Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время в общей структуре заболеваемости сифилисом возрос удельный вес малосимптомных и скрытых его форы. В то же время надежные методы ранней диагностики сифилиса и критерии оценки эффективности его лечения отсутствуют. В связи с этим возникла настоятельная потребность в разработке подходов для выявления заболевания на ранних стадиях его развития, оценки активности инфекционного процесса и эффективности специфической терапии.
Насущные вопросы серологии сифилиса могут быть решены с учетом иммунопатологии этого заболевания. Особое, значение имеет определение антитрепонемных антител класса М и сравнительная оценка содержания противотрепонемных IgM и igG антител. Поскольку выработка специфических IgM антител имеет место не только при первичном заражении сифилисом, но и при его рецидивах или реинфекциях, персистенция -igM антител рассматривается как показатель наличия в организме вирулентного возбудителя. По наличию противотрепонемных lg№ антител, по их соотнесенности со специфическими IgG антителами можно судить об активности сифилитической инфекции и необходимости лечения.
Среди множества серологических методов диагностики наиболее перспективным является иммуноферментный анализ (ИЇА). И$А сочетает высокую диагностическую эффективность с возможностью использования его для массового обследования населения. Наибольшее распространение получил непрямой вариант ИМ, на заключительном этапе которого применяются антивидовые антитела к иэотипам иммуноглобулинов человека. Однако, при такой постановке возможна ошибочная "оценка содержания IgM антител, приводящая к последующей неверной тактике ведения больных. За счет ревмато-
гдного фактора, представленного igM антителами против р0 -фра-«ента igG человека, могут формироваться ложноположительные >езультаты определения противотрепонемных IgM антител. Напро-ив, ложноотрицательные результаты опосредуются конкуренцией іежду специфическими более аффинными igG и менее аффинными ротивотрепонемными igM антителами. В ловушечном ИФА нёдостат-:и, присущие непрямому ИМ, сведены к минимуму. При ловушечном «ти- igM(lgG) -И8А на твердую фазу первым слоем наносят антите-іа к Ы и g иэотипам иммуноглобулинов человека, вторым - иссле-[уемую сыворотку, а затем - необходимые для выявления специфи-юских антител ингредиенты. Для сенсибилизации твердофазного юсителя обычно используют моноспецифические антисыворотки, что «осит элемент нестандартности и обусловливает относительно вы-:окую неепецифическув реактивность тест-систем. Это заставляет іскать новые подходы, обеспечивающие специфичность выявления фотивотрепонемных антител.
Цель работы. Данная работа посвящена разработке высокоэффективного метода определения противотрепонемных IgM и, IgG ан-мтел при сифилисе. В соответствии с поставленной целью решаюсь следующие конкретные задачи:.
-
разработать ловущечный метод анти- igM(lgG) -ИМ, осно-}анный на применении моноклональных антител к иммуноглобулинам іеловека для сенсибилизации твердой фазы и пероксидазного тре-юнемного конъюгата для выявления специфических антител;
-
оценить содержание igM и IgG изотипов противотрепо-іемньк антител:
у больных ранними формами сифилиса до лечения;
у больных ранними формами сифилиса, подучивших лечение и шимающихея с диспансерного учета;
у пациентов, имевших половой контакт с больными заразны-
ми формами сифилиса; ~
у детей, рожденных от матерей, больных сифилисом и получивших лечение во время беременности;
у больных с ложноположительными результатами стандартны! серологических реакций на сифилис;
3) сравнить диагностическую значимость двух методов иммунс ферментной диагностики сифилиса: непрямого igG-ИВД и ловушеч-ного анти- igii(igG) -USA.
Науцая новизна.
Впервые отработаны условия очистки коммерческого трепо-немного антигена, резко повышающие специфичность взаимодействие его с антителами,
Впервые получен высокоспецифичный препарат пероксидазно-го коныогата трепонемного антигена, не реагирующий с иммуноглобулинами нормальной сыворотки человека.
Впервые в СССР разработан ловушечный вариант Й$А., основанный на применении для сенсибилизации твердой фазы моноклона-лбных антител к igM и igtt человека.
Впервые в СССР ловушечный метод USA. использован для дифференциальной диагностики противотрепонемных IgM и IgG антител при ранних формах сифилиса (метод апробирован в клинике на 449 сыворотках).
Практическая значимость. Разработанный метод позволяет проводить раннюю диагностику сифилиса, дифференцировать мало-симптомные формы заболевания, оценивать активность инфекционно го процесса и эффективность специфической терапии. Предлагаемы ловушечный метод анти- igM(igG) -ИМ может быть использован в качестве реакции-арбитра при дифференциальном диагнозе врожден ного сифилиса и пассивной трепонемоспецифической иммуноглобу-линемии, а также для рекомендаций по снятию больных с клинико-
серологического контроля.
Апробация результатов. Апробация диссертации состоялась на )бщеинститутской конференции Научно-исследовательского института вирусных препаратов АМН СССР (1991).
Результаты работы были представлены на Конференции молодых ученых центрального научно-исследовательского кожно-венерологи-іеского института МЗ СССР (1987), на Научно-практической конференции кафедры и клиники кожных и венерических болезней 1-го Московского ордена Ленина и Трудового Красного Знамени медицинского института имени И.М.Сеченова МЗ СССР (1989), на Отчетной научной конференции Научно-исследовательского института вирус-шх. препаратов АМН СССР (1990).
Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, эбзора литературы, описания материалов и методов исследования, 5-х глав изложения собственных результатов и их обсуждения, выводов, приложений и списка литературы, включающего 131 наименование (28 советских и ЮЗ иностранных авторов). Объем -диссертации составляет 157 страниц, включая 9 рисунков и 7 таблиц.