Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Усовершенствование программ экстракорпорального оплодотворения с применением современных методик отбора сперматозоидов Дударова Алина Хасановна

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Дударова Алина Хасановна. Усовершенствование программ экстракорпорального оплодотворения с применением современных методик отбора сперматозоидов: диссертация ... кандидата Медицинских наук: 14.01.01 / Дударова Алина Хасановна;[Место защиты: ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения Российской Федерации], 2018

Содержание к диссертации

Введение

Глава 1. Значимость современных методик оплодотворения при лечении в программах ЭКО (обзор литературы)

1.1 Роль мужского фактора в структуре причин бесплодия 13

1.2 История внедрения методики ICSI .16

1.2.1 Селекция сперматозоидов для ICSI 18

1.2.2 Метод IMSI. Этапы морфологической оценки мужских гамет и методы микроскопии 21

1.3. История разработка методики оплодотворения PICSI 29

1.4. Анализ клинической эффективность методики PICSI 35

1.5 Фрагментация ДНК сперматозоидов и его значимость как фактора, определяющего тип оплодотворения в программах ЭКО 36

1.6 Преимплантационный генетический скрининг при патозооспермии 40

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Материал исследования 45

2.2 Дизайн исследования 47

2.3. Методы исследования 48

2.3.1 Общеклинические методы исследования .49

2.3.2 Гормональное исследование 50

2.3.3. Ультразвуковое исследование органов малого таза 51

2.3.4. Спермиологическое исследование эякулята .52

2.3.5 Специальные методы исследования 53

2.3.6. Протокол стимуляции функции яичников 55

2.3.7. Трансвагинальная пункция яичников 56

2.3.8 Метод оплодотворения и культивирования дробящихся эмбрионов in vitro 56

2.3.9 Перенос эмбрионов в полость матки 61

2.3.10 Поддержка лютеиновой фазы и посттрансферного периода .61

2.3.11 Диагностика наступления беременности 61

2.3.12 Статистический анализ полученных данных .61

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Клинико-анамнестическая характеристика пар с отклонениями в спермограмме, включенных в исследование 65

3.1.1. Возрастная характеристика супружеских пар с патозооспермией 65

3.1.2 Антропометрическая характеристика пациенток, включенных в исследование 68

3.1.3. Социально-экономические характеристики групп, включенных в исследование 69

3.1.4. Характеристика менструальной функции женщин 69

3.1.5. Репродуктивный анамнез пациенток 71

3.1.6. Характеристика женщин по перенесенным гинекологическим заболеваниям и оперативным вмешательствам .75

3.1.7. Гормональный профиль пациенток, включенных в исследование 78

3.1.8. Характеристика показателейсупругов пациенток, включенных в исследование .80

3.2.Параметры стимуляции функции яичников, фолликулогенеза и оогенеза 81

3.2.1. Описание раннего эмбриогенеза и анализ исходов циклов ЭКО у пар в сравниваемых группах 82

3.3. Ассоциация процента фрагментации ДНК сперматозоидов с особенностями раннего эмбриогенеза и исходами программ ВРТ 86

3.3.1. Клинико-анамнестическая, возрастная характеристики супружескихпар, включенных в исследование с высоким процентом фрагментации ДНК сперматозоидов .87

3.3.2 Антропометрическая характеристика и характеристика менструальной функции пациенток, включенных в исследование № 2 88

3.3.3. Характеристика репродуктивной функции пациенток, включенных в исследование .90

3.3.4. Характеристика анамнестических данных пациенток относительно гинекологических заболеваний и перенесенных операций .93

3.3.5. Гормональный профиль пациенток, включенных в исследование № 2 94

3.3.6. Профиль супругов пациенток, включенных в исследование № 2 96

3.4. Стимуляция суперовуляции, фолликулогенез, оогенез у пациенток исследуемых групп 96

3.4.1. Характеристика раннего эмбриогенеза и исходов программ ВРТ у пациенток в исследуемых группах 99

3.5. Оценка ролиразличных методов оплодотворения при наличии дефектов ДНК сперматозоидов по результатам PGS 101

3.5.1. Клинико-анамнестическая,социально-экономическая и возрастная характеристики включенныхв исследование № 3 супружеских пар 101

3.5.2. Гормональный профиль пациенток, включенных в исследование № 3 103

3.5.3. Профиль супругов пациенток, включенных в исследование № 3 105

3.6 Сравнительный анализ данных раннего эмбриогенеза и исходов циклов ЭКО у пациенток 105

Глава 4. Обсуждение результатов 110

Выводы 117

Практические рекомендации 119

Метод IMSI. Этапы морфологической оценки мужских гамет и методы микроскопии

В 1999 году израильские ученые во главе с доктором Бенжамином Бартовым предложили новую методику отбора мужских половых клеток для оплодотворения ооцитов с использованием сканирующей электронной микроскопии – ИМСИ (intracytoplasmic morphologically normal sperm injection – интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида без морфологических аномалий).

Увеличение при ИМСИ составляет до 6 000 раз (600 оптическое и 10 – цифровое), в то время как при ИКСИ — только до 400.

Вопрос корректной оценки морфологии сперматозоидов и количества нормальных, способных к оплодотворению клеток в эякуляте является спорным, мнения специалистов существенно разнятся. В среднем морфологически нормальные сперматозоиды составляют 40-60 % от общей массы. При этом, согласно стандартам и нормам ВОЗ 2010 года, количество сперматозоидов с идеальной формой должно быть не менее 4%.

Зрелые спермии характеризуются овальной головкой и выделенной акросомой, хвостом и шейкой. Акросома – просветление, которое занимает 50-70% площади верхней части головки. Она прекрасно окрашивается азур-эозином, но определяется и в обычном препарате. Головка некоторых спермиев закругляется в зоне стакросомы. Возле головки иногда прослеживается плазматическая рудиментарная мембрана, которая четко прослеживается при электронной микроскопии. В норме ширина головки спермия – 2,5-3,5 мкм, а длина – 4-5,5 мкм. Шейка должна иметь толщину менее 1 мкм и длину около 1,5 размера длины головки. Хвост у нормального спермия ровный, не закрученный, а его толщина одинакова по всей длине. Допускается лишь незначительное сужение хвоста в средней части. У нормальных сперматозоидов отношение длины хвоста к головке равно 1:10 или 1:9 (Рис 2).

В эякуляте патологические формы спермиев характеризуются дефектами головки, шейки и хвоста. При дефектах головки встречаются различные изменения ее формы (грушевидная, аморфная, круглая, коническая, маленькая).

В области хроматина могут прослеживаться вакуоли, не встречающиеся в норме. Маленькая область акросомы занимает не более 40% площади головки. В аномальных спермиях также встречаются множественные головки, несимметричное расположение акросомы, неспецифичное расположение хроматина (в форме ядра, кубика).

Дефекты средней части и шейки сперматозоидов приводят к изменению внешней формы. «Склоненная шейка» с хвостом образуют тупой угол. Фиксация средней части к головке с асимметрией имеет неравномерные утолщения посередине. Средняя часть часто характеризуется отсутствием митохондриальной оболочки.

Дефекты хвоста характеризуются укорочением либо удлинением. Наклонные, с неравномерной толщиной хвоста или закрученным хвостом сперматозоиды – частые патологические варианты дефектов хвоста спермия. Возможны также различные комбинации нескольких дефектов одновременно. Цитоплазматическая мембрана в норме занимает не более 1/3 головки сперматозоида. Когда проводится дифференцированный учет форм в препарате, ему подлежат только экземпляры с хвостами. У них может отсутствовать цитоплазматическая мембрана. При формировании результата исследования не считаются клетки раннего ряда до стадии образования круглых сперматид. Сперматозоиды без хвоста отмечаются отдельно. Наличие зарученых хвостов также нарушают подвижность спермиев и указывают на возможный гипоосмотический стресс.

Сперматозоиды с патологическими дефектами легко определяются в нативном препарате. При увеличении микроскопом с окулярами 7 до 400 и объективом на 40 форма и внутренняя структура сперматозоида четко прослеживаются. Встречаются случаи, когда отсутствие акросом сопровождается специфическим дефектом – маленькими головками, которые хорошо прослеживаются в нативных препаратах (глобозооспермия). Непрочная связь хвоста с головкой в области базальной пластинки иногда способствует отделению головки от хвоста. В такой ситуации головка в эякуляте разрушается фагоцитами Сертоли, поэтому в препарате под микроскопом наблюдаются только хвосты спермиев. Они в медицине получили название «булавочные головки». Точное описание в отношении патологических форм сперматозоидов лучше выставлять после предварительного окрашивания по Романовскому-Гимзе, Нохту или азур-эозином. В таком случае удобно проводить иммерсионное исследование.

Если у сперматозоидов головка имеет цитоплазматическую каплю, они считаются юными («космонавты»). У них цитоплазматическая капля расположена в области шейки подобно шарфу. По отношению к размерам головки она превышает треть длины головки. В нормальном эякуляте количество «космонавтов» не более 1%. Размеры и структура головки из хроматина, а также наличие в акросоме вакуолей хорошо выявляются при иммерсии. Детально обследовать хроматин и вакуоли можно в препаратах, окрашенных азур-эозином.

Увеличение количества головок и хвостов у спермиев нередко возникает при вирусном поражении. Округление головки (глобозооспермия) возникает из-за отсутствия акросомы. Сегодня клинические исследования спермы направлены на изучение морфологических изменений сперматозоидов при хромосомных аномалиях. Доказано, что удлинение головок, множественные хвосты и макроголовки чаще встречатся у анеуплоидных и полиплоидных спермиев. Микроделеции плеча Y-хромосомы с изменением AZF локуса выявляются при большом списке различных аномалий. Патология может быть вызвана полным отсутствием гамет либо атипией их структуры. Первая ситуация в медицине получила название синдрома «только клетки Сертоли». При оплодотворении in vitro яйцеклетки такими сперматозоидами способствует передаче с мутациями генов по наследству. Сын носителя подобной генетической патологии, возможно, будет иметь такие же патологические формы спермиев.

Индекс тератозооспермии (ИТЗ), который называется еще индексом множественных аномалий, отражает количество дефектов среди общего числа спермиев. Он позволяет оценить функциональность сперматозоидов in vitro и in vivo. С помощью клавишных счетчиков клеток крови и данного индекса производится подсчет фертильности эякулята. Дефекты хвоста, головки и средней части отражаются отдельно. Оценка результатов производится на основе ИТЗ от 1 до 3. Если цифра равна 1, каждый спермий имеет по одному дефекту, 3 – сперматозоид имеет нарушения структуры головки, тела, хвоста. Значение более 1,6 значительно снижает оплодотворяющую способность сперматозоидов.

При наличии в эякуляте менее 4% морфологически нормальных форм сперматозоидов эффективность программ ВРТ существенно снижается [14].

Под действием активных форм кислорода в сперматозоидах образуются апоптозные пузырьки, приводящие к повреждению – фрагментации ДНК сперматозоидов, что резко ухудшает результативность программы ЭКО после переноса эмбрионов, полученных в результате искусственного оплодотворения ооцитов такими сперматозоидами.

Такие дефекты не всегда можно обнаружить при наблюдении в обычный микроскоп. Для обнаружения таких апоптозных дефектов используется специальная сверхвысокоразрешающая высококонтрастная видеомикроскопия.

Также, согласно данным A.S. Setti и др., селекция спермтозоида под увеличением 6600 для проведения ICSI благоприятно влияет на результативность ВРТ у супружеских пар с тератозооспермией [36]. В ходе проспективного рандомизированного исследования 182 супружеские пары были разделены на 2 группы: I - которым проводилось стандартное ИКСИ и II -у которых применялась технология IMSI. Группы были сопоставимы по анамнестическим, лабораторным и клиническим параметрам. После селекции мужской половой клетки стандарным методом проводилось определение фрагментации ДНК отобранных сперматозоидов с помощью TUNEL assay. По итогам компьютерного анализа 64,8% сперматозоидов, отобранных для ИКСИ, были определены как патологические с высоким уровнем фрагментации ДНК.

Анализ процента оплодотворения ооцитов среди 2 групп продемонстрировал, что в результате применения стандарной методики селекции сперматозоидов для ИКСИ оплодотворились 58 ооцитов, среди полученных в результате оплодотворения эмбрионов 60,3 % (35) в день переноса были оценены как отличные. В группе ИМСИ оплодотворились 55 ооцитов, отличную оценку получили 83,6 % (46 эмбрионов), развившихся в результате оплодотворения.

Метод оплодотворения и культивирования дробящихся эмбрионов in vitro

После аспирации фолликулов при помощи диссекционного микрокопа сразу же после аспирации производилась идентификация яйцеклеток и куммулюсных клеток, оценка зрелости ооцитов.Постоянно поддерживались определенные температурные условия и рН среды. С целью предварительной инкубации при температуре +370 С и атмосфере с 5% СО2 отмытые от фолликулярной жидкости и крови ооцит-кумулюсные комплексы помещали на 2-3 часа в стерильные планшеты Nunc с культуральной средой (Fertilizationmedium, COOK, Австралия), где производилась дифференцировка ооцитов по степени зрелости.

Метод оплодотворения определялся количеством аспирированных яйцеклеток и такими показателями спермограммы как объем эякулята, концентрация в нем сперматозоидов, количество прогрессивно-подвижных сперматозоидов, агглютинации).

После седиментационного разделения в градиенте плотности при центрифугировании все образцы эякулята отмывали в буфере для гамет (Gametebuffer, COOK, Австралия) и ставили на центрифугирование.

При нормозооспермии (ВОЗ, 2010) преовуляторные ооциты инсеминировали в четырехлуночных планшетах Nunc, т.е. каждый ооцит переносился в каплю с содержанием прогрессивно-подвижных сперматозоиды в концентрации примерно 100 000- 150000 на 1 мл.

При необходимости проводили оплодотворение ооцитов методом ИКСИ. Перед проведением ИКСИпри помощи раствора гиалуронидазы. в течение 20 секунд производилось денудирование ооцитов.

Этапы проведения ИКСИ:

1. отбор сперматозоида с иммобилизацией его;

2. аспирация выбранной клетки в инъекционную пипетку;

3. фиксация яйцеклетки и ее поворот до расположения полярного тельца в 6 или 12 ч;

4. инъекция сперматозоида и аспирированной ооплазмы в ооцит. Этапы проведения ПИКСИ:

Для проведения PICSI использовались чашки Петри - культуральная чашка из полистирола с нанесёнными на верхнюю часть чашки тремя микрокаплями гиалуроновой кислоты. Чашки стерильны, не содержат эндотоксина и нетоксичны для эмбрионов. Спустя 5 минут после проведения гидратирования микрокапель и добавления суспензии сперматозоидов происходит набухание гиалуроната и начинается связывание сперматозоидов.

Для быстрого получения большого количества связанных с гиалуроновой кислотой сперматозоидов на микрокаплю наносят суспензию сперматозоидов с концентрацией приблизительно 100000 способных к связыванию с гиалуронатом мужских гамет на 1 мл (примерно 1000-2000 сперматозоидов на 10-20 мкл). Край микрокапли гиалуроната является физическим барьером, местом первого контакта сперматозоида с каплей гиалуроновой кислоты, поэтому многие сперматозоиды останавливаются у края капли. Однако, отбор следует проводить в середине микрокапли. Для отбора связавшегося сперматозоида кончик микропипетки для ИКСИ располагали рядом с ним и аккуратно втягивали в пипетку жидкость, чтобы сперматозоид вошёл в пипетку и таким образом отбираются 20-50 сперматозоидов. Селектированные сперматозоиды выпускались в каплю PVP (поливинилпиролидон) для подготовки к ИКСИ (инактивация хвоста, повторная оценка подвижности и морфологии). Далее действовали согласно стандартному протоколу ИКСИ, загружая в пипетку отобранные сперматозоиды для их инъекции в ооциты. Оптимальной для связывания сперматозоидов с гидрогелем гиалуроновой кислоты является температура ниже 30С. При температуре выше 30С скорость движения сперматозоидов возрастает и силы связывания для остановки движения может быть недостаточно.

Для осуществления последующего культивирования оплодотворенные ооциты переносили в культуральную среду. Спустя 14-16 часов производилась оценка процесса оплодотворения. Оплодотворение оценивалось как состоявшееся при образовании в цитоплазме 2 пронуклеусов.

В соответствии с классификацией, принятой Istanbul consensus workshop on embryo assessment (ESHRE, 2011) («модифицированная» классификация D. Gardner) [95] все полученные эмбрионы были классифицированы по морфологическим критериям:

Внутренняя клеточная масса

I класс (А) - хорошо различима, содержит много компактно расположенных, плотно упакованных клеток;

II класс (В) - хорошо различима, но имеет незначительные дефекты (небольшой объем, неплотно упакована, мало клеток);

III класс (С) - трудно различима, содержит всего несколько клеток. Трофэктодерма

I класс (А) - хорошо организована, многоклеточная, формирует плотный эпителий;

II класс (В) - содержит малое количество неравномерно распределенных клеток;

III класс (С) - незначительное количество клеток.

Все принятые оценки бластоцист основаны на классификации Гарднера [Gardner, 1999]. В этой системе каждой бластоцисте дают три независимые оценки:

I. Цифру, обозначающую стадию развития

1. Ранняя бластоциста - бластоциста, в которой полость занимает менее половины объема эмбриона.

2. Бластоциста, или средняя бластоциста - полость занимает более половины объема эмбриона.

3. Полная бластоциста - полость занимает практически весь объем эмбриона, но сам эмбрион еще не начал «раздуваться».

4. Поздняя, или экспандированная бластоциста - полость продолжает расти, растягивая весь эмбрион, и теперь превышает его исходный размер. Сама бластоциста «раздувается», а ее оболочка (zona pellucida) растягивается и становится тоньше.

5. Хэтчинговая бластоциста – бластоциста, начавшая «вылупляться» из zona pellucida.

6. Бластоциста вылупившаяся.

II.Букву, обозначающую качество ВКМ – внутренней клеточной массы («комка» клеток внутри бластоцисты, из которого в будущем образуется собственно плод и некоторые внезародышевые ткани).

А – отлично – много клеток, они компактно уложены.

B – хорошо – клеток меньше или они уложены менее компактно.

C – плохо – мало клеток, уложены некомпактно.

III.Букву, обозначающую качество ТЭ – трофоэктодермы («пузыря» клеток вокруг полости бластоцисты, из которых в будущем образуется эмбриональная часть плаценты).

A – отлично – много клеток, образующих «хороший» эпителиальный пласт.

B – хорошо – клеток меньше, эпителий «хуже».

C – плохо – очень мало клеток.

Описание раннего эмбриогенеза и анализ исходов циклов ЭКО у пар в сравниваемых группах

Включенные в исследование пациентки имели женский тип телосложения с правильным развитием вторичных половых признаков.

Проведенный анализ антропометрических данных, анализ анамнестических и клинических данных, описанных в таблице 17, не выявил значимых различий в средних показателях между группами, что свидетельствует об однородности исследуемых групп.

На основании оценки основных характеристик менструального цикла женщины в исследуемых группах были сопоставимы. У большинства пациенток менархе наступило в 14 лет, при этом самый ранний возраст менархе составил 9, а самый поздний – 18 лет. Средняя продолжительность менструального цикла составила 29 дней, а длительность менструального кровотечения – 5 дней. Анализ характера менструальной функции женщин показал, что у большинства пациенток цикл был регулярным.

Для определения влияния выбора методики оплодотворения ооцитов при различных видах патозооспермии на исходы лечения в программах ВРТ нами была проведена оценка частоты имплантации, наступления клинической беременности, ранних репродуктивных потерь и живорождения.

Согласно полученным нами данным, имелись достоверные различия по частоте имплантации между 2 и 3 группами (по критерию 2= 6,0; P = 0.014). В первой группе процент имплантации составил 40,5%, во второй– 33,1%, в третьей группе - 50 %, что демонстрирует прямую зависимость качества эмбрионов от генетического вклада мужского генома (Рисунок 12).

Нами отмечена статистически значимая ассоциация между частотой наступления клинической беременности и методикой оплодотворения ооцитов пациенток (тест Манна-Уитни, р= 0,28) в исследуемых группах. Она была выше в группе, где перед проведением процедуры ИКСИ производилась селекция сперматозоидов по способности к связыванию с гиалуронатом. Процент наступления клинической беременности,представленный на рис.13, в 1 группе со стандарным ЭКО был равен 40,6% (13 супружеских пар), во 2 группе - 38,1% (40 супружеских пар), в 3 группе, в которой проводилось ПИКСИ - 59,3% (35 супружеских пар).

Далее нами проводился анализ частоты неразвивающихся беременностей у супружеских пар после проведения программы ЭКО, ЭКО/ИКСИ и ЭКО/ПИКСИ, который представлен на рис.14.

Процент репродуктивных потерь из расчета на наступившие беременности в первой группе пациентов (стандартное ЭКО) составил 15,4 %, тогда как в группах ИКСИ и ПИКСИ он был равен 35 % и 23,2% соответственно, что свидетельствует о целесообразности использования ПИКСИ при патозооспермии. В I группе из 13 пациенток с наступившей беременностью родами завершились 84,6 % случаев (11), из них была 1двойня. Всего родилось 12 здоровых детей. Частота прерывания беременности составила 15,4 % (2).

Во II группе из 40 пациенток с наступившей беременностью родили 35 % (14), из них 3 двойни, частота прерывания беременности составила 65% (26).

Из 62 пациенток III группы исследования с беременностью родили в 76,8 % случаев женщин (48), из них 4 двойни. Всего родилось 45 здоровых детей. Частота прерывания беременности составила 23,2% (14). Кроме того, анализ процента живорождения после проведения программ ВРТ в исследуемых группах продемонстрировал значимые различия по проценту живорождения из расчета на количество наступивших беременностей после проведения программ ВРТ в пользу 1 группы с использованием стандарного ЭКО и группы 3 с применением методики «физиологический» селекции мужских гамет для ИКСИ по сравнению с группой 2, где проводилось ИКСИ. Однако следует принимать во внимание, что в группе 1 значительно преобладал трубно-перитонеальный фактор бесплодия и более молодой возраст супруга в паре, что указывает на изначально хорошее качество половых гамет.

Также отмечалось статистически значимое различие в сравниваемых группах относительно процента живорождения из расчета на перенос эмбриона в полость матки. В 1 группе пациентов (стандартное ЭКО) он был равен 36,4%, тогда как в группе 2 (ЭКО\ИКСИ) - 27,6 %, а в группе 3 с выбором сперматозоидов по способности связываться с ГК процент живорождения составил 53,3% (по критерию 2= 6,206; P = 0.045).

Клинико-анамнестическая,социально-экономическая и возрастная характеристики включенныхв исследование № 3 супружеских пар

С целью выявления и последующего исключения влияния возможных конфаундеров и минимизации ошибки системы была изучена клинико-анамнeстическая характеристика включенных в исследование групп.

Возраст супружеских пар, включенных в исследование, выясняли на момент начала лечения в программе ЭКО и ПЭ. На основaнии критерия Колмогoрова-Смирнова было выявлено, что по возрастному критерию партнеров в группах исследования этот показатель так же не подчинялся принципу нормального распределения. Тест Краскела-Уоллеса не обнаружил значимых различий между сравниваемыми группами (по критерию 2= 4,914).

Срeдний возраст женщин в I группе состaвил 31 год (30-36); во II – 33 года (31-37). Срeдний возраст мужчин в I группе составил 33 года (30-36); во II– 35 лет (31-39).

Все пациентки, вошедшие в настоящее исследование, характеризовались жeнским типом телосложения и правильным развитием вторичных половых признаков.

Проведенный анализ антропометрических данных не выявил значимых различий в средних показателях вeса, рoста, ИМТ между группами. Средний рост пациенток составил 1,64 (1,6-1,7) м в группе 1, в группе 2- 1,62 (1,65-1,73) м (р=0,317; тест Краскела-Уоллеса). Средний вес пациенток составил 64 (57,4-69) кг в группе 1, в группе 2 – 65 (59-73) кг (р=0,236). ИМТ в среднем равнялся 21,5 и 23,3 соответственно (р=0,249).

Соглaсно проведенному анализу исследуемые группы были однородны по анамнестическим и клиническим данным. По семейному положению, условиям проживания, уровню образования и трудовой занятости пациентки также между группaми исследования не различались.

Отягощенность по наследственным заболеваниям между группами также не различалась и была представлена онкологическими, сердечно-сосудистыми заболеваниями (гипертоническая болезнь, инсульт), аллeргическими заболеваниями (бронхиальная астма, нейродермит) и эндокринными заболеваниями (сахарный диабет 2 типа). По частоте распространения курения исследуемые группы между собой статистически значимо не различались (2, р=0,297).

Данные репрoдуктивного анaмнеза фиксировались на момент начала проведения программы ЭКО/ИКСИ и ЭКО/ПИКСИ.

Начало половой жизни в группах в срeднем отмечалось в 17,2±2,6 лет и 18,0±2,5 лет сoответственно, и не имело стaтистических различий (p=0,775).

Продолжительность бесплoдия (рис.9) у женщин в группе 1 составила 5,6 (3-8) лет, в группе 2 – 4,0(3-7)лет при этoм не были выявлeны статистически значимые различия между исследуемыми группами (тест Kolmogorov-Smirnov). Анализ данных о типе и этиологическом факторе бесплодия у пар исследуeмых групп не выявил статистически значимых различий в распределении случаев первичного и втoричного бесплодия (2=1,23, p=0,57 и 2, p=0,157 соответственно).

По кoличеству попытoк ЭКО в анамнезе (тест р=0,820), частоте гинекологических заболеваний (р=0,430), оперативных вмeшательств исследуемые группы также были однoродны (р=0,723). По частоте встречаемости соматической патологии пары в исследуемых группах между собой также не отличались (р=0,34).