Введение к работе
Актуальность проблемы
На протяжении всего времени, прошедшего после внедрения антибиотиков в клиническую практику, наблюдался неуклонный рост устойчивости клинически значимых бактерий к этим препаратам, что, вероятно, является неизбежным процессом. Применение новых антибиотиков вызывает селекцию устойчивых к ним мутантов в бактериальных популяциях (McGoven, 1983; Sanders, Sanders, 1992). Изучение распространенности и механизмов антибиотикоустойчивости клинически значимых бактерий необходимо для рациональной антибиотикотерапии, которая позволила бы по возможности замедлить распространение устойчивых к антибиотикам штаммов бактерий (Kunin, 1993).
Поскольку из всех групп антибиотиков наиболее широко применяются (5-лактамные препараты, изучение бактериальной устойчивости к антибиотикам этой группы имеет особенно важное значение (Sanders, Sanders, 1992). Инактивация пенициллина, связанная с образованием р'-лактамазы, была впервые обнаружена в 1940 году — почти сразу же после начала клинического применения этого антибиотика (Abraham, Chain, 1940). К настоящему времени распространение устойчивых за счет продукции (5-лак-тамаз штаммов практически свело на нет эффективность бензилпенициллина и ампициллина в отношении большинства клинически значимых бактерий. Появление штаммов, устойчивых к новым р-лактамным антибиотикам, в частности цефалоспоринам третьего поколения, отмечалось спустя короткое время после внедрения этих антибиотиков в клиническую практику. В результате во многих случаях эти новые антибиотики также оказываются неэффективными в отношении ряда клинически значимых бактерий (Sanders, Sanders, 1992; Livermore, 1995).
Известны три механизма устойчивости к (3-лактамным антибиотикам: нарушение проницаемости клеточной стенки бактерий, инактивация этих препаратов путем гидролиза (5-лактамазами и изменение мишени — пени-циллин-связывающих белков (ПСБ) (Bush, 1988; Livermore, 1988; Spratt. Cromie, 1988). Важнейшим из этих механизмов является продукция (3-лак-тамаз. Поэтому изучение свойств этих ферментов играет главную роль в исследовании проблемы устойчивости клинически значимых бактерий к |3-лактамным антибиотикам (Sanders, Sanders, 1992).
Первым этапом изучения устойчивости штаммов бактерий к (3-лактамным антибиотикам является определение МИК ряда препаратов данной груп-
пы для исследуемых штаммов. При этом чем более представительным яв, ется спектр этих р-лактамных препаратов, тем с большей достоверное; можно судить о возможных механизмах устойчивости. Данные об уровне j тойчивости к р-лактамным препаратам, особенно новым, тех или иных в< будителей, их профилях антибиотикоустойчивости, а также о различия: уровнях устойчивости в зависимости от регионов и источников вьщелеї являются весьма ценными для рациональной антибиотикотерапии.
Вместе с тем одно лишь определение МИК р-лактамных антибиотиі не всегда дает возможность с необходимой степенью достоверности суді о механизмах устойчивости к этим антибиотикам, и, следовательно, вы] батывать надлежащие рекомендации по рациональной антибиотикотерапі Для более углубленного изучения механизмов устойчивости необході исследование субстратного и ингибиторного профилей (5-лактамаз, з правило, дающее возможность отнести эти ферменты к какому-либо из і вестных типов и исходя из этого предложить наиболее рациональную схі антибиотикотерапии.
Таким образом, изучение распространенности и механизмов устой' вости клинически значимых бактерий к (3-лактамным антибиотикам, пре, тавляется весьма актуальным как с теоретической, так и с практичес; точек зрения.
Цель исследования
Изучение распространенности устойчивости к (Ьлактамным антитио кам в клинических популяциях грамотрицательных возбудителей нозоко; альных инфекций и исследование свойств (3-лактамаз высокоустойчи штаммов.
Задачи исследования
-
Определение распространенности и уровня устойчивости к р (5-лактамных антибиотиков (пенициллинам с ингибиторами (3-лактамаз, фалоспоринам второго, третьего и четвертого поколений, азтреонаму имипенему), а также некоторым альтернативным аминогликозидным и фт хинолоновым препаратам в клинических популяциях всех основных таксо мических групп грамотрицательных возбудителей нозокомиальных инфекц
-
Разработка простого и быстрого метода определения р-лактам ной активности.
-
Определение субстратного и ингибиторного профилей (3-лакта высокоустойчивых штаммов.
4) Ориентировочная оценка механизмов устойчивости к [З-лактамным антибиотикам исследованных штаммов, особенно высокоустойчивых, на основе полученных данных о МЙК [3-лакташых антибиотиков и (3-лактамазной активности высокоустойчивых штаммов.
Научная новизна
Впервые за последние годы в России было проведено многоцентровое исследование, охватившее девять лечебных учреждений различного профиля, в ходе которого были получены данные о распространенности и уровне устойчивости клинически значимых грамотрицательных бактерий к восьми [З-лактамным антибиотикам (четырем цефалоспоринам, в том числе к цефпи-рому, двум пенициллинам с ингибиторами р-лактамаз, азтреонаму и имипе-чему), а также некоторым альтернативным препаратам: двум аминоглико-зидным и двум фторхинолоновым антибиотикам. Получены также данные о ірофилях антибиотикоустойчивости исследованных штаммов и о различиях в іувствительности между штаммами, выделенными в разных лечебных учреждениях и из разных источников.
Разработан модифицированный микроиодометрическкй метод определе-іия (3-лактамазной активности, отличающийся простотой и дающий возмож-юсть быстро определить (3-лактамазную активность в большом числе проб.
Определена активность |3-лактамаз семи высокоустойчивых штаммов штеробактерий в отношении ряда пенициллинов (бензилпенициллина, ампициллина, оксациллина и карбенициллина) и цефалоспоринов (цефалотина, їефотаксима и цефтазидима), изучено влияние ингибиторов (сульбактама, ізтреонама и диклоксацидлина) на активность этих ферментов, что позво-мло оценить механизмы устойчивости этих штаммов к (З-лактамным антиби->тикам.
Практическая значимость
Получены данные об устойчивости к ряду широко применяемых (3-лак-чамных, а также аминогликозидных и фторхинолоновых антибиотиков всех існовньїх таксономических групп грамотрицательных возбудителей нозоко-іиальньїх инфекций, выделенных в разных лечебных учреждениях и из раз-[ых источников, что имеет весьма важное значение для рациональной ан-ибиотикотерапии.
Разработан новый метод определения |3-лактамазной активности бак-ерий, не требующий разрушения бактериальных клеток, дающий возмож-ость быстро определить (3-лактамазную активность в большом количестве
- б -
проб, требующий меньшего расхода посуды и реактивов по сравнению с pt нее известными методами, пригодный для широкого применения в клиничес ких лабораториях.
Получены данные о субстратном и ингибиторном профилях высокоус тойчивых штаммов энтеробактерий, которые позволяют оценить механизі. их устойчивости к (3~лактамным антибиотикам. Эти данные представляй интерес с точки зрения рациональной антибиотикотерапии инфекций, вы; ванных высокоустойчивыми штаммами энтеробактерий.
Апробация работы
По материалам диссертации опубликованы 2 статьи и 2 тезисов. М< териалы диссертационной работы доложены на международной научно-Text
ческой конференции "Пища. Экология. Человек." (Москва, 1995).
Объем и структура диссертации