Содержание к диссертации
стр.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ В ДИССЕРТАЦИИ 5
ВВЕДЕНИЕ 7
ГЛАВА 1. Некоторые изменения параметров иммунной системы
у больных бронхиальной астмой (обзор литературы) 14
Определение бронхиальной астмы 16
Классификация бронхиальной астмы 23
Лабораторные показатели иммунитета у больных БА 27
Механизмы регуляции девиации иммунного ответа 32
Физиология и морфология хемотаксиса нейтрофилов 39
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 56
Иммунологические методы исследования 58
Статистические методы исследования 83
ГЛАВА 3. Сравнительный анализ показателей состояния
гранулоцитов у больных атопической и смешанной бронхиальной
астмой в фазы клинической ремиссии и обострения
заболевания__ 88
Анализ показателей лейкограммы у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания 85
Анализ показателей функционального состояния нейтрофилов у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии
и обострения заболевания 90
3.3. Анализ показателей локомоторной функции нейтрофилов
у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой
в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания_ 92
ГЛАВА 4. Сравнительный анализ показателей состояния
лимфоцитов и гуморального звена иммунитета у больных
атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы
клинической ремиссии и обострения заболевания 106
4.1. Анализ показателей иммунофенотипирования
лимфоцитов у больных атопической и смешанной
бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии
и обострения заболевания 106
Анализ показателей функционального состояния лимфоцитов у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания 112
Анализ показателей гуморального звена иммунитета у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой
в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания 114
ГЛАВА 5. Сравнительный анализ показателей цитокинового
статуса у больных атопической и смешанной бронхиальной
астмой в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания 118
5.1. Анализ продукции интерлейкина 1(3 у больных
атопической и смешанной бронхиальной астмой
в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания 119
Анализ продукции интерферона гамма у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания 121
Анализ продукции интерлейкина 4 у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии и обострения
заболевания 123
5.4. Анализ продукции интерлейкина 10 у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой
в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания 125
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 132
ВЫВОДЫ 150
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 152
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 153
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ В ДИССЕРТАЦИИ:
АФН — активность фагоцитоза нейтрофилов
АЭ - активность неспецифических эстераз
БА - бронхиальная астма
ВИЧ — вирус иммунодефицита человека
ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа
ГНТ - гиперчувствительность немедленного типа
ИАД - индекс адгезии
ИАЭ — индекс активности неспецифических эстераз
ИСЦК - индекс суммарного цитохимического коэффициента эстеразной
активности
ИХ - индекс хемотаксиса
ИФН - интенсивность фагоцитоза нейтрофилов
ИД - индекс девиации
ИП/А - индекс соотношения провоспалительных цитокинов к
антивоспалительным цитокинам
ИСЛЛ - индекс суммарной люминесценции лизосом
ЛПС - липополисахарид Esherihia coli
МІЖ - мононуклеары периферической крови
НСТ-тест - тест восстановления нитросинего тетразолия.
СН50 - активность комплемента по 50% гемолизу
С1, С2, СЗ, С4, С5 - фрагменты комплемента С1, С2, СЗ, С4, С5
СЦК - суммарный цитохимический коэффициент эстеразной активности
СПЛ - спонтанная пролиферация лимфоцитов
ФГАї-ИПЛ - ФГА]. индуцированная пролиферация лимфоцитов
ФГАг.-ИПЛ - ФГА2. индуцированная пролиферация лимфоцитов
ЛПС - ИПЛ - ЛПС- индуцированная пролиферация лимфоцитов
ФАТ — фактор, активирующий тромбоциты
ФГА - фитогемагглютинин
ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы
CD - кластер дифференцировки
FITC — флуоресцеина изотиационат
Ig А, М, G, Е - иммуноглобулины А, М, G, Е
Th - Т-хелперы
IL1 р — интерлейкин 1Р
IL4 - интелейкин 4
IL10- интерлейкин 10
IFNy - интерферон у
NK - натуральные киллеры
РЕ - фикоэритрин
Введение к работе
Актуальность проблемы
Направленная миграция является важнейшим проявлением реактивности нейтрофилов, основной смысл которой заключается в достижении объекта, вызвавшего активацию клетки (очаг тканевой деструкции, воспаления). Активированный нейтрофил, пришедший в очаг, решает эффекторные задачи одним из двух способов: либо с помощью фагоцитоза, либо путем секреции биологически активных продуктов (Зурочка А.В., 1991; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Долгушин И.И. и др., 2006). Сложность клеточных и гуморальных механизмов, которые обеспечивают хемотаксис, делает его одной из самых уязвимых форм реактивности нейтрофила (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989). Характер изменений фагоцитарной и хемотаксической активности нейтрофилов подробно изучен при многих гнойно-воспалительных процессах, при острой патологии и травматической болезни (Зурочка А.В., 1991; Студеникина Ю.Н., 2000; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Злакоманова О.Н., 2002; Долгушин И.И. и др., 2006). Не менее важна роль фагоцитов при аллергопатологии, в частности, бронхиальной астме. Однако в формировании данного заболевания часто важную патогенетическую роль играет инфекционное звено, что, с одной стороны, может поддерживать активность аллергического воспаления, а, с другой стороны, аллергическое заболевание при длительном течении (или лечении) приводит к изменениям иммунного статуса по типу вторичной иммунной дисфункции, клиническим проявлением которой являются рецидивирующие хронические воспалительные заболевания. С точки зрения клинико-лабораторной оценки, такие поражения иммунной системы являются наиболее сложными для верификации
иммунологического диагноза (Федосеева В.Н. и др., 2004) и требуют индивидуальной тактики ведения больного и иммунокоррекции этих состояний, где важную роль играют именно фагоциты, обеспечивающие первую линию защиты от инфекции и играющие немаловажную роль в поддержании аллергического воспаления в различных органах и системах. Таким образом, формирование инфекционной зависимости у этих больных БА происходит в результате воздействия различных инфекционных агентов; первые клинические проявления или обострения течения БА связаны с воздействием инфекционных факторов, а улучшение состояния возникает после снижения патогенного влияния инфекционного агента. В настоящее время очевидна необходимость диагностики активной и скрытой инфекции у таких больных, так как это тесно связано с выбором адекватной терапии, что определяет актуальность и служит обоснованием цели настоящего исследования.
Цель и задачи исследования
Целью настоящего исследования явилось изучение характера изменений хемотаксической и фагоцитарной функции нейтрофилов периферической крови у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой на фоне изменения иммунного статуса в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания.
Для достижения этой цели нами были поставлены следующие задачи:
Изучить состояние фагоцитарного звена иммунной системы у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания.
Определить характер хемотаксической активности фагоцитов на причинно-значимые аллергены, бактериальные хемоаттрактанты, С5а фрагмент системы комплемента и естественный цитокиновый
комплекс у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания. Провести сравнительное исследование состояния лабораторных параметров лимфоцитарного и гуморального звеньев иммунитета у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания. Определить уровень спонтанной и индуцированной продукции цитокинов у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания для оценки состояния регуляторного звена иммунной системы.
Положения, выносимые на защиту
У больных атопической и смешанной бронхиальной астмой наблюдается угнетение фагоцитарной функции и снижение резерва кислородзависимого метаболизма нейтрофилов периферической крови независимо от фазы процесса. У больных атопической бронхиальной астмой наблюдается феномен хемотаксической деактивации при воздействии причинно-значимого аллергена при отсутствии метаболической активации нейтрофилов в зоне хемотаксического ответа, а у больных смешанной бронхиальной астмой - при воздействии инфекционного агента - взвеси суточной культуры Staphylococcus aureus штамм «Cowan 209» - на фоне активации неспецифических эстераз как в фазе обострения, так и в фазе клинической ремиссии. При иммунофенотипировании лимфоцитов у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой отмечается снижение числа клеток, экспрессирующих активационные рецепторы, независимо от фазы заболевания.
У больных атопической бронхиальной астмой в стадии обострения по сравнению с группой больных атопической бронхиальной астмой в фазе клинической ремиссии увеличивается соотношение CD4+/CD8+. У больных смешанной бронхиальной астмой в стадии ремиссии по сравнению с группой практически здоровых лиц снижается соотношения CD4+/CD8+. У больных смешанной бронхиальной астмой в стадии обострения по сравнению с группой пациентов, находящихся в стадии клинической ремиссии, повышается соотношение CD4+/CD8+ за счет увеличения количества С04-позитивных лимфоцитов на фоне снижения уровня CD8+ клеток.
У больных атопической и смешанной бронхиальной астмой, независимо от фазы заболевания, отмечаются однонаправленные изменения в продукции цитокинов: снижение продукции ILip и IFNy и увеличение продукции IL4 и IL10 в фазе ремиссии при относительном снижении IL4 в фазе обострения.
Научная новизна
Впервые определен характер хемотаксической активности нейтрофилов на причинно-значимый аллерген у больных атопической и смешанной БА в фазы клинической ремиссии и обострения заболевания. Изучен хемотаксический ответ на бактериальный хемоаттрактант, С5а фрагмент комплемента и естественный цитокиновый комплекс, что позволило выяснить некоторые особенности формирования ответа фагоцитарных клеток у таких больных и выявить значимость этих нарушений в формировании данной патологии. Кроме того, изучены лабораторные показатели иммунной системы: иммунофенотип лимфоцитов, фагоцитарные свойства, кислородзависимый метаболизм, лизосомальная активность, миграционные характеристики нейтрофилов
периферической крови, гуморальное звено иммунитета, цитокиновый статус у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в зависимости от фазы клинической ремиссии или обострения заболевания.
Впервые показано, что при воздействии специфических хемоаттрактантов - взвеси суточной культуры S.aureus штамм «Cowan 209» и специфического аллергена, выявлен феномен хемотаксической деактивации к инфекционному агенту на фоне активации неспецифических эстераз у больных смешанной БА как в фазе обострения, так и в фазе клинической ремиссии, а к причинно-значимому аллергену у больных атопической БА, также независимо от стадии заболевания, при отсутствии метаболической активации нейтрофилов в зоне хемотаксического ответа, что способствует длительному поддержанию аллергического воспаления. Отсутствие феномена хематаксической деактивации при ответе на аллерген у больных смешанной БА, возможно, свидетельствует о перераспределении роли аллергена и микроорганизма в формировании данной патологии в сторону инфекционного агента. Подана заявка на патент РФ «Способ выявления нарушения функции фагоцитов при развитии рецидивирующих инфекционных процессов» № 2007108220.
Теоретическая и практическая значимость
Теоретическая значимость результатов исследования состоит в расширении знаний о характере иммунологических нарушений и особенностях функциональной активности нейтрофилов у больных атопической и смешанной БА в фазы клинической ремиссии или обострения заболевания.
Выявленные нарушения хемотаксических реакций нейтрофилов периферической крови и оценка их патогенетического значения, а также зафиксированные разнонаправленные изменения состояния иммунной системы позволят разработать новые методы диагностики нарушений иммунной системы у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой в зависимости от фазы клинической ремиссии или обострения заболевания. На основе исследования разработан метод выявления нарушения функций фагоцитов при развитии рецидивирующих инфекционных процессов.
Апробация работы
Результаты проведенных исследований доложены и обсуждены на Всероссийском научном Форуме имени академика В.И. Иоффе Дни иммунологии в Санкт-Петербурге «Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии» (г. Санкт-Петербург, 2005, 2006, 2007), Конференции иммунологов Урала (г. Челябинск, 2003; г. Оренбург, 2006). Работа была поддержана грантом Правительства Челябинской области (2004).
Апробация диссертации была проведена на совместном заседании НИИ иммунологии, кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии, самостоятельного курса клинической лабораторной диагностики, кафедры иммунологии и аллергологии, ЦНИЛ ЧелГМА (2008).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, материалы и методы, 3 главы собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации, список литературы. Указатель литературы включает 152 источника, из них 97 отечественных и 55 иностранных. Иллюстрации представлены 14 таблицами, 4 рисунками и 4 фотографиями.
