Введение к работе
Актуальность темы. Важное место в клинической практике анимают заболевания аллергического генеза. частота и клини-еская тяжесть которых в последние годы возросла вследствие овышения уровня активности ряда патогенетических факторов, го привело к повышения вероятности развития таких опасных для ;ізни осложнений, как анафилактический шок.
Проблема поиска средств патогенетической терапии, спо-эбствувдих снижению летальности при развитии анафилактическо-э^шока. является одной из наиболее актуальных в клинической илергологии. Практически важно изучение механизма действия зепаратов, обеспечивающих адекватную модуляцию систем, участ-дзщих в патогенезе анафилактических реакций, в частности, по-івляющих высвобождение медиаторов аллергий путей воздействия Г структурную организацию цитоскелета. Необходимо подчерк-пъ. что цитохалазаны. антианафилактическая активность кото-н в эксперименте in vivo достаточно высока, оказывают выра-інное токсическое воздействие на биологические объекты, и. іедовательно. не мсгут быть использованы в клинике. Поэтому
юбхояимкм с практической точки зренпя является решение воп-ica создания соединений, воздействие на структуру цитоскелета іторьк не снижает яизнеспособности клеток.
В конце 80-х годов были синтезированы два соединения, явитеся производными индола (препараты К 5*и К 19). с молеху-рной структурой, в значительной пере отличающейся от струк-ры молекул цитохалазинов (ЦХ), но содержащей ряд активных уппировок. присутствующих в них. Значительное сходство днна-ки подавления цитоскелет-зависимых функций клеток и развития стемней анафилаксии на модели In vitro ЦХ и вновь синтезиро-нными производными индола (Семенов А.В.. 1990) позволило
предположить, что механизм депсхвия препаратов II 5 и II 19,. кг и китотоксинов. опосредуется их взаимодействием с актиновы* филаиентами цитоскелета.
Таким образом, шогие вопросы, касающиеся данной пробж мы, до настоящего времени оставались нерешенными, что послуш до основанием для проведения настоящей работы, позволило сфоц мулировать цель и задачи исследования.
. Цель настоящей работы заключалась в изучении влияния і патогенез системной анафилаксии вновь синтезированных прои: водных индола, определении механизмов их действия и возможное ти использования для сниаения детальности при развитии анафі лактического иока.
Реализация цели предусматривала решение .следующих зада1
-
Изучить воздействие вновь синтезированных производных индола (препаратов Н 5 н И 19) на течение и исход cиcтe^ нон анафилаксии при моделировании анафилактического шока.
-
Разработать модификацию метода определения концені раций гистамина (Гт) и серотонина (Ст). заключающуюся в адеї* ватной моделировании патохимическоп стадии анафилаксии in vlt го.
-
Исследовать влияние вновь синтезированных произвоі пых индола на количественные показатели медиаторов аплерпн выйобоэдаеьш клетками периферической крови при инициирован): дегрануляции в системе.In vitro.
-
Оценить эффект воздействия препаратов II 5 и II 19 і: морфологические особєішості: » структуру сети .актиновых Филе нентов в клеточной культуре In vitro.
Научная новизна. Дано теоретическое.обоснование разрабої
ки адекватной модели патохимической стадии анафилаксии In vitro (технические трудности получения полноценного биологического материала после введения животному разрешающей дозы причинно-значимого антигена). Применение модели, заюяочаюз-зисн в том, что взаимодействие клеток цельной крови экспериментальных животных со специфическим антигеном осуществляется в системе In vitro, позволило установить, что максимальной подавление высвобождения Гт наблюдается при введении препарата N 5 за 30 мин до развития анафилактической реакции in vitro и что эффект значительно снижается при инъецировании его за 90 минут. Эффективность препарата N 19 высока и мало различается при введений его за 30, 60 и 90 минут до начала аллергической реакции в системе in-vitro.'
Впервые предложена концепция механизмов действия препара- . тов N 5 и N 19, демонстрирущая зависимость эффекта того или иного препарата.как от природы обьекта-мишени, так и от времени включения соответствующих структур или субстратов в патоге-. нетический процесс. При этом предполагается, что периоды эффективного действия препаратов N 5 и Я 19 последовательно сменяют друг друга. Диметилсульфоксид (DHS0), не снижая смертности животных от анафилактического шока, выступает, по-видимому. а. качестве синергиста при реализации эффекта вновь синтезиро-занных производных индола.
Впервые представлены результаты, отражающие динамику цействия вновь синтезированных производных индола (препаратов 1 5 и Н 19) на течение и исход анафилактического шока на модели In vivo. На основании данных сравнительного анализа эффек-гавности исследуемых препаратов показано, что максимальное шачение выживаемости наблюдалось при использовании препарата I 5 при введении его за 30 минут, а препарата N 19 за 30. 60 н Ю минут до разрешения анафилактического шока.
Впервые на основании исследования морфологических типов клеток, формирующихся вследствие воздействия исследуемых соединений на культуру In vitro, а также данных регрессионного анализа кривых, отражающих концентрационную зависимость частоты встречаемости различных форм клеток, показано, что клеточные структуры-мишени для каждого из вновь синтезированных соединений различны. Кроме того, выявлены принципиальные особенности характера действия каждого из исследованных вновь синтезированных производных индола: относительно меньшая токсичность препарата К 19: возможность кумуляции обоих препаратов в культуре клеток; различие путей и динамики реализации модифицирующих эффектов вновь синтезированных соединений.
Практическая значимость работы. В результате проведенного исследования выделены показатели, наиболее информативные для характеристики эффективности исследуемых препаратов: максимальный процент выживаемости после завершения анафилактической реакции: длительность периодов эффективного действия препаратов: длительность атонального периода в случае гибели животного; коэффициент К. отражающий тяжесть клинических проявлений системной анафилаксии.
Введен коэффициент Л. отражающий взаимосвязь между степенью высвобождения биогенных аминов и выживаемостью экспериментальных животных, показатели которого имеют существенную информационную значимость для оценки клинической эффективности исследуемых соединений.
Впервые на основании анализа совокупности морфологических признаков и морфометрических параметров выделен ряд морфологических типов клеток в культуре in vitro, формирующихся вследствие воздействия исследуемых соединений, количественное соотношение которых позволяет судить о специфическом и токсической
действии препаратов.
Разработана собственная модификация метода определения концентраций Гт и Ст, позволяющая адекватно моделировать пато-химическую стадию анафилаксии In vitro.
Апробация работы и публикации. По теме диссертации опубликовано 3 печатных работы и получено 3 свидетельства на рационализаторское предложение.
Основные положения работы доложенына межинститутской научно-практической конференции по актуальным вопросам аллергии в педиатрии (МНИИПиДХ МЗ РФ. 1993)'.
' Работа прошла апробацию на совместном методическом заседании лаборатории иммунологии и иммунохимии, клинико-диагностического отделения и отдела клинической патоморфологии МНИИ педиатрии и детской хирургии НЗ МПр РФ 28 февраля 1995 года.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 188 страницах машинописного текста, иллюстрирована 23 таблицами. 18 рисунками, состоит из введения, обзора литературы. 4 глав описания и анализа результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего 52 отечественных и 180 зарубежных источников.