Содержание к диссертации
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 3
Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О СТРУКТУРЕ И ФУНКЦИИ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ АНТИГЕНОВ. ГЕНЕТИКА И НОМЕНКЛАТУРА RH -АНТИГЕНОВ, МЕТОДЫ ИХ ВЫЯВЛЕНИЯ В СЛЕДАХ КРОВИ
(обзор литературы) 7
Структура и функция эритроцитарных антигенов, топография на эритро-цитарной мембране 7
Генетика и номенклатура Rh-антигенов, распределение у различных народов, их трансфузионное и судебно-медицинское значение 14
Методы выявления Rh-антигенов в следах крови 21
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 38
Глава 3. АДАПТАЦИЯ МОДИФИЦИРОВАННОЙ РАЭ К ВЫЯВЛЕНИЮ РЕЗУС-
АНТИГЕНОВ В СЛЕДАХ КРОВИ 42
Ревизия основных этапов РАЭ 43
Подбор пригодных для РАЭ сывороток анти-D 55
Глава 4. О СЕРОЛОГИЧЕСКИ ВЫЯВЛЯЕМОМ НАЛИЧИИ В СЛЕДАХ КРОВИ
РЕЗУС-ОТРИЦАТЕЛЬНЫХ ( cde ) ЛИЦ D-ПОДОБНОГО РЕЗУС-
АНТИГЕНА 62
4.1. Наличие D-подобного резус-антигена в эритроцитах резус-отрицательных
(cde) лиц. Гемотрансфузионное и судебно-медицинское значение этого
феномена 62
Глава 5. РАЗРАБОТКА ТЕХНИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-АНТИГЕНОВ
ВСЛЕДАХКРОВИ 74
Разработка способа модификации иммуноглобулинов IgG анти-D 74
Разработка техники исследования полученных элюатов 85
Разработка способа подсчета агглютинации эритроцитов (Scoring system) 87
Разработанная техника определения Rh-антигенов в следах крови 92
Глава 6. ВЫЯВЛЕНИЕ РАЗРАБОТАННОЙ ТЕХНИКОЙ АНТИГЕНОВ СИСТЕМЫ RH
ВСЛЕДАХКРОВИ 98
Выявление антигена D в пятнах крови живых лиц и в пятнах трупной крови .... 98
Выявление минорных резус-антигенов С, Cw, с, Е, е 103
Определение резус-принадлежности крови экспертных пятен 115
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 119
ВЫВОДЫ 130
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ 131
Введение к работе
Из всех известных и наиболее значимых эритроцитарных антигенных систем -ABO, Rh, MNS, Kell, Duffy, Kidd, система Резус (Rh) обладает наиболее выраженным антигенным полиморфизмом и высокой информативностью. Это делает исключительно актуальным ее использование в судебно-медицинских целях, в частности, при разграничении следов крови на вещественных доказательствах.
Именно высокой значимостью указанной системы объясняются многочисленные попытки исследователей разработать чувствительные, пригодные для практической экспертизы, методики выявления Rh-антигенов в пятнах крови.
Анализ этих работ показывает, что такими методами чаще всего является реакция абсорбции-элюции (РАЭ) с использованием различных ферментных тестов. Так, в отечественной судебно-медицинской практике в качестве метода выявления Rh-антигенов в следах крови в настоящее время наиболее часто применяется разработанная Е.Е. Гальцевой (1973) трипсин-альбуминовая модификация РАЭ. В зарубежной практике обычно используется модификация РАЭ с применением папаина [87, 88].
Недавно отечественными исследователями [39, 40, 41] была разработана техника с использованием высокоактивных микробных и растительных протеаз для обработки не только стандартных тест-эритроцитов, но и исследуемых следов крови и выделений. Эта техника, названная авторами модифицированной РАЭ, позволяла значительно повысить чувствительность и специфичность выявления антигенов АВО в микроследах крови и выделений.
Поэтому, нами было предпринято изучение возможности повышения чувствительности и специфичности выявления в следах крови с помощью модифицированной РАЭ также и Rh-антигенов. Для этого было проведено широкое сравнительное изучение возможностей протеазной, папаиновой и трипсин-альбуминовой модификаций РАЭ, применявшихся при выявлении Rh-антигенов и выполнявшихся с использованием как классической техники, так и техники модифицированной РАЭ, в том числе и с применением модифицированных
иммуноглобулинов IgG анти-D (пептидов анти-D). Подобные исследования выполнены впервые и для судебной медицины являются актуальными.
Цель работы Повышение чувствительности и специфичности выявления антигенов системы Rh в следах крови реакцией абсорбции-элюции (РАЭ) с использованием на различных ее этапах высокоактивных протеаз микробного и растительного происхождения.
Задачи работы
Адаптация модифицированной РАЭ к выявлению Rh-антигенов в следах крови.
Выяснение сущности неспецифичности РАЭ при выявлении в следах крови резус - антигена D.
Разработка способа модификации иммуноглобулинов IgG анти-D с целью устранения неспецифичности РАЭ.
4) Разработка чувствительного и специфичного способа определении резус-принадлежности следов крови с применением пептидов анти-D.
5) Разработка чувствительной и специфичной техники определения в следах крови минорных резус-антигенов С, Cw, с, Е, е .
Научная новизна
Впервые серологическими методами установлена абсорбция антител анти-D энзимированным материалом резус-отрицательных (cde) лиц. Серологически этот феномен проявляется как D или D-подобный антиген. Экспериментально установлено значение этого D-подобного резус-антигена как причины неспецифичности РАЭ при определении резус-принадлежности следов крови. Разработан оригинальный способ устранения указанной неспецифичности (патент № 2209434 от 27.07. 2003 г.). Установлены также оптимальные сроки давности образования пятен крови для специфического выявления в них Rh-антигенов.
Практическая значимость работы
Разработана чувствительная, простая и надежная техника определения антигенов Rh-Hr в следах крови, что существенно повышает дифференцирующие возможности судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств.
Апробация работы и внедрение результатов Материалы диссертации доложены на научной конференции Российского центра судебно-медицинской экспертизы МЗ РФ в декабре 2002 г. Апробация работы состоялась 21 февраля 2006 г. на расширенной конференции отдела судебно-медицинского исследования вещественных доказательств ФГУ РЦ СМЭ Росздрава. На апробации диссертации присутствовали специалисты из отдела судебно-медицинской идентификации личности и танатологического отдела ФГУ РЦ СМЭ, приглашенные специалисты из ГНЦ РАМН по специальности 14.00.29. - гематология и переливание крови. В Федеральное агентство по здравоохранению и социальному развитию России представлена на утверждение подготовленная Сахаровым Р.С. и Кондратовой И.В. усовершенствованная медицинская технология: «Выявление антигенов системы Rh в следах крови», М., 2005 г.
Публикация результатов работы По теме диссертации опубликовано 7 научных статей, из них 5 - в центральной печати. Получен патент № 2209434 от 27.07.2003 г.
Структура диссертации Диссертация изложена на 142 страницах компьютерной печати и состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, списка литературы. Текст иллюстрирован 38 таблицами и 3 рисунками. Список литературы содержит 159 источников, из которых на русском языке - 61 и 98 - на английском и других языках.
Основные положения, выносимые на защиту
Впервые серологическими методами на внутренней (цитоплазматической) поверхности энзимированных резус-отрицательных (cde) эритроцитов установлено наличие D-подобного резус-антигена. В силу своей хорошей изолированности от внешней среды (плазмы крови), этот антиген не принимает участия в обычных иммуносерологических реакциях и потому не имеет трансфузионного значения и не должен приниматься в расчет при типировании эритроцитов в случаях, когда они сохраняют свою морфологическую целостность.
Для судебно-медицинской серологии наличие D-подобного антигена в резус-
отрицательных эритроцитах создает серьезные трудности при определении резус-принадлежности крови в пятнах на вещественных доказательства, поскольку в полностью гемолизированных эритроцитах сухих пятен крови для действия различных биологически активных веществ, в том числе и для антител анти-D, становится доступной и внутренняя (цитоплазматическая) сторона мембраны эритроцитов.
Разработан способ получения из аллоиммунных антител IgG анти-D пептидов анти-D, не реагирующих с D-подобрым антигеном резус-отрицательных эритроцитов и позволяющих специфически определять реакцией абсорбции-элюции (РАЗ) резус-принадлежность следов крови.
Установлены оптимальные сроки давности образования пятен крови для исследования в них резус-антигенов. Это позволяет производить чувствительное и специфичное определение антигенов Rh-Hr в следах крови разработанной техникой.
![Динамика плазменно-растворимых антигенов системы HLA при трансплантации аллогенных гемопоэтических клеток больным гемобластозами [Электронный ресурс]](/i/i/4353/180098.png "Динамика плазменно-растворимых антигенов системы HLA при трансплантации аллогенных гемопоэтических клеток больным гемобластозами [Электронный ресурс] Голубенко Рамиля Ахметовна")
