Введение к работе
Актуальность. Лимфокин-активированные киллеры (ЛАК)
представлют собой генерируемые из мононуклеарных лейкоцитов
при инкубации с интерлейкином-2 (ИЛ-2) активированные
лимфоциты ЛАК, характеризуются высокой НК-активностью и
обладают цитотоксическим действием по отношению к
аутологичным и аллогенным опухолевым клеткам
Морфологически НК относятся к большим гранулярным
лимфоцитам ЛАК, в отличие от зрелых лимфоцитов, описываются
как крупные клетки типа иммунобластов с выраженным ободком
базофильной цитоплазмы ЛАК, как и НК, характеризуются высоким
содержанием цитоплазматических гранул и вакуолей [Давыдов М И
и др 2000, Киселевский MB и др 2006] Подобно натуральным
киллерам (НК), оказывают избирательное действие на
трансформированные клетки, вызывая лизис опухолевых клеток-
мишеней, и не влияют на нормальные клетки своего организма
Вместе с тем в клинических исследованиях показано, что при
введение ЛАК оказывают неспецифическое цитотоксическое
воздействие на эндотелий сосудов Согласно сложившемуся мнению, НК — основная субпопуляция лимфоцитов, экспрессирующая р75Р цепь рецептора ИЛ-2 и способная под воздействием ИЛ-2 к селективной активации и пролиферации, приводящей к образованию ЛАК Вместе с тем, ЛАК в отличие от НК способны лизировать не только НК- чувствительные, но и НК-резистентные опухолевые клетки-мишени Однако наряду с
изложенными представлениями, имеются данные о существовании в популяции ЛАК НКТ-клеток, экспрессирующих не только маркеры НК (CD16, CD56), но и различные Т-клеточные маркеры (CD3, CD4, CD8) В работах последних лет появились сведения о субпопуляции CD4+ CD25+FOXp3+ Т регуляторных клеток (Трег ), оказывающих супрессорное влияние на киллерную активность лимфоцитов Трег также как и НК могут активироваться под влиянием ИЛ-2 [Braud V М et al. 1998, Kwak J et al 2000, Yron I et al 2004, Rasku MA et al 2008, Smyth M 2008, Wang Y et al. 2008]
Вместе с тем, сведения о содержании этого подтипа лимфоцитов в популяции ЛАК отсутствуют
Несмотря на большое количество работ, посвященных
различным характеристикам ЛАК до настоящего времени
отсутствуют комплексные исследования морфо-функциональных и иммунофенотиписеских свойств ЛАК, прежде всего это относится к активированным лимфоцитам, полученным из различных источников Имеющиеся литературные данные об экспрессии поверхностных антигенов, морфологии и эффективности ЛАК по отношению к различным опухолевым и нетрансформированным клеткам весьма малочисленны и достаточно противоречивы Важной и нерешенной до настоящего времени проблемой является оценка целесообразности комбинированного применения ЛАК и цитостатиков В ряде работ показано, что ЛАК обладают цитотоксичностьго по отношению к резистентным к цитостатикам эпителиальным опухолям и саркомам Кроме того, установлено, что нецитотоксические дозы противоопухолевых цитостатиков могут стимулировать литическую активность ЛАК по отношению к различным линиям опухолевых клеток [Zheng Y J , 2004] Однако в
литературе отсутствуют данные о способности ЛАК лизировать опухолевые клетки, выжившие после воздействия химиопрепаратов
В последние годы появились многочисленные публикации о
стимулирующем действии на функциональную активность
лимфоцитов иммуномодуляторов различной, в том числе и нецитокиновой природы, однако, как правило, не приводится сравнительной характеристики этих веществ с эффективностью ИЛ-2
Цель работы.
Оценка особенностей иммунофенотипа, морфологических и
функциональной свойств активированных лимфоцитов
онкологических больных и здоровых доноров
Задачи исследования.
Изучить морфологические особенности ЛАК в различные сроки культивирования
Исследовать НК-активность и цитотоксичность ЛАК по отношению к различным опухолевым и ^трансформированным клеткам
Определить особенности иммунофенотипа ЛАК
Определить киллерную активность ЛАК по отношению к клеткам немелкоклеточного рака легкого, устойчивым к действию препартов платины
5 Изучить морфо-функциональные и иммунофенотипические
особенности ЛАК, полученных из селезенки и плеврального
выпота онкологических больных
6. Оценить цитотоксический потенциал монуклеарных лейкоцитов периферической крови доноров, активированных иммуномодуляторами различной природы
Научная новизна.
Впервые проведено комплексное исследование
иммунофенотипа, цитотоксичекой активности и морфологических
особенностей ЛАК, выделенных из периферической крови доноров
Впервые проведено исследование киллерной активности ЛАК на
панели опухолевых и нетрасформированных клеток Впервые
показано, что ЛАК способны эффективно лизировать клетки
немелкоклеточного рака легкого человека, устойчивые к действию
цисплоатана Получены новые данные, характеризующие
иммунофенотипические и морфо-функциональные свойства
лимфоцитов, генерированных из плеврального выпота и селезенки онкологических больных
Научно-практическая значимость
Полученные в работе данные расширяют представления о
механизме противоопухолевого действия активированных
лимфоцитов Исследованы морфологические и
иммофенотипические особенности активированных лимфоцитов,
генерированных из мононулеарных лейкоцитов периферической
крови, селезенки и плеврального выпота онкологических больных
Материалы настоящего исследования могут явиться основой для
совершенствования методов адоптивной иммунотерапии
злокачественных новообразований и разработки новых подходов для комбинированной химио-иммунотерапии онкологических больных
Положения, выносимые на защиту:
1 Лимфокин-активированные киллеры, полученные из
мононуклеарных лейкоцитов периферической крови, селезенки и
злокачественного выпота, обладают сходным иммунофенотипом,
характеризуются высоким содержанием НК и высокой
цитотоксичностью
2 Лимфокин-активированные киллеры обладают избирательным
цитотоксическим действием на опухолевые клетки различного
гистогенеза, не оказывают цитопатогенного действия на
нетрансформированные клетки Лимфокин-активированные
киллеры способны эффективно лизировать устойчивые к
действию цитостатиков злокачественно трансформированные
клетки
3. Спонтанная киллерная активность мононуклеарных лейкоцитов может быть значительно повышена при их инкубации с иммуномодуляторами различной химической природы
Апробация диссертации
Диссертация апробирована 27 июня 2007г на совместном
заседании кафедры микробиологии ММА им ИМ Сеченова и
лаборатории клеточного иммунитета ГУ РОНЦ им Н Н Блохина
РАМН Основные положения диссертации представлены на 7
Российской конференции «Новые отечественные
противоопухолевые препараты» 2007 г
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа состоит из введения, материалов и методов исследования, 3 глав, заключения, выводов, указателя литературы, иллюстрирована 13 таблицами и 32 рисунками Объем диссертации ПО страниц машинописного текста
