Введение к работе
Актуальность пррблемы. Определение функционального состояния иммунной системы актуально для современной клинической иммунологии. В процессе реализации иммунного ответа взаимодействия лимфоидных клеток осуществляются, в основном, не за счет прямых (мембранных) контактов, а посредством продуктов оинтетической деятельноотя клеточных элементов. Лимфондные клетки являются объектом, воспринимающим одновременно различную информацию либо при их взаимодействии между собой или при участии цитокинов (Elizalde de Вгассо Maria M. et al. 1966; Muslani Piero et al. 1984 ), при воздействии на лимфондные и кроветворные клетки опиоидных факторов (Карамян А.И. и др. 1989; Корнеева Е.А. 198Э; Хмельницкий O.K. и др. 1969; Jankovlc Branislav D. 1989 ), гормонов (Асего R. et al. 1984; Foris Gabrlellaet al. 1985; James Keith et al. 1984) и т.д. Мононуклеарные клетки могут воспринимать информации о состоянии печени (Алексеева И.Н. и др. 1989), о концентрации специфических антител (Andru3 L. et al. 1981).
Для оценки состояния клеточного иммунитета в лабораторной практике используют, в основном, количественные методы, основанные на выявлении различных поверхностных маркеров. Однако, количественные показатели не всегда соответствуют функциональной активности лимфоцитарных субпопуляций. Основными причинами отого являются, во-первых, морфологическая неоднородность лимфоцитарных субпопуляций (Velardi A. et al. 1988), то есть, одна и та же субпопуляция лимфоцитов может включать клетки с различными функциями. Так, лимфоциты CD4+ содержат собственно хелперы и индукторы.супрессии, а лимфоциты CD8+- - супрессоры, контрасупрессоры и цитотоксические клетки (Dohlsten М. et al. 1988; Fletcher М.А. et al.1989). Во-вторых, в онтогенезе существуют периоды, когда, например,- на фоне количественного преобладания хелперов наблюдается высокая функциональная активность супрессоров (Вельтизев Ю.Е. 1989; Bradley L.M. et al. 1989). В-третьих, в периоде іювороаденности в крови циркулирует значительное количество клеток с "двойной маркировкой" хелперов н супрессоров (Shortean К. et al. 1990, т.е. наличие поверхностного маркера не является гарантией функциональной полноценности-клетки. Поскольку наиболее часто такие "аномалии"
- 2 -встречаются при обследовании детей (Вельтищев Ю.Е. 1989), это особенно важно учитывать в педиатрии при интерпретации количественных показателей.
Следовательно, при оценке иммунного статуса нельзя ограничиваться данными количественного иммунологического анализа, их необходимо дополнять исследованиями функциональной активности клеток лимфо- и геиопоэза. К сожалению, известные в настоящее время методы определения состояния регуляторних механизмов основаны на использовании клеточных элементов, что требует значительного количества материала и немедленного проведения Исследования, поэтому с практической точки зрения перспективным является поиск методов, позволяющих использовать в качестве объекта исследования не клеточную взвесь, а сыворотку крови как субстрат, содержащий продукты синтетической активности клеток лимфо- и гемопозза.
Цель л задачи исследования. "Целью настоящей работы являлся поиск путей для разработки нового подхода к оценке регуляторних механизмов иммунной системы на основании эффекта сывороточных факторов крови на иммунный ответ спленоцитов мыши in vitro. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
-
Изучение динамики первичного иммунного ответа спленоцитов мыши при их культивировании in vitro.
-
Подбор оптимального варианта стандартной модели первичного иммунного ответа спленоцитов мыши для оценки суммарного эффекта сывороточных факторов крови человека.
-
Определение показателей воздействия суммарного эффекта сывороточных факторов крови здоровых доноров, беременных женщин и больных с атопическим синдромом.
-
Проведение сравнительного анализа количественных показателей субпопуляций Т-лимфоцитов и формирования первичного иммунного ответа в культуре спленоцитов мыши под воздействием сывороточных факторов крови человека.
Научная новизна. Впервые разработана стандартная модель культуры спленоцитов мыши, позволяющая оценить состояние регуляторних механизмов иммунитета на основании оценки суммарного воздействия сывороточных факторов крови человека на ксеноген-чые лимфоидные клетки. Впервые - представлено теоретическое обоснование возможности использования сыворотки крови как сум-
марной .иммунорегулирующей субстанции, которую' можно использовать в качестве материала для определения регулирующих механизмов иммунитета. Впервые проведен сравнительный анализ между количеством лимфоцитов регуляторних субпопуляций человека и показателями состояния регуляторних механизмов иммунитета с использованием сыворотки крови как суммарного фактора, отражающего функционирование клеток лимфо- и гемопоээа.
Практическая значимость. Разработан новый способ определения состояния регуляторних механизмов иммунной системы, что может быть использовано для совершенствования иммунодиагностики и иммунокоррекции. Предложенный способ ке имеет аналогов, отличается экономичностью, тробуат малого количества материала для исследования, что важно для клинической, в особенности, педиатрической практики, позволяет заменить клеточную взвесь сывороткой крови, что открывает дополнительные резервы хранения и транспортировки, дает возможность проводить сбор материала в 'экстремальных условиях.
Внедрение. Результаты диссертационной работы внедрены в клиническую практику и находят применение в клинико-диагностическом отделении и пульмонологическом отделении МНИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РФ, а также в женской консультации городской поликлиники N 154 г.Москвы.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 печатных работы,, сделано 1 рационализаторское предложение, получена приоритетная справка на изобретение N 92-009291/14 от 8 февраля 1993 г.
Апробация. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на методическом совещании сотрудников лаборатории иммунологии и иммунохимии МНИИП и ДХ МЗ РФ 15.12.92 г. Результаты диссертационной работы доложены на I съезде иммунологов Азербайджана; на итоговой научно-практической конференции сотрудников". Кишиневского медицинского университета им. Н.А. Тестемицану {18.05.93 г.).
Структура и объём диосертации. Работа изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения,. обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав результатов собственных исследований, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, включающего 51 отечествен-нг* и 136 зарубежных источников. Диссертация иллюстрирована 23
. 4 -рисунками и 7 таблицами.