционного, экономичного сырья животного происхождения представляется весьма актуальной. Актуальность проведенного исследования подчеркивается и таким фактом , что оно осуществлено в рамках задач, определенных Постановлением Правительства России № 158 от 28.02.94 "О государственной программе неотложных мер по обеспечению саниторно-гипіеїшческого благополучия, профилактике инфекционных и неипфекциошшх заболеваний и снижению уровня преждевременной смертности населения на 1994-1996 гт", рядом государственных научно-технических и научно-исследовательских программ.
Цель и задачи исследования. Целью работы явилась разработка и медико-биологическое обоснование пищевого использования нетрадиционного сырья животного происхождения, лечебно-профилактических сиойсги пищевой продукции, созданной на его основе .
Для достижения укаїашюи пели были поставлены и последовательно решены следующие основные задачи:
изучить химический состав продукции из кропи пятнистых и северных оленей, белухи дальневосточной, серого кита, тюленя акиба;
определить активності, аитиоксидаптных ферментов ( гдутатионпе-роксндаза,супсроксиддпсмугаэа) в гематогенах in кропи наземных и промысловых морских млекопитающих:
провести комплексную токсиколого-гигиеничееккую оценку продуктов из крови наземных и промысловых морских млекопитающих по критериям общетоксического действия;
изучить возможные отдаленные последствия потребления гематогенов с исследованием эмГфиогокснчсского, тератогенного, гонадотоксиче-ского, сенсибилизирующего и мутагенного эффектов действия;
провести комплексную оценку микробной контаминации на этапах технологической обработки нетрадиционного сырья животного происхождения и гематогенов, разработанных ни его основе;
в рамках токсиколого-гигиепических исследований вмяпить положительные эффекты действия потребления продукции из крови наземных и промысловых морских млекопитающих на организм животных;
в условиях модельного эксперимента изучить возможное радиопротекторное действие гематогенов из кропи пятнистого и северного оленей;
iia экспериментальной модели железодефицнтной анемии обосновать антианемический эффект гематогенов из крови промысловых морских м ле ко п ига ю щ их;
разработать технологию получения гематогенов из крови пятнистого и северного оленей и нормативно-техническую документацию (НТД) па их производство;
разработать и внедрить методические рекомендации но использованию гематогенов из крови наземных млекопитающих в лечебно-профилактическом питании при воздействии радиационного фактора, же-лезодефицитных апеми х.
Научная новизна и теоретическая згшчігуіость работы. Научная новизна предпринятого исследования определяется прежде всего тем, что оно является приоритетным, то есть какие-либо аналоги в известной литературе отсутствовали. В научном плане безусловный интерес представляют результаты изучения химического состава обьектов исследования, так как они позволяют прогнозировать медико-биологические! эффекты их пищевого использования. В частности выявлено, что гематогени из крови изученных наземных и промысловых морск7іх млекопитающих отличаются высокой активностью аитиоксидаптных ферментов, а гематогени из крови промысловых морских млекопитающих могут стать важным поставщиком гемового, хорошо усвояемого железа, меди, кобальта, цинка и селена. В весьма значительных количествах в гематогенах из крови пятнистого и се-
верного оленей содержатся витамины А, С и Е. Результаты химических исследований закже не свидетельствовали о возможности каких-либо неблагоприятных последствий пищевого использования этих продуктов.
Таким образом, были получены новые научные данные, позволя)о-щие предполагать лечебно-профилактические эффекты действия продуктов из нетрадиционного сырья животного происхождения.
Весьма ценным в научном плане результатом работы является доказательство гарантированной безопасности пищевой продукции из крови наземных и промысловых морских млекопитающих при ее длительном пищевом использовании но критериям общетоксического, отдаленных и специфических последствий действия. Также безусловно новыми и весьма важными являются результаты токсиколого-гигненических исследований свидетельствовавшие о целом спектре положительных эффектов при потреблении продукции из крови указанных выше животных.
Впервые получены научные данные о составе микрофлоры изученных наземных млекопитающих как сырья для производства пищевой продукции на различных этапах его технологической обработки, обоснованы вопросы обеспечения се микробиологической безопасности.
Приоритетными являются результаты исследований продукции из крови наземных и промысловых морских млекопитающих, полученные в модельных экспериментах, которые свидетельствовали о выраженном антианемическом действии гематогеноп из крови морских млекопитающих и антиоксидантом действии гематогенов из крови наземных животных, обусловивших, в частности, радиозащитный эффект при внешнем облучении.
Многоплановые исследования нетрадиционного сырья животного происхождения позволили (рис.1.) обосновать методические подходы в его медико-биологической оценке в целях рационализации алиментарного фактора, поиска новых источников эссенциальных нутрицевтиков и комплексного изучения их лечебно-профилактического действия, которые в конечном счете могут быть оценены как новая концепция научных изысканий в области нутрициологии. ,
Практическая ценность работы. Результаты проведенных научных исследований открываю! новые возможности практического использования ранее невостребованного сырья для производства нутрицевтиков, обеспечивающих при широком их пищевом использовании значительные медико-социальный и экономический эффекты. Разработанные и внедренные гематогени из крови изученных животных могут быть использованы в системах лечебного питания при заболеваниях с сопутствующими железо-дефицитными состояниями, а также при первичных анемиях, имеющих значительное распространение во всем мире. Доказана возможность прак-іпческого использования гематогеноп из кропи наземных млекопитающих в условиях повышенного внешнего радиационной) облучения.
Объекты исследования
г СІ
~%
Химические и биохимические
исследования
Экспериментальное изучение*
лечебно-профилагаического |
действия I
Качественные и количественные показатели содержания :
липидов;
бежов ;
углеводов;
витаминов;
минеральных веществ. ] Активность ферментов акшоксидакгоой системы защиты.
Качественные и количественные показатели содер-жаши ксенобиотиков.
Качественные и кошргсетвенные показатели эффективности действия на орггнш-мешюм, клеточном, молекулярном и биохимическом уровнях.
о»
Направления исследования
Исследуемые
показатели
штштштиття»
Общетокснческое действие в условиях хронического опыта.
Отдаленные н специфические последствия: эмбрнотоксичеекое, тератогенное, гонадотокенче-ское. мутагенное, канцеро-j генное и сенсибилизирующее действия.
Соответствие продовольственного сырья и пищевых продуктов требованиям микробиологической безопасности.
Состав микрофлоры продовольственного сырья и пище-вы* продуктов. Оценка эффективности микробной декоиташшашш при обработке сырья.
животного
Рис.1. Методические подходы к медико-биологической оценке нетрадиционного сырья животного происхождения.
Практическое значение для обеспечения безопасности новой пищевой продукции из кропи наземних млекопитающих, а также для разработки рациональных приемов ее бактериальной деконтаминацни, имеют результаті изучения микробиологических характеристик исследованных обьектои па различных .этапах их технологической обработки.
Полученные данные по характеристике химического состава, отражающие основные показатели пищевой ценности изученных обьектои, могут быть использованы п качестве компонентов соответствующих справочных изданий и классификаций пищевых продуктов.
Результаты работы могут явиться базисными для развитая дальнейших исследований в направлении изыскания нового, нетрадиционного сырья для получения пищевых продуктов с высокими показателями и, в частности, биологической ценности. Регламенты выполнения исследования могут быть принять! в качестве алгоритма для разработки нугрицевтиков.
Внедрение результатов работы в практику па региональном уровне осуществлено в виде:
- методических рекомендаций "Коррекция железодефицитпых со
стояний гематогенами из крови промысловых морских млекопитаю-
щих'Хсовместно с Н.М.Мотавкиной,Т.К.Каленик) и "Применение гемато-
геиоп из крови пятнистого и северного оленей в профилактике последствий
ионизирующей раднации"(совместно с В.А.ПетровымД.К.Каленик), ут
вержденных Главным врачом Приморского краевого центра государствен
ного санэпиднадзора и начальником Управления здравоохранения Адми
нистрации Приморского края от 03.01.96 г.);
- методической инструкции "Сбор и заготовка крови оленей. Хране
ние. Методы дезинфекции сырья, оборудования" ( утверждены Главным
ветеринарным инспектором Приморского края от 01.01.1995 г.).
К важным практическим результатам можно отнести разработку НТД : ТУ 429-082-003-92 "Гематоген сухой"( соавт.Н.С.Мотавгаша, Т.К. Каленик, ВА Петров). ТУ 429-021-001-92 " Пантогем"(Н.М. Ишкова,М.Д. Ходосова); ТИ па каждый из указанных продуктов и внедрение в производство гематогенов из крови пятнистого оленя, эффективность которого как стимулятора гемопоэза и ангиоксиданта установлена в клинических условиях, что удостоверяется соответствующими актами внедрения Городской больницы № 1 г. Владивостока, Родильного дома № 3 г. Владивостока. Высокая эффективность гематогенов из крови пятнистого оленя как нугрицевтика документально подтверждена АООТ " Фармация".
Па разработанные способы стимуляции гемопоэза получены патенты РФ : Патент № 20П4081 (соавт.Н.С. Мотавкина,Е.С.Игорцева,Т.К. Кале-ник)от 15.06.1994 и Патент №20117493 (соавт:Т.К.Каленкк)от 15.08.1994
Результаты исследований являются значительным вкладом в реше-
ниє проблем малоотходного использования пищевого сырья и его наиболее приемлемого освоения с теологических позиций, о чем свидетельствуют акты внедрения, полученные or АО "Владтехнонарк" и АО "Дальпушнина". Экономический эффект внедрения научных исследований в оленеводческих хозяйствах АО"Дальнушнина" с 1992 по 1995 год составил 150 000 000 рублей.
Полученные в работе дачные использованы в учебном процессе при преподавании гигиены питания и микробиологии на соответствующих кафедрах Дальневосточного государственного медицинского университета и Владивостокского государственного медицинского универеиіега, в вопросах рационализации технологии пищевой продукции - в Дальневосточной государственной академии экономики и управления.
Результаты работы используются в научных исследованиях Тихоокеанского научно-исследовательского центра рыбного хозяйства и океанографии ( ТИНРО-центр), в Дальневосточной государственной академии экономики и управления, в Дальневосточном государственном институт* рыбной промышленности и хозяйсгва (технический университет).
Аироба щш диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены па: I Всесоюзной конференции "Исследование и освоение Мирового Океана"(Владивосток,1976), научно-практической конференции "Медико-социальные аспекты проблемы Человек-Океан" (Владивосток, 1988), региональной научно-практической конференции "Иммуномодуляторы природного происхождения"( Владивосток, 1990), 10-й региональной научной конференции " Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физических и патологических состояни-ях"(Челябииск,1990), Всесоюзной конференции " Новые лекарственные средства, приборы, методы диагностики и лечения пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС"(Харьков,1991), Межгосударственной конференции "Комплексная переработка пищевого сырья и основные направления расширения ассортимента продуктов нигания"(Владипосток,1993), 2 Internationel Symposiun. of the Japan-Russia Medical Exchange Foundation and Nea Region (Vladivostok, 1994), Всероссийской конференции " Антропогенные воздействия на здоровье человека"(Калуга, 1994), Third International Symposium of the Japan-Russia Medical Exchange Foundation and the Japan-Russia Medical Collaborative Organization on the Methods and Progresses of Japan-Russia Medical Exchange (Osaka,l995), Международной конференции "Проблемы качества потребительских товаров и коммерческой деятельности в условиях рынка"( Владивосток, 1995), региональной научно-практической конференции "Медико-биологические аспекты рационализации питания на Дальнем Востоке" ( Владивосток, 1995), Координационно-гигиенической комиссии Владивостокского государственного медицинского университета (Владивосток, 1996).
Диссертация обсуждена на Координационно-гигиенической комис-
сии Владивостокского государственного медицинского университета совместно с кафедрами гигиены, микробиологии и получила положительное заключение.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 30 печатных работ, перечень которых приведен в конце автореферата.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Химический состав пищевой продукции из невостребованной ранее крови наземных и промысловых морских млекопитающих отличается специфическими особенностями, позволяющими прогнозировать широкий спектр ее лечебно-профилактических эффектов.
-
Гематогени из изученного сырья являются безопасными при длительном пищевом использовании по критериям общегоксических, отдаленных и специфических аффектов действия, а также по микробиологическим показателям при разработанных технологических регламентов.
3. Изученные гематогены обладают по данным токсиколого-
гигиепических экспериментов стимулирующим кроветворение действием,
антимутагенным эффектом, активируют гемопоэз.
-
Кровь исследованных наземных и промысловых морских млеко-пи гающих является высокоэффективным сырьем для получения ферментов антиоксидантиой защиты.
-
По данным модельных экспериментов гематогены из изученного сырья обладают выраженным аитиохеидантным действием и высоким антианемическим эффектом, что позволяет при широком их целенаправленном использовании снизить актуальность распространения соответствующих патологий.
Структура ц рбьем диссертации. Диссертация состоит из двух томов. Первый том включает введение,обзор литературы,главу-направлений характеристики обьеісгов и методов исследования, 3 главы собственных исследований, выводы, рекомендации, список литературы.материалы внедрения в пракгику. Второй том представлен табличным материалом приложений.Работа изложена на 173 страницах машинописного текста, иллюстрирована 96 таблицами, 34 рисунками. Библиография состоит из 482 работ отечественных и 198 иностранных авторов.
Сообразуясь с целью и задачами, поставленными в работе на основе разработанных методических подходов по медико-биологическому обоснованию рационального использования нетрадиционного сырья животного происхождения с позиций зколою-гнгиепической концепции питания человека (рис.2.), были определены три основные направления исследований: изучение химического и биохимического состава пеградиииошюго сырья животного происхождения и продуктов из него: изучение безоиас-
іі олень ) | 1Ґ
Обьекгы исследования
Гематогени из кровн наземных млекогагтающцх (пятнистый и северный (
Гематогени ш кропи лорсіак млекопитающих я (белутса дальневосточная, серый кит, тюлень акнба) jj
retsastaa t
Рис.2. Медико-биологнчсская оценка нетрадиционного сырья животного происхождения.
пости пролополілтвснного сырья и продуктов ; экспериментальное обоснование лечебно-профилактических свойств пищевых продуктов из нетрадиционного сырья животного происхождения в профилактике последствий воздействия ионизирующей радиации, дефицита железа в организме.
Обьекты исследования были выбраны с учетом перспективных направлений и особенностей развития афопромышлсппого комплекса и морского промысла на Дальнем Востоке. Обьектами разведения в оленеводческих хозяйствах Дальневосточного региона являются - пятнистый олень ( Cervus nippion hortulorum), северный олень ( Rangifer tarandus ); обьектами промысла морских млекопитающих - белуха дальневосточная (Delphinapterus leucas), серый кит (Echrchtius gibbosus), тюлень акиба (Pusa hispida Schrcber). Разнообразие обьсктов исследования обьяспяется изучением одного и того же вида отходов - крови животных наземного морского обитания, как перспективного продовольственного сырья. В настоящее время изученное сырье не используется, что ведет к потере ценного источника получения нугрицевтиков и загрязнению окружающей среды.
Изученное сырье получали и заготавливали во время экспедиционо-нах морского промысла в Тихоокеанском бассейне и оленеводческих хозяйствах Дальнего Востока.В 1978 году в совместной экспедиции с А.Л.Кондратьевым (серый кит) , в течение 1988-1989 годов на Сахалинской области (тюлень акиба), 1989-1990 годах в Николаевском районе Хабаровского края совместно с В.Л.Бейзеровым (белуха дальневосточная). . 1990-1994 годах в Сахалинской области (северный олень), в 1990-1995 годах в Приморском крае (пятнистые олени). Все обьекты исследования хранились в условиях, гарантирующих предотвращение их химических, бактериологических и биохимических изменений. Обработка продовольственною сырья и продуктов из него проводилась с учетом конкретных задач, согласно имеющихся и разработанных технических условий и технологических инструкций на основе ранее полученных патентов.
Для оценки перспективы использования пищевых продуктов из нетрадиционного сырья животного происхождения были проведены биохимические и химические исследования (И.М.Скурихин,1980;1981;И.М. Скурихип. М.Н. Волгарев,1987).
Из образцов, подвергнушх исследованию, были экстрагированы ли-ииды но методу J.Folch (1954), качественный и количественный анализ нейтральных липидов и фосфолипидов осуществляли по методу Е.Шталь (1965) с использованием автоматического денситометра ("JOYCE", Англия), ан і повелительную активность липидов оценивали методом йодо-мегрическоп)титрования (Н.М.Эмануоль с соавт..1965;Е.Б.Бурлакова с соли і..1974).
Для определения активности супероксиддисмутазы использовали непрямой метод, основанный на нигнбировапин восстановления синего ннт-роїетракшіи суперокисыо, їсиернрусмой форменіатнгшой ксаіпипкеанш-
!0
нооксидазной системой (К. Banchant, et al.,1971) с регистрацией результатов на спектрофотометре "ШТЛСН1-22"(Япония) при Х=560 им., активность пгутатионопероксидазы определяли по окислению ІІЛДФН в сопряженной глутатион-глутатионредуктазной системе (Д.Е.Ра1іа et al.,1967) с оценкой результатов на аналитической установке "FP-901" (Финляндия) при 7.=340 нм.
Аминокислотный аналіз проводили методом S.Moor и W.H.Stein (1963) на аминокислотном анализаторе ЛЦ-5С ("JNAGIMOTO", Япония).
Минеральные вещества определяли нламено-фотометрическим методом с использованием стаїщартньїх элементов на атомно-адсорбционном спектрофотометре "ШТАСНГ'(Янония) после полного разложения проб образцов (Р.Бок, 1984).
Концентрации' витаминов- ретинола, каратиноидов, токоферолов, пиридоксина, рибофлавина, тиамина хлорида оценивали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на спектрофотометре "JASCO 870-иУ"(Л.М.Якушииа с соавт.,1993), определение ретинола,о> токоферола,Р-каротина и каратиноидов проводили при детекгореспектро-фотометре с программируемой сменой волн(325,292,450 нм),колонка с сорбентом Scparon SGXC18,5 мкм, элгоент-метанол,хлороформ(95:5). Витамины группы В определяли при детекторе спектрофлюориметре (7.=290,325 нм) колонка с сорбентом SEPARON SGX С 18.5 мкм, элюент-0,04 М раствор серной кислоты.
В токсикологических исследованиях изучалось возможное общетоксическое действие продуктов в рамках хронического эксперимента с периодичностью наблюдения 3 и 6 месяцев (П.Н.Манструк с соавт.,1984). Методические подходы к организации, условиям содержания, питания животных соответствовали требованиям литературы (И.М.Трахтенберг с соавт., 1972;И.П.Западнюк, 1974;А.И.Штенберг,1982;И.П.Западнюк с со-авт.,1983;В.Г.Высоцкий с соавт. 1986).Применялись методы оценки интегральных, физиологических, биохимических, гистологических, гематологических, иммунологических показателей, рекомендованных для подобных исследований (А.А.Покровскин,1969;В.Г.Колб с соавт., 1982; ВОЗ, 1982; .И.М.Трахтенберг,1978;1987; Лабораторные исследования.., 1987; Методы анализа.., 1988;Н.И.Портяная с соавт., 1990; Проблемы нормы в токсикологии, 1991).
Возможное эмбриотоксическое и тератогенное действие продуктов исследовалось в соответствии с принятыми в настоящее время рекомендациями. Наблюдались самки белых крыс, потреблявшие в период беременности исследуемые продукты. Определялись продолжительность беременности, плодовитость, количество желгыхтел, мест имплантации, погибших зигот и неразвившихся яйцеклеток, уровни пред- и постнмплантационной, а также общей эмбриональной смертности, масса тела и краниокаудальные размеры эмбрионов, относительная масса внутренних органов, масса и но-
И
перечник плаценты. Для выяснения внутренних уродств использован метод просветления эмбрионов с последующим окрашиванием ализарином. Часть эмбрионов фиксировалась в жидкости Буэна, после чего их части подвергались изучению. У оставленных до естественных родов животных в течение трех месяцев наблюдалось состояние потомства по показателям, характеризующим общерезорбтивное действие: массовые коэффициенты внутренних органов, время открытия глаз, появления шерсти и резцов, возраст к моменту наступления эструса и продолжительность его стадий. В трехмесячном возрасте у потомства изучались структурно-функциональные элементы, а также функциональные и морфологические показатели сперматогенеза. Рассчитывались массовые коэффициенты внутренних органов, проведены патоморфологические исследования и морфомстрия.
Возможный гонадотоксический эффект исследованных продуктов оценивали на крысах-самцах и крысах-самках при шестимесячной экспозиции потребления опытных рационов. У самцов учитывали количество сперматозоидов, время их подвижности, кислотную и осмотическую резистентность, относительное количество дегенеративных форм, продольные, поперечные размеры и массовые коэффициенты семенников. Проведена морфологическая оценка сперматогенного эпителия с расчетом индекса сперматогенеза, нормальных сперматогоний, канальцев с 12-й стадией мейоза, канальцев со слущенным эпителием, гистохимические исследования семенников. Исследованы воспроизводительная функция, состояние эмбрионального материала и потомства от интактных самйк. У самок определяли длительность зстрального цикла, продолжительность его стадий, количество структурно-функциональных элементов яичника, его гистологическую и гистохимическую структуру. Эмбриональный материал и потомство от интактных самцов изучали в обьеме, принятом в эмбриотокси-ческом эксперименте.
Возможное канцерогенное действие не изучалось.так как при анализе научной литературы данных о потенциальной канцерогенности нетрадиционного сырья животного происхождения не обнаружено (Р.Д.Габович с соавт, 1987).
Для оценки возможного мутагенного эффекта при употреблении изученных продуктов был использован метод метафазного анализа хромосом клеток костного мозга. Биологической моделью были выбраны белые крысы-самцы, употреблявшие в течение трех месяцев исследуемые рационы. Подсчи тывалоеь диплоидное количество хромосом. Исследовалась морфология кариотипа, а также рассчитывались показатели, характеризующие цитогенегическую картину ядер клеток: митотический индекс, характер перестроек и общее количество метафаз с перестройками (Н.П. Бочков, 1974).
С целью изучения возможной аллергенной активности изученных
продуктов был применен метод непрямой дегрануляпии тучных клеток. Оценивалась степень и показатели дегрануляции тучных клеток (В.А. Фрадкин с соавт.,1977).
Скармливание рационов проводилось в 100-литровых стеклянных камерах. Ежедневно фиксировалась посдаемоегь корма и его остатки. Рационы во всех случаях были изокалорийныи н идентичными по содержа-нига основных нутриентов, а по принципу комплектования - нолусинтети-ческими. Животные получали рационы гомогенными, для исключения возможного выборочного выедания отдельных инфедиенгов, испытуемые пищевые продукты составляли в них 9% сухой массы (И.П.Западшок с со-авт.,1983).
Изучение содержания тяжелых металлов, пестицидов и остаточных количестп антибиотиков проведено специалистами лаборатории Приморского краевого центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора по ГОСТ и методикам, рекомендованным МЗ СССР и ГКСЭН РФ.
Оценку состава микрофлоры нетрадиционного сырья животного происхождения и пищевых продуктов из него проводили согласно общепринятым методам (Ю.П.Пивоваров с соав.,1982:1988;1989:Краткий определитель Берги, 1980; Санитарная микробиология, 1980; Справочник по санитарной микробиологии, 1981;В.М.Клевакин с соавт.,1986).
Выделение и идентификацию микроорганизмов, оценку качественного и количественного состава микрофлоры проводили мегодами, применяемыми в санитарной микробиологии (ГОСТ 26670-91.ГОСТ 9958-81JOCT 10444.8-88, ГОСТ 28566-90, ГОСТ 28560-90, ГОСТ 28805-90).Оценку качества продовольственного сырья и пищевых продуктов из него проведена согласно "Медико-биологических требований и санитарных норм качества продовольственного сырья и пищевых продук-тов"(1990),ОСТ 490 161-84.
Изучение резистентности к антибиотикам и дезинфектантам у микроорганизмов, выделенных из сырья и продуктов проводили методом серийных разведений (С.М.Навашин с соавт.,1982;А.П.Красильников, 1995).
В экспериментальных исследованиях новых продуктов из нетрадиционного сырья животного происхождения создавались модели костномозговой формы лучевой болезни и гипохромной анемии согласно рекомендациям научной литературы (Г.П.Груздев с соавт.,1974;Г.П. Груздев, 1988; Е,В. Гапоненко,1995). В модели костномозговой формы лучевой болезни животные были подвергнуты однократному тотальному облучению на Со-60 излучателе в дозе 3 Гр ( ЛД= =70/30), мощность дозы 0,55 Гр/мин. На 5-й, 10-й и 20-й день с момента облучения у животных изучался состав клеток костного мозга и периферической крови.
В модели гипохромной анемии на 31-й день скармливания исследованных продуктов у животных одномоментно проводили забор 2,5% крови от массы тела животного, одновременно каждому животному возмеща-
ли потерю крови адекватным количеством физиологического раствора. Гематологические показатели периферической крови, концентрация сывороточного железа изучали на 7-й и 15-й день эксперимента, во время восстановительного периода ( Лабораторные исследования ь клинике, 1987; B.C. Васильев с соавт.,1994).
Определение химического состава лнпидоп, активности суперок-сиддисмутазы и глутатионпероксидазы проведено на базе института физической химии РЛН, под методическим руководством доктора химических наук, члена-корсспондента РАН, профессора Н.Н.Глущенко. Изучение аминокислотного состава, количества минеральных веществ в изученных обьектах и витаминного состава проведено совместно с кандидатом биологических наук, старшим преподавателем кафедры бионеорганической и биологической химии Владивостокского государственного медицинского университета Т.К.Калеиик. Микробиологические исследования проведены на базе бактериологической лаборатории Дальневосточного ЦСЭН на водном транспорте (завлабораторией Г.И. Туркутюкова). Доля личного вклада автора в исследованиях составляет 80%, в обобщении и анализе материалов проведенных исследований 100%.
Полученные результаты исследований были обработаны статистическими методами с использованием статистических программ на ПК IBM РС\АТ. Статичстическяя обработка материалов проведена при а=0,95, числе" степеней свободы к=18, табличного значения t= 2,103.