Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Современные данные об этиологии, патогенезе, клинической картине, диагностике гиперплазии эндометрия
1.2. Значение эстрогеновых гормонов в развитии гиперплазии эндометрия
1.3. Значение Р-катенина и гликоген синтазы киназы-ЗВ действии эстрогенов на матку и развитии гиперплазии эндометрия
1.4. Взаимоотношения эстрогеновых гормонов и пролактина в организме
1.5. Значение пролактина в развитии гиперплазии эндометрия
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы исследования 33
2.2. Методы исследования 36
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение
3.1. Клиническая часть 43
3.1.1. Общая характеристика пациенток 43
3.1.2. Характеристика менструальной функции 46
3.1.3. Данные ультразвукового исследования о состоянии эндометрия
3.1.4. Характеристика гистологических изменений в эндометрии 47
3.1.5. Данные по содержанию пролактина в сыворотке крови 50
3.1.6. Данные по содержанию фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов в сыворотке крови
3.1.7. Данные по содержанию эстрадиола и прогестерона в сыворотке крови
3.1.8. Экспрессия эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в эндометрии
3.2. Экспериментальная часть
3.2.1. Масса матки мышей при введении эстрадиола и пролактина 60
3.2.2. Морфологические изменения в матке мышей при введении эстрадиола и пролактина
3.2.3. Пролиферация в матке мышей при введении эстрадиола и пролактина
3.2.4. Экспрессия эстрогеновых рецепторов в матке мышей при введении эстрадиола и пролактина
3.2.5. Экспрессия прогестероновых рецепторов в матке мышей при введении эстрадиола и пролактина
3.2.6. Экспрессия р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр в матке мышей при введении эстрадиола и пролактина
Обсуждение полученных результатов 79
Вьгооды 98
Практические рекомендации 99
Список литературы 100
- Значение эстрогеновых гормонов в развитии гиперплазии эндометрия
- Взаимоотношения эстрогеновых гормонов и пролактина в организме
- Характеристика менструальной функции
- Морфологические изменения в матке мышей при введении эстрадиола и пролактина
Введение к работе
Актуальность проблемы
Гиперплазия и рак эндометрия является классическими гормональнозависимыми неопластическими состояниями. Хорошо известно, что в большом проценте случаев развитию рака эндометрия предшествует его гиперплазия (Jimynez-Ayala М. и др., 2008; Pungal А. и др., 2010). И возможно, что характеристика гормонального статуса женщин с гиперплазией эндометрия, позволит выявить те особенности гормонального статуса, которые в последующем подтолкнут эндометрий "к злокачественной трансформации.
Предыдущими исследованиями было показано, что пролактин и дофаминергические препараты, изменяющие уровень пролактина в организме, могут изменять чувствительность матки к эстрогеновым гормонам. Одна группа данных демонстрирует, что пролактин и метоклопрамид-индуцированная гиперпролактинемия тормозит эстроген-индуцируемую пролиферацию и рост в матке или, наоборот, способствуют развитию опухолей матки (Gunin А., 1996; Spritzer P.M. и др., 1996; Kimura J. и др., 1986; Imai А. и др. 1993). Имеются исследования, которые не выявили влияния пролактина на эстрогензависимые процессы в матке (Borgundvaag В. и др. 1992; Hernandez D.E. и др. 1980; Kiss R. и др. 1987). Кроме того, в ряде работ описывается, что пролактин усиливает эстрогензависимые изменения в матке (Hernandez D.E. и др. 1980; Singtripop Т. и др. 1991; Kelly Р.А. и др. 1997; Ohno Y., 1982). Следует отметить, что все работы в этой области были проведены в условиях краткосрочного действия эстрогенов, во время которого эстрогены не могут воспроизвести всех своих эффектов в матке, например, таких как развитие морфогенетических изменений, включая развитие эстрогензависимого рака (Gunin A.G. и др. 2001; Prat J. и др. 2007). Подобные морфогенетические изменения могут возникать в матке только при длительном воздействии эстрогенов (Gunin A.G. и др. 2001; Prat J. и др. 2007). Однако исследования, использующие длительные эстрогенные воздействия, отсутствуют в мировой литературе. Клинические наблюдения по этой проблеме также весьма противоречивы. Одна группа данных поддерживает идею о том, что пролактин участвует в развитии эстрогензависимого рака в матке, а другая - нет (Dexeus S., Barri P.N., 1998; Levina V.V. и др., 2009). Таким образом, можно заключить, что в настоящее время нет надежных экспериментальных и клинических доказательств, раскрывающих значение пролактина для регуляции эстрогензависимых событий в матке, включая
развитие гиперпластических и неопластических процессов. Поэтому определение роли гормона пролактина для развития гиперплазии эндометрия и действия эстрогенов на матку представляет собой актуальную научную задачу в области акушерства и гинекологии, эндокринологии и морфологи.
Цель работы - определить роль гормона пролактина в развитии гиперпластических процессов эндометрия у женщин репродуктивного возраста и в формировании экспериментальной гиперплазии эндометрия.
Задачи исследования:
-
Изучить концентрацию пролактина, стероидных и пептидных гормонов у женщин с подтвержденным гистологическим диагнозом гиперпластических процессов эндометрия.
-
. Исследовать зависимость экспрессии рецепторов эстрогенов и прогестерона в эндометрии от концентрации пролактина в сыворотке крови у здоровых женщин репродуктивного возраста и больных с гиперплазией эндометрия.
-
Исследовать значение пролактина в развитии экспериментальной гиперплазии эндометрия у мышей путем длительного введения эстрогеновых гормонов на фоне повышения концентрации пролактина в организме.
-
Изучить в эксперименте механизм действия пролактина в развитии гиперплазии эндометрия путем определения экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов, р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр в эндометрии.
Научная новизна. В проведенных исследованиях впервые представлена роль пролактина в развитии гиперпластических процессов эндометрия, относительно сниженной его концентрации, которая сопровождается повышением экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов эндометрия в отличии от здоровых женщин. Впервые экспериментально на мышах было доказано, что пшерпролактинемия тормозит эстроген-индуцированную пролиферацию, с последующим развитием гиперпластических процессов эндометрия. В условиях гиперпролактинемии уменьшается экспрессия эстрогеновых и прогестероновых рецепторов, гликоген синтазы киназы-Зр и возрастает - р-катенина в тканях эндометрия мышей. Полученные экспериментальные данные полностью подтверждают клинические наблюдения, свидетельствующие, что относительное снижение пролактина способствует железистой гиперплазии эндометрия. Эффект этого гормона реализуется
посредством рецепторов половых гормонов, а так же р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр.
Практическая значимость. Практическая значимость заключается в использовании полученных результатов для формирования группы риска женщин по развитию гиперпластических процессов эндометрия, их прогрессирования и лечения.
Результаты данной работы существенно расширяют теоретические знания о формировании экспериментальной гиперплазии эндометрия у лабораторных животных при действии эстрогенов на фоне гиперпролактинемии, а также возникающих при этом изменений рецепторного аппарата матки и активности регуляторных клеточных путей.
Внедрение результатов работы. Полученные в работе данные используются при чтении лекций на кафедрах акушерства и гинекологии, функциональной и лабораторной диагностики Чувашского государственного университета. Кроме того, результаты исследования внедрены в лечебно-диагностический процесс ГУЗ "Президентский перинатальный центр" Министерства Здравоохранения и Социального Развития Чувашской Республики, ГУЗ "Республиканская клиническая онкологическая больница" Министерства Здравоохранения и Социального Развития Чувашской Республики.
Апробация работы. Результаты исследования по теме диссертации доложены и обсуждены на заседании кафедры акушерства и гинекологии Чувашского государственного университета в 2008году. Результаты работы, отражающие основные положения диссертации, доложены на научных конференциях Чувашского государственного университета, на V Всероссийской конференции с международным участием "Механизмы функционирования висцеральных систем" (Санкт-Петербург, 16-19 октября 2007), 8-м Европейском конгрессе эндокринологов (Глазгоу, Великобритания, 2006 г.), IV съезде акушеров-гинекологов России (Москва, 2008), 18 международной конференции Российской ассоциации репродукции человека (Москва-Самара, 2008), общероссийский семинар «Репродуктивный потенциал России: от безопасного аборта и контрацепции - к безопасным родам» (Казань, 2010).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ. Четыре статьи опубликованы в журнале, входящем в перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий ВАК.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания клинического материала и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических
Значение эстрогеновых гормонов в развитии гиперплазии эндометрия
Слизистая оболочка матки, эндометрий, выстлана однослойным призматическим эпителием, под которым располагаются простые трубчатые железы и соединительная ткань. Соединительную ткань слизистой оболочки матки принято называть стромой эндометрия. Все компоненты эндометрия чрезвычайно чувствительны к женским половым гормонам, что обусловлено наличием большого количества рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Наибольшее количество рецепторов обнаруживается в поверхностных отделах эндометрия, поэтому именно в поверхностных отделах происходят наиболее существенные изменения, вызываемые половыми гормонами. В связи с этим поверхностный слой эндометрия назван функциональным слоем, а более глубокие, где изменения в ответ на половые гормоны выражены менее -базальным (Волкова О.В., 1983).
Основные эффекты половых гормонов на эндометрий хорошо известны. Эстрогены индуцируют рост и деление клеток, улучшение кровоснабжения, увеличение содержания воды, изменение клеточного состава и состояния межклеточного вещества стромы (Епифанова О.И., 1965, Черток А.Г. и др., 1990).
Прогестины приводят к дальнейшему увеличению кровоснабжения и усилению отека стромы, изменениям в клеточном составе стромы и в состоянии ее межклеточного вещества (Топчиева О.И. и др., 1978; Волкова О.В., 1983). Прогестерон блокирует деление эпителиальных и стромальных клеток и вызывает в них секреторные изменения. Продукты секреции, главным из которых является гликоген, накапливаются в цитоплазме клеток и секретируются в просвет желез и полость матки. Клетки стромы не имеют возможности выводить продукты секреции в окружающие полости, поэтому их секреторные продукты накапливаются в их же цитоплазме. Это приводит к существенному увеличению объема цитоплазмы клеток стромы. Содержащие в цитоплазме секреторные продукты клетки стромы получили название децидуальных клеток (Топчиева О.И. и др., 1978; Волкова О.В., 1983).
Физиология существования эндометрия заключается в цикличности изменений, происходящих в нем под действием половых гормонов, которые также вырабатываются циклично в организме женщины. Так в первую фазу менструального цикла в яичниках вырабатываются преимущественно эстрогеновые гормоны, которые попадая в циркуляцию, достигают матки и оказывают в ней свое действие. После овуляции секреция эстрогенов в яичнике существенно уменьшается и нарастает продукция прогестерона желтым телом. Таким образом, основная часть времени второй фаза менструального цикла проходит под доминированием прогестерона, который также попадает в системную циркуляцию и достигает матки, где и оказывает свое действие. В случае, если не произошло оплодотворение и имплантация бластоцисты, то желтое тело подвергается инволюции, синтез гормонов в нем прекращается и в организме женщины наступает резкий спад концентрации прогестинов (Остин К., Шорт Р., 1987). Это обстоятельство, конечно же, сказывается и на эндометрии, в котором развиваются своеобразные некробиотические изменения, обусловленные ухудшением кровоснабжения и высвобождением большого количества протеолитических ферментов. Все это приводит к отторжению поверхностных слоев эндометрия (функционального слоя) и кровотечению из поврежденных сосудов (Остин К., Шорт Р., 1987).
Таким образом, физиология существования эндометрия у женщины заключается в росте, секреции и отторжению части эндометрия. Эта трехэтапная регуляция таит в себе возможность развития множества патологии, если хотя бы один этап будет нарушен (Берштейн Л.М., 2000).
Одним из результатов дисрегуляции эндометрия является развитие его гиперплазии. Гиперплазия эндометрия, или повышенное разрастание ткани без признаков неконтролируемого роста, может возникнуть в результате усиленной его пролиферации в первую фазу менструального цикла с недостаточными секреторными преобразованиями во второй фазе менструального цикла. В случае ановуляторного цикла пролиферативные процессы в эндометрии также будут продолжаться более длительное время. После наступления менопаузы в организме женщины могут циркулировать эстрогены, а прогестерон практически не выявляется. Это обстоятельство также может привести к избыточному росту эндометрия. Кроме нарушений внематочных звеньев регуляции, могут присутствовать нарушения в самом эндометрии (Аминева Х.К., Журавлева Т.Б., 1974; Берштейн Л.М., 2000; Goldstein S.R., 2010). Описаны случаи изменений в структуре рецепторов половых гормонов, в трансдукции сигнала эстрогенов и прогестерона в тканях-мишенях (Rios S.S. и др., 2010; Zakharov V. и др., 2010). Воспалительный процесс в эндометрии также способствует развитию нарушений в регуляции его пролиферации (Адамян Л.В. и др., 2007). Хорошо известно, что в большом проценте случаев развитию рака эндометрия предшествует его гиперплазия (Jimynez-Ayala М. и др., 2008).
По мнению многих ученых классификация гиперпластических состояний эндометрия не достаточно совершенна. Поэтому постоянно предлагаются новые основы и пункты для разделения нозологии по группе гиперплазии эндометрия (Кондриков Н.И., Силакова А.В., 2010; Salman М.С. и др., 2010).
Морфологически простая типичная железистая и железисто-кистозная гиперплазия различаются между собой только наличием кистозно расширенных желез (Ганина К.П. и др., 1990; Кондриков Н.И., Силакова А.В., 2010). В гистологических срезах видны участки эндометрия с увеличенным числом желез разнообразной формы и величины. Железы разделены широкими прослойками соединительной ткани и выстланы высокопризматическим эпителием с четким апикальным краем. Ядра овальные, расположение ядер многорядное. Хроматин их гипо- и гиперхромныи. Встречаются незрелые клетки цилиндрического эпителия. Ядрышки не всегда четко контурируются. В железистых и стромальных клетках часто встречаются фигуры митоза, что свидетельствует об активной пролиферации как железистых, так и стромальных компонентов. В кистозно-расширенных железах содержится слизь, а эпителий, который их выстилает, высокопризматический или уплощен (Кондриков Н.И., 2008; Кондриков Н.И., Силакова А.В., 2010). Сложная типичная железистая гиперплазия эндометрия характеризуется большим увеличением количества желез (Salman М.С. и др., 2010). Нарастает вариабельность желез по размерам и форме: отмечаются железы различной величины, круглые, овальные, извитые, звездчатые. Клетки эпителия призматические, увеличены в размерах, располагаются в несколько рядов. Ядра остаются однородными по размерам и форме, ориентированы в просвет желез и располагаются в два — четыре ряда. Ядрышки неразличимы, митозы часты, могут определяться их патологические формы (Петрова Е.Н., 1964; Кондриков Н.И., 2008; Кондриков Н.И., Силакова А.В., 2010; Salman М.С. и др., 2010).Одним из основных признаков атипической гиперплазии эндометрия является нарушение гистоархитектоники эндометрия с преобладанием железистого компонента над стромальным. Характерно тесное расположение желез с наличием узких прослоек стромы между ними. Железы крайне разнообразны по размерам и форме. Обычно они неправильной формы, звездчатые, фестончатые, ветвящиеся, с «пальцевидными» выпячиваниями в строму или типа кленового листа (Ганина К.П. и др., 1990; Кондриков Н.И., 2008; Leitao М.М. и др., 2010). Клетки эпителия, выстилающего железы увеличены, располагаются в один или несколько рядов. Ядра овальной, округлой формы, увеличены, нагромождаются
Взаимоотношения эстрогеновых гормонов и пролактина в организме
Эстрадиол выявлялся в сыворотке крови пациенток на 3-й день менструального цикла с , применением иммуноферментного метода и коммерческих наборов, производства фирмы (ВСМ Diagnostics, США). Результаты исследования показали, что в группе пациенток без патологии эндометрия уровень эстрадиола в сыворотке крови составил 80,62± 12,75 пг/мл (М±т). В группе пациенток с гиперпластическим процессом эндометрия содержание эстрадиола в сыворотке крови было 60,41±9,81 пг/мл (М±т). Разница составила 25,1 %, хотя отличие между группами статистически недостоверно (р 0,05; U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни) (Рис. 7). Таким образом, результаты выявили достаточно существенное снижение содержания эстрадиола в группе с патологией эндометрия по сравнению с группой пациенток с нормальным эндометрием. Однако отличия статистически недостоверны.
Прогестерон выявлялся в сыворотке крови пациенток на 21-й день менструального цикла с применением иммуноферментного метода и коммерческих наборов, производства фирмы (Алкор Био, Россия). Результаты исследования показали, что в группе пациенток без патологии эндометрия уровень прогестерона в сыворотке крови составил 23,53±3,55 нмоль/л (М±т). В группе пациенток с гиперпластическим процессом эндометрия содержание прогестерона в сыворотке крови было 21,21 ±2,58 нмоль/л (М±т). Отличие между группами статистически недостоверно (р 0,05; U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни) (Рис. 7).
Содержание эстрадиола (пг/мл, М±т) и пргестерона (нмоль/л, М±т) в сыворотке крови пациенток с гиперпластическим процессом эндометрия в сравнении с данными пациенток с нормальным эндометрием. Эстрадиол определялся на 3-й день, а прогестерон на 21-й день менструального цикла в сыворотке крови пациенток иммуноферментным методом. Нет достоверных (р 0,05) отличий между группами, U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни.
Таким образом, в содержании прогестерона в сыворотке крови не выявлено существенных и достоверных отличий между группами пациенток с нормальным эндометрием и гиперпластическим процессом эндометрия. 3.1.8. Экспрессия эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в эндометрии
Выявление рецепторов эстрогенов и прогестерона проводилось непрямым иммуногистохимическим методом. Иммуногистохимически эстрогеновые рецепторы-а и прогестероновые рецепторы выявлялись в ядрах железистого эпителия и клетках стромы эндометрия. Рецепторы выявлялись в виде коричневого окрашивания ядер (Рис. 8), так как подавляющее большинство рецепторов локализуются в ядрах, а для визуализации выбран метод с бензидином, который дает коричневое окрашивание. В случае эстрогеновых рецепторов интенсивность специфического окрашивания примерно одинакова в эпителии желез и клетках стромы эндометрия, что и подтверждается результатами фотометрии (Рис. 8, 9). А в случае прогестероновых рецепторов интенсивность окрашивания стромы эндометрия несколько превышала окрашивание ядер эпителиальных клеток желез (Рис. 10, 11).
В группе пациенток с гиперплазией эндометрия уровни экспрессии эстрогеновых рецепторов-а в эпителии желез и клетках стромы были повышены по сравнению с контрольной группой пациенток без патологии эндометрия (Рис. 8, 9). Отличие между группами в экспрессии эстрогеновых рецепторов в эпителии желез составило - 27,9%, а клетках стромы - 19,6%. Статистический анализ показывает высокую достоверность отличий между группами по экспрессии эстрогеновых рецепторов (Рис. 9).
В группе пациенток с нормальным эндометрием получены коэффициенты корреляции между концентрацией пролактина в сыворотке крови и уровнем рецепторов эстрогенов в эпителии желез г=-0,51 (р 0,05), и клетках стромы -г=-0,38 (р 0.05). В группе пациенток с гиперплазией эндометрия коэффициент корреляции между концентрацией пролактина в сыворотке крови и уровнем рецепторов эстрогенов в эпителии желез составил г=-0,48 (р 0,05), и в клетках стромы - г=-0,55 (р 0,05). Рисунок 8. Выявляемость рецепторов эстрогенов-а в матке пациенток с гиперпластическим процессом эндометрия (Б), в сравнении с данными пациенток с нормальным эндометрием (А). Ядра клеток, обладающих эстрогеновыми рецепторами, окрашены в коричневый цвет. Ж - железы эндометрия, С - строма эндометрия. Непрямой иммуногистохимический метод. Шкала- 100 мкм.
Таким образом, корреляционный анализ показывает наличие достоверной отрицательной взаимосвязи между концентрацией пролактина в сыворотке крови и уровнем рецепторов эстрогенов в эпителии желез и клетках стромы эндометрия. эпителии желез клетки стромы
Уровни экспрессии прогестероновых рецепторов в эпителии желез и клетках стромы пациенток с гиперпластическим процессом эндометрия также были повышены по сравнению с контрольной группой пациенток без патологии эндометрия (Рис. 10, 11). Отличие между группами в экспрессии прогестероновых рецепторов в эпителии желез составило - 26,8%, а клетках стромы - 14,1%. Статистический анализ показывает наличие достоверного отличия между группами по данным экспрессии прогестероновых рецепторов в эпителии желез эндометрия и отсутствие достоверного отличия со стороны клеток стромы эндометрия (Рис. 11).
В группе пациенток с нормальным эндометрием получены коэффициенты корреляции между концентрацией пролактина в сыворотке крови и уровнем прогестероновых рецепторов в эпителии желез г=-0,37 (р 0,05), и клетках стромы - г=-0,44 (р 0,05). В группе пациенток с гиперплазией эндометрия коэффициент корреляции между концентрацией пролактина в сыворотке крови и уровнем прогестероновых рецепторов в эпителии желез составил г=-0,38
Характеристика менструальной функции
Оценка пролиферации в матке проводилась путем подсчета митозов и бромодезоксиуридин-положительных клеток. Процент митозов показывает долю клеток, находящихся в М-фазе клеточного цикла, а процент бромодезоксиуридин-положительных клеток демонстрирует порцию клеток, находящихся в S-периоде клеточного цикла. Бромодезоксиуридин является искусственно синтезированным веществом и превосходно выявляется иммуногистохимическими методами. Установлено, что бромодезоксиуридин, способен встраиваться в молекулу вновьсинтезируемой ДНК, вместо цитозина, что происходит в S-период клеточного цикла. Поэтому применение BrdU является прекрасным средством для оценки пролиферативной активности клеток. В экспериментах всем животным BrdU вводился за 2 часа до извлечения органов. Выбор именно этого времени введения основывается на многочисленных литературных данных (Gunin А. и др., 2000, 2001, 2002, 2005).
Установлено, что вызванное эстрогенами увеличение пролиферации, во всех структурах матки, обусловлено снижением длительности всех периодов клеточного цикла, возрастанием доли клеток, находящихся в S- и О2 периодах клеточного цикла, при этом продолжительность Gi-периода колеблется от 6 до 8 часов, S-периода - 5-6 часов, С2-периода - 6-8 часов (Лагучев С.С, 1970; Лагучев С.С, 1975), причем, время синтеза ДНК уменьшается с 5 до 2,6 часов. Эстрогены стимулируют также выход клеток из G0- в Gi-фазу клеточного цикла (Couse J.F., Korach K.S., 1999).В результате этого в матке повышается количество клеток, проходящих и прошедших S-период, и возрастает численность делящихся клеток (Tang L. и др., 2009). Поэтому, при исследовании тканей матки после эстрогенной стимуляции закономерно выявляется в них повышенное содержание бромодезоксиуридин-положительных клеток и множество клеток, находящихся в митозе.
Обнаруженное в настоящем исследовании уменьшение величин митотического индекса во всех структурах матки при применении эстрадиола вместе с пролактином обусловлено меньшим количеством клеток, вступающих в митоз. Это, в свою очередь, скорее всего обусловлено либо удлинением длительности всех или отдельных периодов клеточного цикла, либо уменьшением доли клеток, проходящих клеточный цикл. Нельзя исключить, что часть клеток подвергается апоптозу или выходит из клеточного цикла в фазу G0.
Аналогичная ситуация происходит и с бромодезоксиуридин-положительными клетками. Снижение их численности под действием эстрадиола и пролактина обусловлена снижением доли клеток, синтезирующих ДНК, то есть проходящих S-период клеточного цикла. Этот факт, видимо, обусловлен либо уменьшением общей доли клеток, проходящих клеточный цикл, либо удлинением пресинтетического Gi-периода клеточного цикла.
Совокупность данных по митозам и бромодезоксиуридин-положительным клеткам, численность которых уменьшается, свидетельствует в пользу уменьшения доли клеток, находящихся в клеточном цикле. Это в свою очередь может быть связано с удлинением времени прохождения клеток по клеточному циклу, выходом клеток в фазу G0 или вступлением в апоптоз.
Это предположение косвенно подтверждают данные других исследований, которые показали, что антипролиферативные эффекты пролактина обусловлены его способностью блокировать прохождение клеток по клеточному циклу (Huang К.Т., Walker A.M., 2010). Показано, что пролактин способен оказывать антипролиферативный эффект на клеточную линию остеосаркомы путем воздействия на BRCA1 и рецепторы для витамина D3 (Deng С. и др., 2009). Установлено, что пролактин нарушает процесс деления в структурах волосяного фолликула и прекращает рост волоса (Foitzik К. и др., 2003). Наши данные соответствуют части наблюдений других исследований, где изучалось значение пролактина в регуляции краткосрочного (не длительного) воздействия эстрогенов. Эти данные так же показали угнетение эстрадиол-индуцируемой пролиферации и роста клеток в матке под действием пролактина (Gunin А., 1996; Spritzer P.M. и др., 1996; Hernandez D.E., Alvarez Е.О., 1980; Kauli R. и др., 1985; Saiduddin S., Zassenhaus H.P., 1977; Negami A.I., TominagaT., 1991).
Отсутствие влияния пролактина на пролиферативные параметры в матке в условиях отсутствия эстрогенной стимуляции говорит о том, что влияние этого гормона осуществляется с затрагиванием механизма действия эстрогенов. Как уже было отмечено выше, хорошо известно, что эстрогены регулируют прохождение клеток по клеточному циклу в матке, регулируя активность генов клеточного цикла, таких как циклины, циклин-зависимые протеинкиназы (Tang L. и др., 2009). Вероятно, пролактин нарушает работу какого-то звена в механизме действия эстрогенов.
Помимо активации пролиферативных процессов в матке, другой важной стороной действия эстрогенов на матку являются морфогенетические эффекты (Couse J.F., Korach K.S., 1999; Gunin A.G. и др., 2004). Они заключаются в перестройках типа покровного и железистого эпителия, численности и формы маточных желез, изменении соотношения желез и стромы, и наконец, в морфологии самих эпителиальных клеток (Gunin A.G. и др., 2001; Bigsby R.M., 2002). Так, в нормальной матке полость и железы выстланы однорядным или многорядным призматическим эпителием, но после продолжительного действия эстрогенов эти эпителии могут стать многослойными и часто с признаками цитологической атипии (Silverberg S.G., 2000). При этом под воздействием эстрогенов повышается пролиферация эпителиальных клеток желез базального слоя и их миграция на поверхность эпителиальной выстилки эндометрия, происходит формирование новых маточных желез. В последующем железы удлиняются, становятся извитыми, слизистая утолщается, происходит отек стромы (Couse J.F., Korach K.S., 1999). В матке формируются простые, неразветвленные трубчатые железы, покрытые однослойным цилиндрическим эпителием. В норме на данном этапе, примерно в середине менструального цикла, действие эстрогенов в матке нивелируется действием прогестерона, и в дальнейшем более значительные морфологические изменения не формируются. При продолжении действия эстрогенов, происходит дальнейшее нарастание морфологических изменений, меняется гистоархитектоника матки - начинает преобладать железистый компонент над стромальным, оттек стромы претерпевает обратное развитие. Изменяется форма желез: формируются кистозно-расширенные железы, железы с дочерними железами, образуются конгломераты желез; кроме того, изменяется тип эпителия желез - вместо однослойного призматического, эпителий становится псевдомногослойным или атипическим многослойным эпителием (Silverberg S.G., 2000; Gunin A.G. и др., 2001). Однако в течение действия эстрогенов количество железистого компонента постоянно увеличивается, и между железами уже не имеется достаточного количества стромы. Более того, появляются железы ненормальной формы и архитектуры. При более продолжительном воздействии эстрогенов формируется атипическая гиперплазия эндометрия матки, которая является предраковым состоянием, и в последующем перерождается в рак эндометрия. Таким образом, степень выраженности морфологических изменений, при воздействии эстрогенов на матку, имеет прямо пропорциональную зависимость от времени воздействия -чем длительнее воздействуют эстрогены, тем более выражены морфологические изменения и вероятность формирования гиперплазии и рака эндометрия. Такие изменения связаны с формированием гиперпластического процесса и рака (Deligdisch L., 2000). Поэтому формирование эстроген-индуцированных гиперплазии матки, и в частности, атипической гиперплазии матки, а в последующем и опухолей матки, является цепью закономерных событий (Берштейн Л.М., 2000). Следовательно, гиперплазия эндометрия и рак могут рассматриваться как финальные этапы в течении эстрогензависимого морфогенеза в матке.
Морфологические изменения в матке мышей при введении эстрадиола и пролактина
Результаты, полученные в условиях введения пролактина без эстрадиола, показывают отсутствие его эффекта. Это свидетельствует о том, что пролактин оказывает влияние на морфогенез в матке путем воздействия на механизм действия эстрогенов.
Таким образом, можно сделать заключение о том, что пролактин тормозит не только стимулируемые эстрадиолом пролиферативные процессы, а также и морфогенетические сдвиги. Известно, что в регулировании пролиферации и морфогенеза задействованы как общие, так и различные регуляторные каскады (Klotz D.M. и др., 2002; Bigsby R.M., 2002; Bigsby R.M. и др., 2004). Следовательно, пролактин воздействует и на системы, регулирующие пролиферацию, и на системы, контролирующие морфогенетические преобразования. На основании проведенной работы специфику этих систем установить невозможно, так как это не входило в цели исследования. Однако можно предположить, что одной из таких систем является Wnt-путь, компоненты которого были изучены в данной работе. Обсуждение значения Wnt-системы для морфогенетических перестроек в матке будет проведено далее.
Результаты настоящей работы показали, что введение эстрадиола на фоне пролактина приводит к уменьшению экспрессии эстрогеновых рецепторов в тканях матки. Аналогично другим исследуемым параметрам изменение экспрессии эстрогеновых рецепторов под действием пролактина наблюдалось только в условиях введения эстрогенов и не было отмечено у животных, которые получали оливковое масло вместо эстрадиола. Следовательно, эффект пролактина по снижению уровня рецепторов эстрогенов также зависит от самих эстрогенов. Вероятно, пролактин также воздействует на механизм действия эстрогенов в плане регулирования уровня собственных рецепторов в структурных компонентах матки. Известно, что содержание рецепторов эстрогенов в матке может регулироваться самими эстрогенами. После начала действия эстрогеновых гормонов наступает фаза, когда количество рецепторов возрастает, а затем количество рецепторов начинает снижаться (Ing N.H., 2005). Этот феномен получил название понижающей регуляции (Ing N.H., 2005). Причем, чем больше доза вводимых эстрогенов, тем быстрее наступает феномен понижающей регуляции (Ing N.H., 2005, 2010). Регулирование эстрогенами численности своих собственных рецепторов обусловлено влиянием гормонов на генетический аппарат клетки и является одним из эффектов гормонов в тканях-мишенях (Ing N.H., 2010).
Пролактин приводит к снижению уровня рецепторов эстрогенов в матке. Механизмы этого воздействия пролактина также сложно объяснить. Уровень рецепторов в ткани зависит от активности синтеза, и интенсивности деградации. Пролактин, возможно, действует на одну или обе эти составляющие. К сожалению, подтверждающих это предположение данных нет в современной мировой литературе. Предыдущие исследования также показали, что пролактин способствует снижению экспрессии эстрогеновых рецепторов в тканях матки (Tamaya Т. и др., 1988).
При действии пролактина на фоне эстрадиола наблюдается также снижение уровня прогестероновых рецепторов во всех исследованных маточных структурах. Эффект пролактина на уровень прогестероновых рецепторов проявляется только при введении эстрогенов, что может быть следствием воздействия пролактина на механизм действия эстрогенов. Помимо регулирования содержания собственных рецепторов, эстрогены оказывают влияние и на содержание рецепторов множества биологически-активных веществ, включая рецепторы прогестерона (Ing N.H., 2010). Синтез прогестероновых рецепторов в матке рассматривается в качестве одного из основных эффектов эстрогенов наряду с активацией пролиферации и морфогенетическими преобразованиями (Couse J.F., Korach K.S., 1999). В физиологических условиях в течение эстрального или менструального цикла всегда после действия эстрогенов на матку начинает действовать прогестерон (Couse J.F., Korach K.S., 1999). Вероятно, эстрогены готовят матку к предшествующему действию прогестерона путем синтеза прогестероновых рецепторов (Couse J.F., Korach K.S., 1999). Снижение экспрессии рецепторов прогестерона можно рассматривать в качестве одного из проявлений антиэстрогенного действия пролактина наряду с пролиферацией и морфологическими преобразованиями в матке.
Экспериментальные данные полностью согласуются с клиническими наблюдениями, в которых установлено повышение уровня рецепторов эстрогенов и прогестерона в эндометрии при сниженной концентрации пролактина. О влиянии пролактина на уровень рецепторов половых гормонов в матке свидетельствуют также данные корреляционного анализа, который выявил наличие отрицательных достоверных коэффициентов корреляции между уровнем рецепторов эстрогенов и прогестерона в эндометрии и концентрацией пролактина в сыворотке крови.
При введении эстрогенов на фоне пролактина в матке наблюдается увеличение содержания Р-катенина и снижение - гликоген синтазы киназы-Зр. В условиях отсутствия эстрогенов пролактин не оказывает такого действия на содержание Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр. Следовательно, и этот эффект пролактина обусловлен воздействием на механизм действия эстрогенов. Известно, что эстрогены способствуют снижению синтеза Р-катенина в матке (Shih Н.С. и др., 2004). А наблюдаемое под влиянием пролактина возрастание содержания Р-катенина является своеобразным антиэстрогенным эффектом, таким же как угнетение пролиферации и уменьшением морфогенетических сдвигов.
Р-Катенин и гликоген синтаза киназа-Зр являются ключевыми компонентами Wnt-системы, которая принимает участие в регулировании процессов морфогенеза (Vidal-Puig А., 2010). Гликоген синтаза киназа-Зр фосфорилирует Р-катенин, который затем легко подвергается деградации (Vidal-Puig А., 2010). Поэтому когда уровень гликоген синтазы киназы-Зр
