Введение к работе
(Актуальность проблемы.Поверхностные антигены бактериальной клетки -імеют исключительно важное значение в стимуляции специфического и га специфического иммунитета против инфекции. Среди поверхностных антигенов велика иммунологическая значимость белков клеточной :тешш грамотрицательных бактерий. Белки клеточной стенки іредставляют значительный интерес для создания новых іактериальїшх вакцин. Иммунологическое изучение белковых омпонентов клеточной стенки P. aeruginosa было проведено Homma с оавтором (1976), а также Чеканом Л.В. (1980) в лаборатории ротективных антигенов НИШС им. Мечникова.
По данным Homma, белок, выделенный из эндотоксина Р. 3ruginosa. обладает свойствами общего протективного антигена, ^следованиями, проведенными Чеканом Л.В., было показано, что гтодами двумерного иммунноэлектрофореза в клеточной стенке іявлено до 28 белковых антигенов, общих для вида P. aeruginosa.
Данные, полученные Едвабной Л.С, Зайднер И.Г., Макаренко А. и др. (1986), а также результаты экспериментов Gilleland et .(1987) и Spect et а1.(1987) позволяют предположить, что белки еточной стенки могут быть использованы для создания эффективных кцин против синегнойной инфекции. Однако протективные свойства лков клеточной стенки P. aeruginosa окончательно не выяснены.
Известно, что в борьбе с синегнойной инфекцией гибиотикотерапия часто оказывается не эффективной, поэтому кное значение приобретают исследования, направленные на іработку иммунопрепаратов против данной нозокомиальной )екции. Начиная с 1986 года в Лаборатории протективных НИИВС Мечникова антигенов проводятся исследования с целью получения
новой вакцины на основе очищенных белков клеточной стенки Р. aeruginosa без примеси эндотоксина (липополисахарида). Настоящая работа является частью плана НИР лаборатории по разработке этой вакцины.
Цель данного исследования - изучить протективные свойства изолированных белков P. aeruginosa с разной молекулярной массой и экспериментально обосновать возможность использования этих клеточных белков для создания эффективной малотоксичной вакцини против синегнойной инфекции.
Для достижения указанной цели нами были поставлены следующие задачи:
-
Провести сравнительную оценку методов выделения белко] клеточной стенки P. aeruginosa на основе данных химического і иммунохимического анализа.
-
Изучить в опытах активной и пассивной защиты мыше: изолированные белки клеточной стенки P. aeruginosa.
3 Приготовить экспериментальные серии белково псевдомонас-вакцины и провести ее испытания в эксперименте н живо.тных.
4.Изучить безвредность и иммунологический ответ добровольцев, иммунизированных экспериментальными серия, псевдомонас-вакцины.
Полученные нами данные могут стать основой для разработі технологии приготовления новой очищенной бесклеточнс псевдомонас-вакцины.
Научная новизна и практическая значимость проведенных
исследований.
В результате проведенных исследований установлено, что в клеточной стенке P.aeruginosa локализованы белки с молекулярной иассой:9,14,21,25,30,38,44.46 и 55 кД,которые стимулируют у лабораторных животных формирование протективного иммунитета к заражению различными иммунотипами P.aeruginosa.
Разр а ботан способ выделения очищенных белковых тротективных антигенов клеточной стенки P.aeruginosa с іспользованием комбинации методов водно-солевой экстракции, долевого фракционирования и жидкостной хроматографии.
На основе результатов химического, физико-химического и шмунологического анализа впервые разработана бесклеточная гсевдомонас-вакцина (ГО), содержания видоспецифические белковые фотективные антигены P.aeruginosa.
В эксперименте на животных вакцина мало токсична и вызывает :пецифический иммунитет к синегнойной инфекции.
Результаты клинико-иммунологических испытаний ПВ на рбровольцах свидетельствуют о низкой токсичности и высокой ммуногенности препарата.
Полученные данные могут стать основой для разработки ехнологии получения новой псевдомонас-вакцины.
оложения, выносимые на защиту.
В клеточной стенкн P.aeruginosa локализованы протективные нтигены белковой природы с молекулярной массой в пределах от 9 о 55 кД.
Разработан способ выделения очинённых протективных белковых
антигенов P.aeruginoza, основанный на водно-солевой экстракции, солевом фракционировании и жидкостной хроматографии.
Изученные белки обладают ввдоспецифической активностью к могут быть использованы для создания эффективной и малотоксичної вакцины против P.aeinjginosa инфекции.
Клинико-иммунологические испытания ПВ показали высокук эффективность разработанного препарата. .
Апробация работы.
Результаты исследований, представленных в данної работе, доложены на Ученых Советах НШВС им. Мечникова РАМЬ (Москва,1988,1993), на всероссийских и международны? конференциях:на всесоюзной конференции по прблемам медицинскоГ технологии (Санкт-Петербург, 1988), на конференции в Ташкенскол НИИВС (1989), на международной конференции по вакцинам (Борстел, ФРГ, 1991).
Диссертация апробирована на научной конференции отделг средств и методов иммунопрофилактики и иммунодиагностики НИ1 вакцин и сывороток їм И.И.Мечникова РАМН.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текстг состоит из введения, обзора литературы, шести глав собственны: исследований, обсуждения, выводов, указателя литературы, включающего 141 источника. Работа иллюстрирована 36 таблицами і 18 рисунками.