Введение к работе
Актуальность проблемы. Фундаментальные знания о функционировании различных звеньев клеточного и гуморального иммунитета на молекулярном уровне, включающие подробную фенотипическую характеристику нормальных лимфоидньгх клеток, в частности Т- и В- лимфоцитов, и процессов их активации, необходимы для понимания механизмов регуляции иммунного ответа, процессов активации, трансформации и малнгниза-ции, природы иммунодефицитных состояний при различных патологических процессах, а также для разработки путей рациональной иммунокоррекции и иммунотерапии.
Т- и В- лимфоциты павианов, аналогично клеткам человека,, экспресснруют различные поверхностные антигены, определение которых имеет большое значение для изучения их роли в иммунном ответе. Эти антигены являются специфическими мембранными рецепторами, определяемые соответствующими моноклональными ангателами (МоАТ). Часть этих МоАТ к лейкоцитарным дифферешщровочным антигенам человека перекрестно реагирует с поверхностными антигенами лимфоцитов приматов, в том числе павианов (Clark et al., 1983; Магауа-ma 1986; Инджия и др., 1990; Indzhiia, Chepnian 1994). Имеющиеся в литературе сведения в отношении фенотипических особенностей лимфоидньгх клеток павианов разных видов ограничены небольшим спектром использованных МоАТ. В них также отсутствует сравнительный анализ экспрессии различных антигенов лимфоцитами периферической крови и лимфатических узлов.
В современных исследованиях МоДТ к лейкоцитарным антигенам используются не только для определения того или иного антигена, но и в качетве активаторов пролиферации лимфоцитов. Из более чем тысячи известных в настоящее время мышинных МоАТ к дифферешщровочным лейкоцитарным антигенам человека, объединенных в 130 кластеров дифференци-ровки (СД), лишь небольшое их количество имеет агонистичес-кую активность, т.е. после контакта со специфической клеточ-
.') -
ной детерминантом они активируют соответствующие субпопуляции лимфоцитов и вызывают их пролиферацию и дифференци-ровку. Так МоАТ СД2, СДЗ, СД5, СД28, СД45ІЮ стимулируют пролиферацию Т- клеток (Ledbetter et al., 1985; Clark et al., 1986), а В- клеточные МоАТ СД20, СД21, СД22, СД23 и СД40, а также анти- slgM могут активировать покоящиеся В-клетки и/или усиливать пролиферацию активированных В- клеток (Ledbetter et al., 1987; Beiske et al., 1988; Clark et al., 1989; 1990).
Эти данные свидетельствуют в пользу того, что некоторые поверхностные дифференцировочные молекулы регулируют клеточную активацию и дифференцировку, однако действие этих маркеров ин виво до конца не изучено. Агонистические свойства некоторых МоАТ изучены для лимфоцитов человека, и некоторых видов макак (Clark, Draves 1987), но неизвестны для широко используемого в различных экспериментах вида- павианов гамадрилов.
Цель работы. Определение фенотипических и функциональных особенностей мононуклеаров периферической крови (МПК) и клеток лимфатических узлов (КЛУ) здоровых павианов гамадрилов в сравнительном аспекте в отряде приматов (обезьяны, человек).
Задачи исследования.
1. Изучить фенотипические особенности лимфоидных клеток
крови и лимфатических узлов здоровых павианов разного воз
раста (детеныши, подростки, половозрелые) с панелью из 20-
ти Т- и В- клеточных МоАТ к лейкоцитарньгм диффереяциро-
вочным антигенам человека и макак.
-
Установить параметры пролиферативного ответа лимфоцитов на стимуляцию Т- клеточными митогенамн (ФГА и Кон А).
-
Определить влияние супрессоров моноцитоиднои серии (липнущих к пластику и индометацин-чувствительных) на уровень бласттрансформадии лимфоцитов, индуцированной митогенами.
-
Изучить агонистические свойства некоторых МоАТ в отношении МПК и КЛУ павианов самостоятельно, в комбинации
друт с другом, а также с ФГА или клеточным промотором РМА.
Научная новизна работы.
Изучены фенотипические и функциональные параметры лимфоидных клеток здоровых павианов гамадрилов в сравнительном аспекте в отряде приматов, с использованием широкой панели Т- н В- клеточных МоАТ к лейкоцитарным антигенам человека, которые использованы как для фенотипирования, так и изучения процессов активации и пролиферации с использованием агонистических свойств некоторых МоАТ. Показано, что МоАТ 9.3 анти- СД28.. ЗАС5 анти- СД45ІЮ, G28-5 анти- СД40, G28-8 анти- Bgp95 п 2СЗ анти- slgM распознают свои функциональные гомологи на лимфоцитах павианов, а молекулы, распознаваемые этими МоАТ, в частности, СД28 и СД40 очень консервативны в процессе эволюции приматов.
Научно-практическая ценность работы.
Обезьяны, вследствие уникального биологического сходства с человеком, являются наиболее адекватными экспериментальными объектами для решения многочисленных задач экспериментальной биологии и медицины. Вследствие этого, большую значимость приобретают сведения о функционировании различных систем, в том числе клеточного иммунитета, у обезьян в норме, а также в сравнительном аспекте в отряде приматов (обезьяны, человек). Изучение антигенной структуры и определение функциональной значимости различных поверхностных регулирующих белков здоровых павианов с использованием широкой панели МоАТ к дифференцировочным лейкоцитарным антигенам человека имеет существенное значение для понимания процессов нормальной дифференцировки лимфоидных клеток приматов, в том числе человека, механизмов активации, пролиферации и опухолевой трансформации с последующим развитием лим фоидных опухолей, а также разработки методов иммунокоррекции п эффективной иммунотерапии различных патологических состояний.
Основные положения вьшосимые на зашиту.
-
Т- и В- лимфоциты павианов экспрессируют большинство поверхностных антигенов, которые распознают МоАТ против лейкоцитарных дифференцировочных антигенов человека.
-
МоАТ против лейкоцитарных дифференцировочных антигенов человека, обладающие агонистической активностью для лимфоцитов павианов, регулируют их процессы активации и дифференцировки, т.е. эти МоАТ распознают свои функциональные гомологи на лимфоцитах павианов.
Апробация диссертации.
Основные положения работы представлены на Всесоюзном симпозиуме: "Злокачественные лимфомы и ассоциированные с ними лимфотропные вирусы", проходившем на базе НИИЭПиТ (Дагомыс, 15- 17 май 1984 г.), на Республиканском слете молодых медиков (Тбилиси, 15-20 май, 1986г.), а также на XV Международном Приматологическом конгрессе (Бали, Индонезия, 3- 8 август 1994). Апробация проведена на ученом совете Института медицинской приматологии РАМН, г. Сочи- Адлер, 3 октября 1996.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 научные работы.
Объем и структура диссертации. Работа представлена на 126 стр. машинописного текста, иллюстрирована таблицами и рисунками, состоит из введения, 3- х глав, обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Библиографический указатель включает 215 источников.