Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 13
1.1 Современные представления о ВСС 13
1.1.1 Определение 13
1.1.2 Эпидемиология 14
1.1.3 Патогенез ВСС 15
1.1.4 Причины развития ВСС 16
1.2 Современные представления о генетической основе ВСС 17
1.2.1 Гены-кандидаты ишемической болезни сердца 18
1.2.1.1 Гены-кандидаты нарушений липидного обмена 18
1.2.1.2 Гены-кандидаты нарушений сосудистого гомеостаза 21
1.2.1.3 Гены, кодирующие компоненты иммунного ответа 23
1.2.1.4 Другие однонуклеотидные полиморфизмы, связанные с ИБС 24
1.2.2 Гены-кандидаты неишемических причин ВСС 28
1.2.2.1 Гены-кандидаты кардиомиопатий 28
1.2.2.1.1 Гены-кандидаты гипертрофической кардиомиопатии 28
1.2.2.1.2 Гены-кандидаты аритмогенной правожелудочковой кардиомиопатии 29
1.2.2.2 Гены-кандидаты нарушений ритма 30
1.2.2.2.1 Гены, ассоциированные с синдромом удлиненного интервала QT (LQTS) 30
1.2.2.2.2 Гены, ассоциированные с синдромом укороченного интервала QT (SQTS) 34
1.2.2.2.3 Гены, ассоциированные с синдромом Вольфа Паркинсона-Уайтта (WPW) 35
1.2.2.2.4 Гены, ассоциированные с синдромом Бругада 35
1.2.2.2.5 Гены, ассоциированные с катехоламинергической полиморфной желудочковой тахикардией (CPVT) 36
1.2.2.2.6 Гены, ассоциированные с фибрилляцией предсердий 37
1.2.2.2.7 Гены, ассоциированные с тахикардией в покое, вариабельностью сердечного ритма 39
1.2.3 Полногеномные исследования молекулярно-генетической основы ВСС 40
1.3 Заключение 44
ГЛАВА 2. Материалы и методы 46
2.1. Общая характеристика основной и контрольной группы и ОНП, взятых в анализ 46
2.2. Выделение ДНК 53
2.3. Методики генотипирования ОНП 54
2.4. Статистическая обработка полученных результатов 61
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 63
3.1 Полиморфизмы генетического рискометра ИБС и их ассоциация с внезапной сердечной смертью 63
3.2 Полиморфизмы генов-кандидатов нарушений сердечного ритма и их ассоциация с внезапной сердечной смертью 72
3.2.1 Полиморфизм rs35594137 гена GJA5 72
3.2.2 Полиморфизм rs1805124 гена SCN5А 75
3.2.3 Полиморфизм rs13376333 гена KCNN3 78
3.3 Полиморфизмы генов-кандидатов нарушений липидного обмена и их ассоциация с внезапной сердечной смертью 80
3.3.1 Полиморфизм rs1800588 гена LIPC 80
3.3.2 Полиморфизм rs2228314 гена SREBF2 81
3.3.3 Полиморфизм rs2516839 гена USF1 86
3.4 Полиморфизмы генов иммунного ответа и их ассоциация с внезапной сердечной смертью 88
3.4. 1 Полиморфизм rs187238 гена IL18 88
3.4.2 Полиморфизм rs1799864 гена CCR2 91
3.5 Полиморфизм rs1799983 гена NOS3 94
3.6 Полиморфизмы, ассоциированные с ВСС по данным полногеномных исследований и их ассоциация с внезапной сердечной смертью 96
3.6.1 Полиморфизм rs3864180 гена GPC5 96
3.6.2 Полиморфизм rs3010396 гена CASQ2 98
3.6.3 Полиморфизм rs10918859 гена NOS1AP 99
3.6.4 Полиморфизм rs9862154 102
Заключение 104
Выводы 107
Список литературы 1
- Современные представления о генетической основе ВСС
- Гены, ассоциированные с синдромом Вольфа Паркинсона-Уайтта (WPW)
- Методики генотипирования ОНП
- Полиморфизмы генов-кандидатов нарушений сердечного ритма и их ассоциация с внезапной сердечной смертью
Современные представления о генетической основе ВСС
Нарушение липидного гомеостаза с формированием гиперхолестеринемии, гипертриглицеридемии ведет к развитию атеросклероза, являющегося субстратом ИБС и ВСС. За развитие нарушений обмена липидов, холестерина ответственно большое число мутаций и полиморфизмов генов, одними из которых являются гены LIPC, SREBF, USF1.
Печеночная липаза (LIPC) – внеклеточный протеин с А1-фосфорилазной и триацилглицеролгидролазной активностью, синтезирующийся и секретирующийся клетками печени. Осуществляет гидролиз триглициридов, фосфолипидов циркулирующей плазмы, а также является вспомогательным лигандом для взаимодействия липопротеидов с клеточными рецепторами и протеогликанами, помогая доставке холестерина в клетки печени. В ряде исследований показана протективная роль повышенной экспрессии гена LIPC (15q21-q23) в развитии атеросклероза. Низкий уровень активности печеночной липазы – предрасполагающий фактор развития атеросклероза и ИБС у лиц молодого и среднего возраста, с ним связывают Т аллель полиморфизма -480С Т [49]. Полиморфизм гена LIPC -514C T (rs1800588) ассоциирован с повышенным уровнем триглицеридов, аполипопротеина А1, низким уровнем ЛПВП, повышенным риском развития гипертриглециридемии, кальцификации коронарных артерий сниженным риском гипоальфалипопротеинемии [18, 118]. Полиморфизм ассоциирован не только с нарушениями липидного обмена, но и с изменениями артериального давления. Так носители Т аллеля имеют более высокие цифры систолического артериального давления по сравнению с носителями С аллеля [121]. Кроме того Т аллель полиморфизма является маркером прогрессирования атеросклероза и ассоциирован с повышенным риском развития ИБС [140].
SREBF, USF1 – транскрипционные факторы для нескольких генов, таких как LIPC, FAS (синтаза жирных кислот), генов аполипопротеинов - APOA2, APOA5, APOE, функционально важных не только в липидном обмене, но и в развитии воспаления и тромботических осложнений, метаболического синдрома [38].
SREBFs (Sterol regulatory element binding factors or proteins) – транскрипционные факторы по типу лейциновой застежки-молнии, связываются со стеролрегуляторными сайтами (SRE) в 5 -регуляторном регионе генов-мишеней. В стерол-бедных клетках сенсором служит активирующий протеин SCAP (инактивируется высокой концентрацией стеролов в клетке), связывающийся с СООН-терминальным регуляторным доменом SREBFs и контролирующий его транспорт из эндоплазматического ретикулюма в аппарат Гольджи. В аппарате Гольджи происходит активация SREBFs, их транспорт в ядро и активация транскрипции регулируемых генов. Активность SREBFs контролируется по принципу обратной связи: чем выше концентрация холестерина, тем ниже активность SREBF [27].
SREBFs состоят из трех различных изоформ – 1а,1с,1в. Они кодируются двумя генами SREBF1 и SREBF2. SREBF 1a, 1c кодируются геном SREBF1, а SREBF 1b - геном SREBF2. Так ген SREBF2 отвечает за холестероловый обмен, а SREBF1 - за обмен жирных кислот. SREBFs совместно с SCAP, а также с рецепторами ЛПНП являются регуляторами изменений в атеросклеротических бляшках. Показано, что повышенная экспрессия SREBF2 в коронарных артериях снижает уровень атеросклеротических изменений у больных ИБС по сравнению со здоровой группой [48]. На функцию SREBF2 (22q13) оказывает наиболее сильное влияние полиморфизм 1784G C (rs2228314), который приводит к замене глицина на аланин в 595-й аминокислотной позиции. Полиморфизм связан с уровнем общего холестерина в крови, изменением толщины слоя интимы и медии в сосудах. Показано, что дети и подростки носители генотипа GC/CC полиморфизма rs2228314 гена имеют более высокие показатели ЛПВП по сравнению с носителями генотипа GG полиморфизма [90]. SCAP представляет собой мембрансвязанный протеин, состоящий из двух доменов – сенсорного и карбокситерминального, отвечающего за межпротеиновые взаимодействия. Основным полиморфизмом гена SCAP (3p21.3) является 2386A G (rs12487736). Показана роль полиморфизма в эффективности лечении статинами (симвастатином). В одном из исследований полиморфизмы генов SREBF2 rs2228314 и SCAP rs12487736 не были ассоциированы с нарушениями холестеринового обмена и ВСС поодиночке. Однако в ряде исследований показана связь rs2228314 и rs12487736 со случаями наследственной семейной гиперхолестеринемии у женщин. Комбинация C аллеля rs2228314 гена SREBF2 и G аллеля полиморфизма rs12487736 гена SCAP была найдена связанной с повышенным риском ВСС у мужчин по сравнению с лицами, имеющими C аллель rs2228314 гена SREBF2 и AA генотип полиморфизма rs12487736 гена SCAP [48, 123]. Однако в Китае в 2010 году не было найдено ассоциации полиморфизмов с ИБС у мужчин моложе 55 лет [32].
USF1 (Upstream Stimulatory Factor 1) - транскрипционный фактор по типу лейциновой застежки-молнии, связывается с E-box элементами проксимального промоторного участка регулируемых генов. С ним связывают случаи семейной наследственной гиперлипидемии, фенотипически характеризующейся повышенным уровнем триглицеридов и/или общим холестерином, а также развитие атеросклероза и ВСС. Так в Италии с развитием семейной комбинированной гиперлипидемии найдены ассоциированными полиморфизмы rs2073658 и rs3737787 гена [39]. Полиморфизм rs2516839 локализован в нетрансляционном экзоне гена, Т аллель ассоциирован с повышенным уровнем общего холестерина и триглицеридов в крови, фиброзными изменениями в сосудах, развитием атеросклероза коронарных сосудов и аорты, развитием кальцификатов в них и наступлением ВСС. Помимо этого следует отметить, что Т аллель полиморфизма ассоциирован с развитием атеросклероза более чем одной коронарной артерии или аорты, с вероятностью более 50%. СС генотип полиморфизма обладает защитными свойствами, он связан с низким риском метаболического синдрома, особенно среди мужчин [81]. А аллель полиморфизма ассоциирован со сниженной вероятностью развития нестабильной атеросклеротической бляшки сонной артерии [144]. Предполагают, что оба аллеля полиморфизма rs2516839 могут изменять активность протеина USF1 либо путем нарушения транспорта его из ядра, либо за счет нарушения стабильности мРНК [84].
Гены, ассоциированные с синдромом Вольфа Паркинсона-Уайтта (WPW)
Группа ВСС была сформирована в период с 1999 по 2014 год c использованием критериев внезапной сердечной смерти ВОЗ и Европейского Общества Кардиологов (European Society of Cardiology) [119, 156]. Аутопсийный материал (379 образцов) был набран у внезапно умерших вне лечебно-профилактических учреждений жителей Октябрьского района г. Новосибирска, подвергшихся судебно-медицинскому исследованию, которое было проведено по стандартному протоколу на базе Государственного бюджетного учреждения здравоохранения Новосибирской области "Новосибирское областное клиническое бюро судебно-медицинской экспертизы". Средний возраст лиц включенных в группу ВСС составил 53,2±8,7 года. Доля мужчин в группе ВСС составляет 70,9 %, женщин - 29,1 %. С учтом ограниченной информации о времени развития летального исхода в группу ВСС включены случаи смерти, развившиеся в течение одного часа или в течение не более 24 часов при отсутствии свидетелей смерти и расценнных по данным судебно-медицинского исследования, как смерть сердечного генеза. Основные патологоанатомические диагнозы протоколов судебно-медицинского исследования лиц, включенных в группу ВСС – острая коронарная недостаточность и острая недостаточность кровообращения. Критерии исключения из группы ВСС: наличие морфологических изменений ткани сердца характерных для инфаркта миокарда, кардиомиопатий. Умершие с морфологическими изменениями характерными для инфаркта исключены из группы ВСС, так как согласно МКБ-10 смерть вследствие ИМ не относится к ВСС. А умершие внезапной сердечной смертью с морфологическими изменениями характерными для кардиомиопатий являются отдельной этиологической группой ВСС, для которой изучаются собственные молекулярно-генетические маркеры, не входящие в перечень изучаемых ОНП. Кроме того, из группы исключены лица, находившиеся в состоянии алкогольного, наркотического опьянения, которое могло послужить причиной развития летального исхода или способствовать развитию летального исхода на фоне имеющейся сердечно-сосудистой патологии.
В ходе проведения судебно-медицинского исследования у умерших забиралась ткань миокарда массой 5-10 г, которая в дальнейшем хранилась при температуре -200С до этапа выделения ДНК.
Группа контроля (жители того же района города, n=377) была подобрана по полу и возрасту из банка ДНК сформированного во время проведения международных исследований MONICA (Multinational MONItoring of trends and determinants in CArdiovascular disease) и HAPIEE (Health, Alcohol and Psychosocial factors In Eastern Europe). Средний возраст лиц включенных в группу контроля 53,1±8,3 года. Мужчины составили 68,3 %, женщины 31,7%.
Исследование HAPIEE - проспективное когортное исследование, проведенное с целью изучения эффекта традиционных и нетрадиционных факторов риска, социальных и психосоциальных факторов на развитие сердечно-сосудистых и других неинфекционных заболеваний в странах Восточной Европы. В исследование включены четыре когорты из России, Польши, Чехии, Литвы, возраст мужчин и женщин, включенных в исследование, 45-69 лет, общий объем выборки 36500 человек. Протокол исследования HAPIEE включал анкетирование, касающееся как социально-экономических условий жизни, так и истории хронических, в том числе и сердечно-сосудистых заболеваний, состояния физической активности и здоровья, в том числе и психического. Обследование включало измерение роста, массы тела, окружности грудной клетки, талии, бедер, артериального давления, частоты сердечных сокращений. Кроме того были исследованы респираторные и когнитивные функции [116]. Проект MONICA -многоцентровое международное исследование, координатором которого являлась Всемирная Организация Здравоохранения. Цель проекта – изучение тенденций сердечно-сосудистой заболеваемости и смертности, а также их связи с некоторыми факторами риска и качеством оказания медицинской помощи. В проект было вовлечено 26 стран, обследовано 10 миллионов человек в возрасте от 35 до 64 лет. В некоторых центрах в исследование были включены лица от 25 до 75 лет. В Новосибирске исследовано 9836 человек в возрасте от 25 до 64 лет. Обследование лиц включенных в проект MONICA проводилось по стандартному протоколу и включало в себя анкетирование, измерение роста, массы тела, артериального давления [24]. У лиц, включенных в исследования HAPIEE и MONICA, осуществлялся забор венозной крови, которая была разделена на аликвоты и хранилась при температуре -800С до этапа биохимического анализа. Биохимические исследования основных липидных показателей крови проводили энзиматическим методом с использованием стандартных реактивов «Biocon» на биохимическом анализаторе FP-901 «Labsystem» (проект HAPIEE) и фотометрическим методом на анализаторе «Техникон АА – II» (проект MONICA). Уровень ЛПНП рассчитывали по формуле Фридвальда при концентрации триглицеридов не выше 4,5 ммоль/л. Пробы крови с концентрацией триглицеридов более 4,5 ммоль/л исключались из анализа. Индекс атерогенности рассчитывали по следующей формуле: (ОХС-ЛПВП)/ЛПВП [4]. Забор венозной крови для молекулярно-генетического исследования осуществлялся в пробирки с 0,5М ЭДТА. Пробирки с кровью хранились при температуре -200С до этапа выделения ДНК.
Выбор однонуклеотидных полиморфизмов определялся известными данными об ассоциации этих полиморфизмов с внезапной сердечной смертью, полученными в ходе зарубежных исследований, или сердечно-сосудистыми заболеваниями, лежащими в основе развития внезапной сердечной смерти или имеющими схожий с ней механизм развития (Таблица 6).
Методики генотипирования ОНП
Полиморфизм rs1805124 гена SCN5A связан с заменой аминокислоты гистидина на аргинин в 1673 аминокислотной позиции белковой последовательности (H558R). Данная аминокислотная замена, вероятно, ведет к синтезу измененной альфа-субъединицы натриевого канала, что изменяет ток натрия в кардиомиоцитах и в свою очередь приводит к изменению скорости распространения электрического импульса, проявляющемуся в изменениях электрокардиограммы и развитии различных аритмогенных синдромов, ведущих к ВСС [32, 127].
В одном из российских исследований показано, что генотип AG полиморфизма rs1805124 гена чаще встречается у пациентов с атриовентрикулярной блокадой по сравнению со здоровыми лицами. Кроме того AG генотип более распространен у лиц с блокадами ножек пучка Гиса [110].
Одним из факторов риска развития ВСС, как известно, является удлинение интервала QT. В недавнем исследовании (CHARGE) было показано помимо связи полиморфизма rs1805124 с длиной интервала QT, его влияние на длину интервала PR и комплекса QRS, которые также могут вносить свой вклад в развитие фатальных событий [96].
Исследований связи полиморфизма гена с развитием ВСС ранее проведено не было. Полученные в данном исследовании результаты свидетельствуют об отсутствии ассоциации полиморфизма rs1805124 гена SCN5A с развитием ВСС в исследованной выборке.
В контрольной группе выявлена положительная связь rs1805124 гена SCN5А с некоторыми показателями липидного обмена (Таблица 21). Полиморфизм ассоциирован с уровнем холестерина в крови в контрольной группе (р=0,008). Носители генотипа АА имеют более низкие показатели холестерина по сравнению с носителями генотипов AG и GG (р=0,022). Но более выраженная статистическая значимость показана для генотипа AG. Носители данного генотипа имеют более высокие уровни холестерина по сравнению с двумя другими генотипами (р=0,003).
Кроме того носители генотипа GG значимо отличаются от носителей двух других генотипов по значению индекса атерогенности (2,20±0,55 и 3,17±1,06, соответственно, р=0,04). Ранее роль полиморфизма была изучена только в отношении развития нарушения проводимости сердца, исследований по вкладу полиморфизма в развитие липидных нарушений ранее проведено не было, что является логичным, поскольку ген SCN5А экспрессируется преимущественно в сердечной мускулатуре, кодирует субъединицу натриевого канала, который является частью системы формирования возбуждения в клетках сердца. И вряд ли можно предположить, что полиморфизм этого гена каким-то образом связан с развитием липидных нарушений. Стандартной общепринятой практикой в случае такого рода находок является проверка на больших независимых выборках.
Частоты генотипов полиморфизма rs13376333 гена KCNN3 в контрольной группе соответствуют ожидаемым частотам согласно равновесию Харди-Вайнберга (2=2,84).
По частотам генотипов и аллелей полиморфизма rs13376333 гена KCNN3 не удалось выявить статистически значимых различий между группой ВСС и контрольной группой (Таблица 22).
Полиморфизм был включен в данное исследование, так как в нескольких зарубежных проектах показана связь полиморфизма rs13376333 с развитием фибрилляции предсердий, которая может являться непосредственной причиной развития ВСС [29, 44, 76]. Так, в Китае выявлено, что Т аллель полиморфизма является независимым фактором риска развития идиопатической ФП [95]. Полученная связь rs13376333 с развитием ФП подтверждена в мета-анализе, который включил в себя 7 исследований и 24339 пациентов [153]. Исследований связи полиморфизма rs13376333 с развитием какой-либо другой сердечно-сосудистой нозологии, в том числе ВСС, по данным литературы проведено не было. Полученные результаты могут свидетельствовать о том, что полиморфизм rs13376333 гена KCNN3 вероятно не имеет отношения к развитию ВСС в русской популяции.
В контрольной группе выявлена связь полиморфизма с уровнем систолического артериального давления (р=0,043). Носители генотипа СТ имеют более высокий уровень систолического артериального давления по сравнению с носителями генотипов СС и ТТ (р=0,017) (Таблица 23).
Полиморфизмы генов-кандидатов нарушений сердечного ритма и их ассоциация с внезапной сердечной смертью
Ранее ассоциация полиморфизма rs3864180 гена GPC5 с риском развития ВСС была найдена в ходе полногеномного исследования по поиску генетических маркеров ВСС, проведенного на базе популяционного проекта Oregon-SUDS (Oregon Sudden Unexpected Death Study). В группу ВСС были включены мужчины и женщины европеоидной расы умершие ВСС, имеющие в анамнезе ИБС, в том числе и ИМ. Контрольная группа была подобрана из базы того же исследования по полу и возрасту. 75% лиц, включенных в группу ВСС и 90% лиц, включенных в контрольную группу были старше 50 лет. В результате исследования были выбраны приоритетные ОНП, которые могли быть генетическими маркерами ВСС. Их частоты были проверены на лицах как европеоидной, так и негроидной расы с ВСС из популяционных исследований ARIC (the Atherosclerosis Risk in Communities Study) и CHS (the Cardiovascular Health Study). Полученный статистически значимый протективный эффект rs3864180 гена GPC5 в отношении развития ВСС был более выражен у женщин, также как и наблюдаемое уменьшение интервала QT, проведенное ретроспективно в данном исследование, которое также является защитным фактором развития ВСС [16].
Однако в еще одном исследовании был показан прямо противоположный эффект полиморфизма rs3864180 гена GPC5 в отношении развития внезапного летального исхода. 2139 лиц перенесших острый коронарный синдром были включены в проспективное исследование Coronary Disease Cohort Study в Новой Зеландии. Клинические, электрокардиографические, нейрогормональные данные о пациентах собирались в течение года. В проекте была исследована ассоциация, в том числе и полиморфизма rs3864180 гена GPC5, с развитием ВСС/остановки сердца, удлинением реполяризации в трех временных точках: в начале исследования, через 1 и 12 месяцев после его начала. За период наблюдения было зафиксировано 106 случаев ВСС/остановки сердца. И согласно статистическим расчетам полиморфизм rs3864180 был выявлен как связанный с повышенным риском развития ВСС/остановки сердца, что противоречит первоначальному полногеномному исследованию [43].
Важно отметить, что полиморфизм локализован в области интрона гена и, судя по всему, входит в один блок сцепления с причинной заменой. Возможно, что в нашей популяции другие блоки сцепления, что и привело к отсутствию ассоциации полиморфизма с ВСС в данном исследовании. 3.6.2 Полиморфизм rs3010396 гена CASQ2
Наблюдаемые частоты генотипов полиморфизма rs3010396 гена CASQ2 соответствуют ожидаемым частотам согласно равновесию Харди-Вайнберга (2=0,003).
Не было найдено статистически значимых различий между группами по частотам генотипов и аллелей полиморфизма rs3010396 гена CASQ2 (Таблица 35).
Ассоциация полиморфизма rs3010396 гена CASQ2 была выявлена по результатам поэтапного исследования, выполненного на базе того же популяционного проекта Oregon-SUDS в 2011 году, где была показана связь полиморфизма с ВСС на фоне ИБС. В исследование было включено 1424 ОНП 18 генов, которые были проверены на причастность к ВСС, положительная ассоциация была выявлена для 36 ОНП, которые в дальнейшем были проверены в независимых исследованиях случай-контроль. В итоге статистически значимая ассоциация с ВСС была показана только для 6 ОНП, в перечень которых вошел и rs3010396 гена CASQ2. Ранее данный ОНП этого гена не рассматривался в отношении развития ВСС, или любой другой сердечно-сосудистой или иной патологии тогда как другие полиморфизмы и мутации гена CASQ2 были найдены ассоциированными с состояниями, лежащими в основе развития ВСС [145]. Следует отметить, что полиморфизм связан с нуклеотидной заменой в интроне гена. И, следовательно, скорее всего не связан с функцией белка кальсеквестрина, который кодируется геном и является важным компонентом мышечной функции. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии вклада полиморфизма в развитие ВСС в российской популяции, что может быть связано с генетическими особенностями нашей популяции.
Распределение частот генотипов полиморфизма rs10918859 гена NOS1AP соответствует равновесию Харди-Вайнберга (2=0,69).
При сравнении частот генотипов полиморфизма rs10918859 гена NOS1AP в группе ВСС и контрольной группе выявленные различия оказались близкими к уровню статистической значимости (р=0,063), при использовании доминантной модели (GG vs. AA+AG) в группе лиц умерших ВСС выявлено статистически значимое уменьшение доли носителей генотипа GG по сравнению с контрольной группой (ОШ=0,7, 95%ДИ 0,5-0,9, р=0,031). В дальнейшем различия сохраняются в группе лиц старше 50 лет (Таблица 36). В группе ВСС доля носителей генотипа AG (45,0%) значимо больше, а доля носителей генотипа GG (50,0%) меньше по сравнению с контрольной группой (33,6% и 62,3%, соответственно). Отношение шансов встретить в группе ВСС носителя генотипа GG составило 0,6 (95%ДИ 0,4-0,9, р=0,009), а носителя генотипа AG 1,6 (95%ДИ 1,1-2,4, р=0,013). В группе мужчин старше 50 лет для генотипа GG отношение шансов составило 0,6 (95%ДИ 0,3-0,9, р=0,011), а для генотипа AG – 1,7 (95%ДИ 1,1-2,7, р=0,027).