Введение к работе
Акт)'альность проблемы
Пуповшшая кровь представляет интерес дня оценки кроветворения плода на последних неделях гестации и в связи с возможностью использования репопули-рующих кроветворных клеток пуповишюй крови для трансплантации при некоторых гематологических заболеваниях (Кисляк Н.С., 1981; Broxmeyer Н. et al.,1989).
Первые положительные результаты таких трансплантаций способствовали развитию практических методов выделения и консервации гемопоэтических предшественников из пуповишюй крови {Harris D. et al.,1994). Тем не менее, все еще отсутствует стандартизация в оценке содержании этих клеток в пуповиной крови и данные разных авторов значительно различаются, что может быть связано с использованием различных методик культивирования и делает результаты трудносопоставимыми (Торубарова Н.А. и др., 1983; Knudtzon S., 1974; Broxmeyer Н. etal. 1993;Harris D. et al.,1994; Issagrissil S., 1984).
Среди факторов, влияющих на концентрацию гемопоэтических
предшественников в пуповишюй крови многие исследователи указывают на течение беременности, и, прежде всего, перенесенную гипоксию (Торубарова Н.А. и др., 1993), однако пока неясно каким образом другие виды патологии беременности (нефропатия беременных, угроза выкидыша, скоррегированная железодефицитная анемия) сказывается на клеточном составе пуповишюй крови л может ли пуповинная кровь при патологической берменности рассматриваться в качестве источника пригодных для трансплантации кроветворных клеток.
Противоречивые данные имеются в отношении клеточного состава пуповинной крови при преждевременных родах, соотношения форменных элементов, количества и свойств клеток пула кроветворных предшественников, используемых для трансплантации (Торубарова Н.А. и др.,1983; Knudtzon S., 1974; Issagrissil S., 1984; Broxmeyer H. et al. 1993).
Исходя из изложенного, нам представляется актуальным оценить клеточный состав пуповинной крови и определить количество и пролиферативный потенциал гранулоцитарно-макрофагальных пред-шественников пуповинной крови при неосложенной и патолопіческой беременности, срочных и преждевременных родах, а также сравнить две культуральные методики исследования кроветворных предшественников пуповинной крови - культивирование в системе "агаровая капля - жидкая среда" и культивирование в метилцеллюлозе.
Цель исследования
Оценить клеточный состав пуповшшой крови при неосложненной беременности и наиболее часто встречающихся видах патологии беременности, при срочных и преждевременных родах, и определить каким образом патологическая беременность и преждевременные роды сказываются на количестве и пролифера-тивном потенциале гранулоцитарно-макрофагальных предшественников пуповин-ной крови.
Задачи исследования
-
Определить взаимосвязь различных клеточных популяций пуповинной крови при иеослохненной беременности.
-
Сравнить клеточный состав пуповинной крови при срочных и преждевременных родах.
-
Сравнить клеточный состав пуповинной крови при неосложненной беременности, скоррегированной железодефицитной анемии беременных, нефропатии беременных и угрозе выкидыша.
-
Оценить количество и пролиферативный потенциал гранулоцитарно-макрофагальных предшественников пуповинной крови при неосложенной и патологической беременности.
-
Оценить пригодность пуповинной крови при патологической беременности в качестве потенциального источника кроветворных предшественников для трансплантации.
-
Сравнить результаты исследования кроветворных предшественников пуповинной крови по методике клоногенного культивирования в системе "агаровая капля - жидкая среда" и в метилцеллюлозе с рекомбинантными ростовыми факторами.
Научная новизна
Впервые изучено влияние патологии беременности на клеточный состав, количество и пролиферативный потенциал гранулоцитарно-макрофагальных предшественников пуповинной крови.
Скоррегированная железодефицитная анемия, нефропатия беременных и угроза выкидыша не влияют на клеточный состав пуповинной крови и не сказываются как на количестве, пролиферативном потенциале гранулоцитарно-макрофагальных предшественников, так и на морфологии гранулоцитарно-макрофагальных колоний пуповинной крови.
Абсолютное количество клеток гранулоцитарного ряда в последнем триместре беремешюсги увеличивается, а мононукпеарной фракции пуповииной крови уменьшается. Гранулоцитарно-макрофагальных предшественников в пуповииной крови преждевременных родов содержится достоверно больше по сравнению с пуповииной кровью срочных родов, и они обладают достоверно более высоким пролиферативным потенциалом. Преобладающими колониями в том и в другом случае являются гранулоцитарные, составившие почти половину всех колоний.
Впервые показано, что клоногенное культивирование как в агаровой системе, так и в метилцеллюлозе позволяет определять весь спектр клеток гранулоцитарного ряда пуповииной крови от полипотентных до унипотентных коммитнро-ванных. Чувствительность и точность обеих методик в отношении этих клеток одинакова.
Практическая ценность
Получены референтные данные для оценки количества и пролиферативного потенциала гемопоэтических клеток пуповишюй крови.
Показано, что пуповинная кровь при осложненной беременности может рассматриваться в качестве потенциального источника гемопоэтических клеток для трансплантации.
Показана пригодность метода клоногенного культивирования кроветворных предшественников в системе "агаровая капля - жидкая среда" для оценки количества и пролиферативного потенциала кроветворных предшественников пуповииной крови.
Внедрение результатов работы в практику
Результаты работы используются в НИИ Детской Гематологии и Республиканской Детской Клинической Больнице при подготовке кроветворных предшественников пуповииной крови для трансплантаций. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ.
Апробация работы
Работа обсуждалась на конференции лаборатории регуляции кроветворения НИИ Детской гематологии. Предварительные результаты работы были доложены на заседании ученого совета НИИ Детской Гематологии в мае 1995 г. Результаты работы были доложены на 25-м конгрессе Европейского Общества Детских Гематологов и Иммунологоа (г. Бинген, Германия) 23-26 августа 1995 г.
Материалы диссертации апробированы на совместной конференции сотрудников клинических и лабораторных отделов НИИ Детской Гематологии МЗ и МП РФ 25 сентября 1995 г.
Структура и объем диссертации
