Введение к работе
Актуальность проблемы. Производственные процессы на современных предприятиях угледобывающей промышленности Центрального Казахстана обуславливают воздействие на организм шахтеров комп- лекса вредных факторов производственной среды: высокий уровень запыленности, особенно в комбинации с повышенной загазованностью горных выработок,неблагоприятными метеоусловиями, шумом, вибрацией в сочетании с физическими нагрузками, нервно-эмоциональным напряжением, что снижает реактивность организма горнорабочих и., способствует формированию бронхолегочной патологии (Б. Е: Алтынбе-ков и соавт.,1988;1990). Ведущее место среди профессиональных заболеваний занимают пневмокониозы и хронические пылевые бронхиты (Б.Е. Алтынбеков и соавт.,1990; В.В.Милишникова и соавт.,1990). Они поражают самых квалифицированных рабочих в наиболее трудоспособном возрасте, нанося тем самым серьезный социально-экономический вред.
. Несмотря на то, что проблеме патогенеза пневмокониозов посвящено достаточно большое число экспериментальных и теоретических исследований (Г.М.Пичхадзе,1984; Б.Е.Алтынбеков.1988; Б. Т.Велич-ковский,1991,1994; Д.М.Джангозина. 1992; Busch et al.;1981, Kamal et al.,1989). первичные молекулярные и клеточные механизмы развития фиброзного процесса в легких при действии фиброгенных пылей остаются неясными.
Последнее время большое внимание уделяется изучению процес
сов окислительного метаболизма (ОМ) при действии фиброгенных пы
лей, особенно кварца и хризотиил-асбеста (Л.Г.Бабушкина и соавт..
1981.1982; О.Г. Архипова.1983; Б.Т.Величковский и со-
авт.. 1979,1982. 1988; Н.С.Кислищша. 1986-1988; В.А.Гусев, Е.В.Даниловская. 1987. 1989; Strlvastanova et al.,1980; Kamal et al.,1989). Несмотря на интенсивное изучение состояния ОН при действии высокофнброгенных пылей не сформулирована единая точка зрения о роли перекисного окисления липидов и системы антиоксидантної! защиты (П0Л-А03) в механизмах цитотоксичности и фиброген-ности промышленных аэрозолей. Исследование реакций ПОЛ при силикозе позволило накопить значительное количество фактического материала и сформулировать ряд гипотез об участии процессов ПОЛ в развитии этого заболевания (А.И.Иванова и соавт.,1980; 0.Г.'Архипова, 1983; Л.Г.Коркина.Б.Т.Величковский, 1988; Б. Т. Величковс-кий,1994).
При действии пыли каменного угля этим процессам посвящены единичные исследования (Р.Н.Макарова. 1990; Г.С.Тухбатули-на.1990), что не позволяет создать целостную картину участия П0Л-А03 в патогенезе антракоза, причем не только из-за отсутствия достаточного количества фактического материала, но и вследствие лимитированного набора применяющихся методов исследования окислительного метаболизма. Необходимо отметить, что угольная пыль по своему физико-химическому составу резко отличается от кварца или асбеста, в связи с чем механизм ответной реакции ткани легких и всего организма может иметь свои особенности.
При антракозе не изучена скорость накопления, детоксикации и вывода метаболитов ПОЛ, эффективность функционирования и степень сопряженности ферментов антирадикальной и антиперекисной защиты, а также структурно-функциональное состояние биомембран. Между тем. изучение глубины и направленности нарушений в системе ПОЛ-АОЗ позволит определить препараты, способные корректировать процессы патологического окисления.
Самостоятельной проблемой является изучение состояния окислительного метаболизма при хронических пылевых бронхитах, поскольку подобного рода исследования практически не проводились. Актуальность изучения этой проблемы определяется широкой распространенностью этой формы пылевой патологии ( В. В.Милишникова и соавт.1988; В.Д.Алырщиков и соавт..1990; Б.Т.Величковский,1994). а также высокой степенью ее осложненности и инвалидизации больных (С.К.Куанышбаев и соавт., 1990).
Подобного рода исследования целесообразно проводить при сопоставлении с динамикой нарушения ПОЛ-АОЗ при неспецифических заболеваниях бронхолегочной системы (острыми пневмониями, хроническими бронхитами). Оценка состояния ОМ. его выраженности и пролон-гированности при различных нозологических формах неспецифических заболеваний легких различной этиологии позволит выделить общие и специфические закономерности, что является актуальной задачей для разработки диагностических и прогностических критериев, а также определить конкретные подходы к антиоксидантной терапии указанных заболеваний.
Цель исследования: изучить нарушение окислительного метаболизма у горнорабочих угольных шахт, оценить его патогенетическую значимость при развитии пылевой патологии органов дыхания, обосновать и разработать пути его патогенетической терапии.
Задачи исследования:
1.Изучить влияние пылей каменного угля с различным петрографическим и микрокомпонентным составом на процессы окислительного
- 5 -метаболизма и состояние биомембран эритроцитов, используя методы биологического моделирования.
2.Изучить состояние системы П0Л-А03 в процессе развития экспериментального антракоза.
3.Провести оценку влияния различных антиоксидантов на развитие фиброзного процесса и состояние окислительного метаболизма у крыс с экспериментальным антракозом.
4.Изучить особенности процессов П0Л-А03 у стажированных шахтеров, больных пневмокониозом. хроническим пылевым бронхитом и больных неспецифическими заболеваниями органов дыхания (пневмонии, хронические бронхиты).
5.Исследовать эффективность применения антиоксидантов при лечении больных профессиональными заболеваниями легких пылевой этиологии.
Научная новизна.
Впервые при профессиональных заболеваниях от воздействия угольной пыли использован комплекс биохимических и биофизических методов исследования процессов ПОЛ в различных биосредах, эффективности и сопряженности функционирования системы антиоксидантной и антирадикальной защиты, структурно-функционального состояния биомембран.;
Впервые дана характеристика состояния окислительного метаболизма у шахтеров, больных антракосиликозом и хроническим пылевым бронхитом в зависимости от стадий их развития. Глубокие нарушения перекисных процессов в сочетании с изменением ферментативного звена АОЗ и степени его сопряженности зарегистрированы уже у практически здоровых стажированных шахтеров при отсутствии клинических признаков заболевания и у горнорабочих с ранними проявлениями антракосиликоза (группа" К", код 0-1). Присоединение хронического пылевого.бронхита усугубляет метаболические расстройства системы ПОЛ-АОЗ у шахтеров, больных антракосиликозом I стадии.
Впервые дана характеристика системы ПОЛ-АОЗ у шахтеров с хроническим пылевым бронхитом в фазе обострения и неполной ремиссии. Показана резкая интенсификация реакций ПОЛ на фоне изменения сопряженности ферментов АОЗ, нарушение проницаемости биомембран в фазе обострения ХПБ. Дисбаланс окислительного метаболизма сохраняется у больных на стадии клинико-лабораторной ремиссии и не нивелируется в результате проведения общепринятых лечебно-профилактических мероприятий.
Сопоставлением характера изменения окислительного метаболизма у больных с пылевой и неспецифической патологией органов дыхания (острые пневмонии, хронические бронхиты) показано, что при
общей направленности сдвигов со стороны ПОЛ, особенности выявленных нарушений зависят от конкретной нозологической формы заболевания.
Впервые в экспериментальных исследованиях выявлены особенности изменения в системе ПОЛ-АОЗ в легких и крови животных с моделью антракоза в динамике префибротической фазы. Модельными и экспериментальными исследованиями продемонстрировано отсутствие специфичности нарушения окислительного метаболизма в зависимости от петрографического и микрокомпонентного состава угольных пылей.
Впервые проведена экспериментальная апробация таких антиок-сидантов как аргинин, глутатион восстановленный, пробукол, нико-тинамид и биологически активное вещество, гаммаплант,с целью коррекции нарушения окислительного метаболизма и торможения фиброзо-образования при антракозе. Показано, что противофиброзный эффект указанных соединений находится в прямой взаимосвязи с их антиоксидантними и регуляторными свойствами. Наиболее" позитивные результаты получены от применения аргинина,метионина, никотинамида и гаммапланта.
Впервые проведена клиническая апробация антиоксидантов в комплексном лечении шахтеров с ранними проявлениями антракосили-коза и больных хроническим пылевым бронхитом. Включение в комплекс лечебно-профилактических мероприятий антиоксидантов в средних дозировках позволило снизить напряженность в системе ПОЛ v. стабилизировать показатели АОЗ.
Сформулирована гипотеза участия нарушения окислительного метаболизма в патогенезе пневмокониоза от воздействия угольной пыли. Угольная пыль индуцирует структурные нарушения биомембран, первоначально белковых полимеров, что в совокупности с другим? факторами генерации АФК, провоцирует нарушение ОМ в легких, которое на ранних сроках запыления опережает изменение интегральны? показателей фиброгенеза. Одним из патогенетических факторов фиб-розообразования является эндогенный избыток перекисных соединений, связанный с нарушением сопряжения ключевых ферментов АОЗ. Нарушение окислительного метаболизма в крови развивается синхронно с таковым в легких и определяет генерализацию ПОЛ.
Практическая значимость работы. По материалам исследование изданы методические рекомендации республиканского уровня: "Биохимические и иммунологические тесты ранних проявлений антракосили-коза" (1988) и "Антиоксиданте в клинике внутренних болезней1 (1992). Получены акты внедрения в медсанчасти ПО- Карагандауголь, в лаборатории функциональной диагностики и в клинике Институт;
- 7 -гигиены и физиологии труда АН РК. на кафедрах терапии и пропедевтики внутренних болезней N 2 Карагандинского медицинского института.
Получено авторское свидетельство на изобретение "Способ диагностики антракосиликоза" (N 1522103 от 15 июля 1989 г.)
Издано 3 информационных листка:" Комплексное биофизическое, исследование сурфактантной системы легких" (1986 г.), "Биохимические способы ранней диагностики антракосиликоза шахтеров" (1987), внедренный в ПО Карагандауголь. и "Спектрофотометрическое определение продуктов перекисного окисления в моче" (1990), внедренный в ЦНИЛ и кафедре пропедевтики внутренних болезней N 2 КГМИ.
Методы исследования, усовершенствованные в процессе выполнения работы, внедрены в Научном центре региональных проблем питания (г. Алма-Ата), в ЦНИЛ. кафедре фтизиатрии КГМИ, в областной клинической больнице г.Караганды.
Результаты исследования используются при чтении лекций и проведения практических занятий на ряде кафедр КГМИ и Челябинского медицинского института.
В процессе выполнения диссертационной работы получено удостоверений на 12 рационализаторских предложений.
Апробация работы.Основные положения диссертации доложены на всесоюзной конференции "Здоровье и окружающая среда" (Алма-Ата, 1984), республиканской конференции "Состояние и пути снижения уровней загрязнения окружающей и производственной среды" (Караганда. 1985). на всесоюзном совещании по хемилюминесценции (Уфа, 1986).на всесоюзной конференции "Физиология экстремальных состояний и индивидуальная защита человека" (Москва,1986), на республиканской конференции "Актуальные вопросы гигиены в условиях научно-технического прогресса"(Ташкент, 1987), на всесоюзных конференциях "Аэродисперсные системы и коагуляция аэрозолей" (Москва,1988), "Люминесцентный анализ в биологии и медицине и его аппаратурное обеспечение" (Рига, 1989), на республиканских конференциях "Экологические проблемы Центрального Казахстана" (Караганда, 1989). "Актуальные проблемы охраны и укрепления здоровья населения Казахстана" (Алма-Ата, 1990), на III международной конференции "Экологическая патология и ее фармакокоррекция" (Чита, 1991). на V конференции биохимиков республик Средней Азии и Казахстана (Ташкент.1991), на научной конференции с международным участием "Региональные проблемы питания "(Алма-Ата,1992). на региональной научно-практической конференции "Организация работы в диагностических центрах" (Караганда,1993),на международной конференции стран СНГ "Коррекция и управление функциональным состояни-
" 8 " ем в процессе трудовой деятельности" (Караганда.1993), на I конгрессе пульмонологов" и аллергологов Центральной Азии (Ташкент. 1994). на совместном заседании проблемной комиссии "Гигиена", сотрудников профильных кафедр и НИЦ КГМИ (Караганда.1994).
Публикации: по материалам диссертационной работы опубликована монография " Роль перекисного окисления липидов и .антиокси-дантной защиты в развитии антракоза в эксперименте и клинике" (Алматы.1994). 20 статей, из них 3 информационных листка и 2 методические рекомендации республиканского уровня.
Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, глав "Обзора литературы". "Материалы и методы исследования". 5 глав собственных наблюдений, выводов, заключения по внедрению в практику, указателя литературы. Текст иллюстрирован 15 таблицами.100 рисунками, библиография включает 260 работ авторов стран СНГ и 84 работы зарубежных авторов.
Основные положения диссертации, выносимые на зашиту:
1.Пыль каменного угля независимо от петрографического и микрокомпонентного состава индуцирует структурные повреждения биомембран и способствует нарушению окислительных процессов в эритроцитах.
-
У крыс с экспериментальным антракозом нарушение в системе ПОЛ-АОЗ в легких и крови опережает изменение параметров фиброзо-образования. причем степень интенсификации ПОЛ и дисфункции АОЗ зависит от сроков запыления.
-
Нарушение окислительного метаболизма установлено у практически здфовых шахтеров, степень дисбаланса системы ПОЛ-АОЗ у больных антракосиликозом зависит от стадии болезни.
-
Наиболее глубокие метаболические расстройства системы ПОЛ-АОЗ зарегистрированы у шахтеров с хроническим пылевым бронхитом. фазаДклинико-лабораторной ремиссии не сопровождается стабилизацией АОЗ'и снижением интенсивности ПОЛ.
-
Экспериментальная апробация антиоксидантов и гаммапланта показала возможность торможения фиброзообразования в легких, что сопровождалось ингибированием нарушения ПОЛ-АОЗ.
6.Включение в общепринятую терапию антиоксидантов у шахтеров с пылевой патологией органов дыхания результировалось снижением интенсивности нарушений окислительного метаболизма.
7.Сопоставление характера изменения окислительных процессов у больных с пылевой и неспецифической патологией органов дыхания показало наличие общих закономерностей и особенностей алгоритма нарушения ПОЛ-АОЗ. что позволило рекомендовать ряд биохимических тестов для диагностических и прогностических целей профессиональ-
- 9 -ных заболеваний пылевой .этиологии.
Модельные исследования проводились путем инкубации интактных зрігооцитов (1% взвесь) с различным.по петрографическому и микрокомпонентному составу образцаш пыли каменного угля в течение 24 часов. Контролем служила эритроцитарная взвесь, инкубированная в аналогичных условиях без пыли.
Экспериментальные исследования проводились на беспородных 'і линейных крысах (Август) -самцах с исходным весом 130.-140 г. Л і получения экспериментального антракоза (ЗА) использовалась инт-' ратрахеальная модель (одноразовое введение 50 мг свежеобразованной каменного угля III-IY стадии метаморфизма в 1 мл стерильного физиологического раствора). Животным контрольной группы вводили 1 мл стерильного физиологического раствора. Первоначально определяли исходный уровень всех изучаемых показателей у интактных крыс. Животных забивали методом неполной декаштации под легким эфирным наркозом согласно "Правилам проведения работы с . использованием экспериментальных животных"'и "Международных рекомендаций по проведению медико-биологических исследований с использованием животных" (1985). Общее количество животных, использованное в экспериментальных исследованиях.-250.
В первой серки, эксперимента изучалась динамика изменения в системе П0Л-А03 и показатели фнброгенеза на ранних сроках развития ЭА: 10. 30 и 90 дней.
Второя_серия экспериментов была посвящена изучению ' влияния антиоксидантов (АО) и биологически активного вещества (БАВ)- гам-мапланта- на показатели фиброгенеза и состояние окислительных процессов у крыс при этих же сроках развития ЭА.
Крысы с ЭА.ежедневно получали из расчета на кг массы тела КІ (5 мг); метионин и в сочетании с пиридоксином (25 мг и 0,08 мг). водный раствор глутаминовой кислоты (125 мг). нейтрализованной 0.IN раствором едкого чатрия: маслянный раствор витамина Е (0.2 мг на.крысу . а учитывал его ежедневное поступление с кормом; общая доза составила 2,5 чг). И. наконец, отдельная группа 'животных ' с ЭА получала комплекс перечисленных препаратов в техже-концентрациях. Солянокислый L-арганин. глутатион восстановленный- (GSH) и никотнначид вводили внутрижелудочно в физиологическим растворе трижды в неделю, соответственно, в дозах 0,03 г, 0.008 г и 0.2 г на кг массы тела крыс с ЭА. Крахмальный раствор пробукола в физиологическом растворе крысам опытной группы также вводили внутрикелу-
- 10 -дочно трижды в неделю в дозах 5 мг на кг массы тела. Гаммаплант (производства "Гамма В". Москва) вводили внутривенно трижды в течение всего эксперимента: сразу после запыления животных, через 30 и 60 дней в дозе 0.25 мг/кг.
О степени развития фиброгенеза судили по изменению массы влажных легких и трахеобронхиальных лимфатических узлов (ТБЛУ).а также по содержанию в гомогенате легочной ткани оксипролина (Л.И.Слуцкий. Н.Т.Шелектина,1958) и общих липидов (Folch,1965).
Морфологические исследования выполнялись на базе морфологической лаборатории НИЦ КГМИ ст.н.с. к.м.н. В.И.Медведевым и доцентом кафедры гистологии КГМИ В.Н.Бесковым. Препараты легких окрашивались гематоксилином- эозином и по ван Гизон.
Клинические наблюдения проводились на базе терапевтического отделения клиники Института гигиены и физиологии труда АН РК в течение 1984-1987 и 1990-94 гг. по договору о научно-практическом сотрудничестве. За указанный период было обследовано 350 горняков. Обследование больных, верификация диагнозов осуществлялись зав. отделением Л.А.Мажинской и врачем терапевтического отделения клиники А.Н. Ким.
Клиническая характеристика групп шахтеров с пылевой патологией органов дыхания проводилась на основании выкопировок из историй болезни. Корректность ее составления была подтверждена консультацией заведующего курсом профессиональных болезней КГМИ доцентом С.К.Куанышбаевым.
В группу больных с начальными проявлениями антракосиликоза (код 0-1) вошло 42 горняка. Средний возраст лиц этой группы 45.3 года, средний стаж работы в подземных условиях - 18.9 года. По горным специальностям шахтеры подразделялись на горнорабочих основных профессиональных групп (ГРОЗ. ГРП. проходчики) - 54.8% и вспомогательных групп - 45.2%
Группу шахтеров с антракосиликозом 1 стадии составили 70 человек, в среднем возрасте 51 год. стаж работы в подземных условиях - 26.6 лет. По горным специальностям превалировали проходчи-.ки. ГРОЗ и ГРП (78.6 %). Клинико-функциональные признаки антракосиликоза включали эмфизему легких и легочную.недостаточность I степени (в 68 и 91% соответственно).
В группу шахтеров с антракосиликозом 1 стадии и хроническим пылевым бронхитом (ХПБ) в стадии неполной ремиссии вошло 24 человек. Средний возраст -56 лет. стаж работы подземных условиях -27.54 года, по горным специальностям превалировали ГРОЗ. ГРП. проходчики (54.2%). В группу больных антракосиликозом I стадии и хроническим пылевым обструктивним бронхитом в стадии обострения
- 11 -вошло 15 человек. Средний возраст больных этой группы составил 57.9 лет, стаж работы в подземных условиях - 26,8 лет. По профессиональным характеристикам в эту группу вошли преимущественно ГРП, проходчики и ГРОЗ (73.3%). Клинико-функциональные признаки у лиц этой группы включали эмфизему легких (93.3 и 67%) и легочную недостаточность і;II степени (100%).
Шахтеры с ХПБ подразделялись на две подгруппы: больные с ХПБ в фазе обострения (29 чел.) и в фазе неполной ремиссии (62 чел.). Средний возраст больных соответственно составил 50.7 лет. Стаж работы в подземных условиях у лиц обоих групп составил 26 лет. По профессиональным категориям к группе больных ХПБ как фазе обострения, так и неполной ремиссии, преимущественно относились ГРОЗ, ГРП. проходчики, горные мастера, подземные электрослесаря и т.д. Клинико-функциональные признаки у всех больных ХПБ включали эмфизему легких, легочную недостаточность II и III стадий, легочное сердце, преимущественно в стадии декомпенсации (10.3% у больных с ХПБ в фазе обострения и у 3.2% .больных с ХПБ в фазе неполной ремиссии).
Группу сравнения составили шахтеры без заболеваний органов дыхания пылевой этиологии (39 чел.). Средний возраст стажирован-ных шахтеров составил 51.9 года, средний стаж работы в подземных условиях - 23.6 лет. Профессиональный состав был представлен главным образом ГРОЗ, проходчиками, ГРП, НГВМ. горными мастерами, крепильщиками и т.д.
Контрольную группу составили практически здоровые лица -первичные доноры (25 человек в-возрасте от 35 до 55 лет).не работающие в условиях повышенной пылевой нагрузки.
Кроме того, для больных с ХПБ группу сравнения составили лица с хроническим обструктивним бронхитом в стадии обострения (20 человек),с хроническим необструктивным бронхитом (10 человек) и больные с острой пневмонией (10 человек) мужского пола, в возрасте от 35 до 65 лет, не работающие в условиях повышенной пылевой нагрузки.Подбор больных осуществлялся ассистентом кафедры пропедевтики внутренних болезней N 1 Р.А.Бакеновой.
Шахтеры с ранними проявлениями антракосиликоза (11 человек) получали комплекс витаминов А (18000 ME ),Е (100 мг), аскорбиновую кислоту (100 мг х 3 раза), и аминокислоту метионин (0,5 г х 3 раза) в день в течение 12-15 дней на фоне обычных процедур, включающих УФО на грудную клетку, назначение отхаркивающих средств т.д. Шахтеры с ХПБ на фоне патогенетического лечения получали (6 человек) никотинамид (250 мг х 3 раза в день) в течение 10-12 дней, или (7 человек) метионин (0.5 г х 3 раза в день) и поливи-
- 12 -таминные комплексы. Декамевит или Ундевид. (1 драже х 3 раза в день) в течение 10-12 дней. Исследование показателей системы П0Л-А03 проводилось до-назначения и после окончания приема АО.
Интенсивность процессов ПОЛ в различных объектах исследования оценивали по уровню его первичных, вторичных и конечных продуктов. Содержание диеновых коньюгат (ДК) в плазме крови определяли по методу В.Б.Гаврилова и М.И.Мишкорудной (1983). в эритроцитах - по В.Н.Ушкаловой и Г.Д.Кадочниковой (1987), в гомогенатах легких - по И. Д.Стальной (1977). Уровень вторичных продуктов ПОЛ: кетодиенов (КД) регистрировали в эритроцитах и гомогенатах легочной ткани по методу. В.Н.Ушкаловой и Г.Д.Кадочниковой (1987), а малонового диальдегида (МДА) - в плазме крови (по методу Э.Н.Ко-робейниковой,1989),в эритроцитах по М.С.Гончаренко и A.M.Лапшовой (1985). в тканях легких по методу В. А. Костюк и А. И.Потапович (1987), в моче - по модифицированному нами методу (Л.Е.Муравлева и соавт.,1990).
Для интегральной оценки суммарных первичных, вторичных и конечных продуктов - основания Шиффа (ШО) использовался методический прием Е.И.Львовской и соавт.(1991),
В плазме крови определяли активность глюкозо-6-фосфатдегид-рогеназы (Г-6-ДГ) по методу И.А.Горошинской и соавт.(1984), ката-лазы (КАТ) - noAebi et al (1968).
АО-стг.тус.эритроцитов и гомогенатов легочной ткани оценивали как по индивидуальной активности ферментов, так и по изменению степени их сопряженности. Активность супероксиддсимутазы (СОД) в эритроцитах оценивали по Е.Е.Дубининой и соавт. (1983). Е.В.Макаренко (1988).Г.И.Клебанову и соавт. (1990), в гомогенатах легочной ткани - по Г.И.Клебанову и соавт. (1990). Активность глутатионпе-роксидазы (ГПО) в эритроцитах определяли по С.Н.Власовой и соавт. (1990), глутатионредуктазы (ГР) - по В. Б.Кругликовой и Ц.М.Штутману (1976) в нашей модификации (Л.Е.Муравлева и соавт. .1988),' -активность ГПО и ГР в гомогенате легочной ткани оценивали по В.Б.Кругликовой и Ц.М.Штутману (1976). Активность КАТ в эритроцитах определяли по методу М.А. Королюк и соавт.(1988). Активность глутатион-Б-трансферазы (ГТ) в эритроцитах и гомогенатах легочной ткани оценивали соответственно по С.Н.Власовой и соавт. (1990) и Вааг (1981).
Для количественной оценки сопряженности ферментов АОЗ были расчитаны коэффициенты СОД / КАТ, СОД / ГПО и ГР/ГПО (Н.И.Осипова и соав.,1990. Е.Е.Ломоносова и соав..1992), для характеристики скорости замены липидов - МДАэр/ПГЭ (В.В.Банкова и соавт.1987).
Кроме того, в эритроцитах определяли активность аденозинде-
- 13 -заминазы (АД) по Cronsteln et al.(1985) и пероксидазы (ПР) по О. Г.Архиповой (1988). а также устойчивость эритроцитов к перекис-ному гемолизу (ПГ) по Jager (1968) и уровень конечных продуктов протеолиза - средних молекул (СМЭ) - по А.Н.Ковалевскому и О.Е.Нифантьеву (1989). В моче определялась каталазная активность по модифицированному нами методу (Л.Е.Муравлева и соав.,1988).
Биохимические исследования проводили с использованием реактивов фирм "Реанал" (Венгрия), "Sigma" (Швеция), а также отечественных реактивов марки "хч" и "осч".
Биофизические методы исследования включали в себя хемилюми-несцентный (ХЛ) анализ эритроцитов и гемоглобина, метод инфракрасной спектроскопии (ИК). электронный парамагнитный резонанс (ЭПР), газовую хроматографию и изучение зарядового баланса крови. Индуцированную ХЛ гемоглобина регистрировали по методу С. А. Дружиной и соавт.(1978), эритроцитов - по В. И.Шестакову и соавт. (1982).
ИК-спектры препаратов мембран эритроцитов (полученных по методу Л.И.Апуховской и соавт.,1979) регистрировали на инфракрасном спектрометре ИКС-14А в ближней области от 1.8 до 9,0 мкМ. Измерение ЭПР-сигналов эритроцитов проводили на приборе PC 1360 с Нп в качестве бокового стандарта (исследование проведено совместно с ст.н. с.лаборатории электрофизики процессов горения ХМИ HAH РК. к.х.н. В.И.Ботовой).
Для исследования конечных продуктов ПОЛ- углеводородов гомологичного ряда алканов использовался неинвазивный метод газоабсорбционной спектроскопии на хроматографе ЛХМ 80М с пламенно-ионизационным детектором. Газовую пробу предварительно концентрировали (Л.Е.Муравлева и соавт.,1985). Исследования проводили совместно с н. лаборатории электрофизики процессов горения ХМИ НАН РК Л.П.Цой. Изучение поверхностного заряда эритроцитов (q) проводилось с в изотонической среде методом тепловой денатурации (А.Е.Громов и соав.1982).
Статистические характеристики полученных результатов, корреляционные и регрессионные соотношения расчитывались на персональном компьютере типа IBM PC 180386/40.