Введение к работе
Актуальность.
Трансфузии концентратов тромбоцитов приобрели в последние годы большое значение как эффективное средство терапии геморрагического синдрома, обусловленного недостатком количества или функциональной неполноценностью тромбоцитов (Абдулкадыров К.М., 1994; Аграненко В.А. с соавт., 1995; Car R. et al., 1990; McShin R.L. et al., 1993). Дальнейшее совершенствование методов лечения сердечнососудистых, гематологических заболеваний, онкологических больных, пострадавших с тяжелой сочетаннои травмой связано с достаточным обеспечением клиник данной трансфузионной средой (Дуткевич И.Г., 1987; Матвеев С.А., 1988; Аграненко В.А. с соавт., 1994; Lee E.J. et al., 1990; Owens M. et al., 1994).
Потребности в тромбоцитоконцентратах постоянно возрастают, в то время когда уменьшение количества доноров стало все более отрицательно сказывается на обеспечении лечебных учреждений гемо-трансфузионными средствами (Мельникова В.Н. с соавт., 1983; Селиванов Е.А. с соавт., 1994; Воробьев А.И., 1995; Рыжков СВ. с соавт., 1995; Данильченко В.В., 1996). Очевидно, что решение этой задачи возможно лишь в результате создания запасов тромбоцитоконцентра-тов в специализированных "банках" крови.
Реальность применения атомного оружия, авария на Чернобыльской АЭС убедительно подтверждают необходимость накопления ресурсов кровяных пластинок в интересах экстремальной и военной медицины (Брюсов П.Г., 1995; Калеко СП. с соавт.. 1995; Шевченко Ю.Л. с соавт., 1995). Поэтому вопросы заготовки и разработки эффективных методов низкотемпературного консервирования тромбоцитов в последнее время приобрели большую актуальность (Компаниец A.M. с соавт., 1992; Азовская С.А., 1995; Angelini A. et al., 1992).
2 По мнению специалистов (Цуцаева А.А., 1983; Фефелова И.В. с
соавт., 1991: Азовская С.А., 1995; Valery C.R., 1983; Bertolini F. et al., 1993), низкотемпературное консервирование тромбоцитов с диметил-сульфоксидом (ДМСО) позволяет максимально сохранять биологическую активность кровяных пластинок. Вместе с тем, являясь эффективным криопротектором, ДМСО обладает достаточно выраженными токсическими свойствами. Требуется удаление криофилактика из клеточной взвеси перед трансфузией, что усложняет процесс низкотемпературного консервирования и приводит к дополнительным повреждениям тромбоцитов.
В нашей стране для клинического применения разрешен способ криоконсервирования тромбоцитов при -196С с 2,5% раствором диме-тилацетамида (ДМАЦ). Однако технологический процесс криоконсервирования клеток является многоэтапным и предусматривает использование программного замораживателя, наличие хранилища типа ХБ-05 с постоянным пополнением запасов жидкого азота, применение алюминиевых контейнеров.
Все это значительно усложняет использование данного способа консервирования тромбоцитов в учреждениях службы крови. Поэтому возникла необходимость разработки эффективного метода замораживания кровяных пластинок при -80 в электрических морозильниках.
Цель исследования:
Разработать эффективный способ низкотемпературного консервирования тромбцитов при -80С под защитой 2,5% раствора диметил-ацетамида.
Задачи исследования:
1. Разработать методику замораживания тромбоцитов в электрохолодильнике при -80С в полимерных контейнерах "Компопласт" без использования аппарата программного замораживания.
-
Изучить влияние способа получения тромбоцитоконцентратов на их морфофункциональную характеристику и эффективность замораживания при -80С и -196С.
-
Провести сравнительное исследование морфофункциональных свойств тромбоцитов, замороженных при -80С и -196С под защитой 2,5% раствора диметилацетамида.
-
Оценить криозащитное действие на тромбоциты 2,5% раствора ДМАЦ (при -80С и -196С) и 5% раствора ДМСО.
Научная новизна.
Разработан эффективный метод низкотемпературного консервирования тромбоцитов при -80С с 2,5% раствором диметилацетамида. Впервые показана возможность замораживания кровяных пластинок в электрохолодильнике до -80С в отечественных полимерных контейнерах без использования аппарата программного замораживания. Установлено, что тромбоцнтоконцентраты, консервированные при -80СС, по своим морфофункционалышм характеристикам превосходят концентраты тромбоцитов, криоконсервированные при -196СС. Впервые выявлена более высокая морфофункциональная сохранность клеток при низкотемпературном консервировании тромбоцитоконцентратов, заготовленных с помощью аппаратов-фракционаторов крови, чем концентратов кровяных пластинок, полученных способом дифференцированного центрифугирования консервированной донорской крови.
Практическая значимость работы и ее реализация.
Разработанный метод позволяет эффективно замораживать тромбоцнтоконцентраты в отечественных полимерных контейнерах в электрохолодильнике (при -80С) без использования аппарата программного замораживания, что существенно упрощает организацию создания "банков" кровяных пластинок.
Консервирование тромбоцитов при -80С под защитой 2,5% раствора диметилацетамида обеспечивает большую 'сохранность функциональных свойств, чем их криоконсервирование в жидком азоте (-196С).
Использование тромбоцитоконцентратов, полученных с помощью аппаратов-фракционаторов крови, для низкотемпературного консервирования значительно повышает функциональную полноценность кровяных пластинок для клинического применения.
Полученные в ходе исследований материалы использованы при подготовке отчета по теме НИР 100-95-пб "Обоснование системы долгосрочного хранения запасов гемотерапевтических средств, их транспортировки и применения в военное время"; применяются в практической деятельности НИЛ - Центра крови и тканей Военно-медицинской академии; включены в цикл лекций для слушателей академии.
Основные материалы исследований доложены и обсуждены на Всеармейской научной конференции "Актуальные вопросы гематологии" (С.-Петербург, 1995), П-ой международной конференции "Новые информационные технологии в медицине и экологии" (Ялта-Гурзуф, 1996), 237-ом заседании научного общества гематологов и трансфузио-логов Санкт-Петербурга (1996).
По теме исследования опубликовано 5 печатных работ, оформлено 4 рационализаторских предложения.
Структура и объем работы.
![Консервирование тромбоцитов замораживанием по экспоненциальной программе при - 80[О]С (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс]](/i/i/4408/184042.png "Консервирование тромбоцитов замораживанием по экспоненциальной программе при - 80[О]С (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс] Кузнецов Константин Васильевич")
