Введение к работе
Актуальность проблемы. Несмотря на существенные различия в патогенезе, течении к прогнозе ишешческой болезни сердца (ИБО и дила'тэционной кардиомиопатии (ДО!П)„ некоторые общие клинические проявления часто ставят вопрос о дифференциальной диагностике этих заболеваний. Неясность многих вопросов этиологии и большая клиническая значимость как одного, так и другого, зяставляет искать скрытые еспекты в их развитии и новые подходы в их исследовании.
Эволюция научных знание об участии непрофильных грануло-цитов (НГ) в патогенезе ИБС проделала путь от первых догадок до обоснованных положений за последние б лет (Е.Г.Редчиц, I9S9; Ernest et al.,l9B7} Kuir & iiell, 1989 ). В этот же период обнаружена возможность включения НГ в патогенетические цепочки развития ДКШ (Н.И.Евхов и др.,ДОП.
Одной из важнейших функции НГ, по всеобщему в настоящее время признанию, является поддержание внутреннего гомеостази организма, при этом антимикробная активность составляет літа небольшую часть этой функции (Н.М.Еереяная, ІШЯ). Филогенетически НГ представляют собой наиболее древнюю (по сравнению с иммунной системой) мульти{>ункциональную форму защиты, с менее совершенной-рецепцией и более генерализованными, неспеци-фичоскигаї з|і<екторні.:ми реакциями.
Важное место, которое занимвюг НІ' в развитии HSC обусловлено, с одной стороны, чрезвычайно высокой биологической ак-тИ1.'Но«'гы>) продуцируемых ики иеїлеств, среди которых метаболиты
;;р;
4 роны - необычайно широким полем действия - .возможностью проникать в большинство тканей организма и взаимодействовать с огромным числом клеток - эндотелиоцитами, лимфоцитами, миоцита-ми и другими ( Kullane et el., 1968$ Kbnig et al.,1990 ). Короткоживущие метаболиты арахидоновой кислоты - лейкотриены, тромбоксаны, простагландини, обладающие вазоконстрикторными или дилатирующими свойствами, принимают участие в механизмах местной„регуляции сосудистого тонуса ( Nichols et ai.,19881 De Servi et а1Я991)» тогда как „активные формы кислорода отличаются высокой цитотоксической активностью и могут повреждать как клетки эндотелия сосудов, так и миоциты (Е.Ф.Давидецкова, К.Г.Шафран, 1989; В.И.Морозов и др.,1990; Luccheeoi et el., 1989 ;Dtnernan &. Kehta,1990 ).
При ДШІ отмечается усиление спонтанной цитотоксичности НГ» но снижается' стимулированная цитотоксичность (Н.И.Вахов и др.,1991). Хорошо известное подавление функции Т-супрессо-ров и естественных киллеров при ДО.Щ (В.Б.Чумбуридэе и др., 1986; Andersen et el.,1982 ), нельзя не сопоставить со способностью активированных НГ продуцировать факторы, подавляющие активность стих клеток (Кау Ь Smith,i983 ).
В рекогносцировочных реакциях НГ ведущую роль играют терминальные углеводы мембранных гликопротеидов и гликолипидоз. Из их комбинаций складываются специфические рецепторные структуры, обеспечивающие избирательное связывание белковых молекул. Лигандаые белки, взаимодействующие с углеводными детерминантами мембран, носят название лектинов. В свою очередь, многие мембранные белки можно отнести к категории лектинов, так как они имеют свойство распознавать углеводные детерминанты на лигандных структурах. Большая часть нфЛекторных реакцкіі НГ
опосредована именно через эти механизмы. Таким образом, лектин-углеводные взаимодействия занимают, по-видимому, ключевые позиции во взаимоотношениях с другими клетками (А.Н.Малнский, 1986). Исходя из этого, характеристика структуры и сволств лектиновых рецепторов НГ должна быть паясно-Гшей стороной, отражающей их функциональную активность в норке и патологии. Между тем, работы по изучению свойств лектиновых рецепторов НГ в норме единичны (Weiribaum et nl.,1980; Ohno'et el.,'l982;Jutila et al.,1990) а при патологии сердечно-сосудистой системы -вовсе отсутствуют.
Одним из перспективных направлений, имеющим как фундаментальное, так и большое прикладное значение, является изучение биологического действия низкоинтенсивного лазерного излучения. Методы лазеротерапии пользуются все большим признанием среди практических врачей, злниигющихся лечением сердечно-сосудистых заболеваний. После облучении гелий-неоновый лазером крови больших ИСС отмечается положительная динамика клинико-леборе.торных показателей и улучшение общего состояния больных ШС (И.М.Ко-рочкин и др., Ш-П, 1990; П.Конин и Э.Г.Болкова І9Я9). Легкая доступность в сочетании с высокой клинической эффективностью и практически/-! отсутствием побочных реакций, создают основу для роста популярности отих методов среди населения.
Однако, в- настоящее время не только до конца не раскрыты конкретные механизмы лечебного действия излучения гелий-неонового лазера на организм больного человека, но и совершенно не изучено влияние его на здоровый организм. .Далека от разрешения проблема акцептора лазерного излучения, который ищут на органном, тканевом, клеточной, коле.сулярном уровнях (И.и.Корочкин, Е.Б.Бьбенко, 1990) Учитывая, что наибольшая эффективность биологического действия излучения гелиїі-неонового лазера прояв-
ліієтся при его непосредственном воздействии на кровь, изучение'в этом плане клеточных элементов крови представляется наиболее перспективным.
Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение Функционально-морфологических изменений, происходящих на клеточном и молекулярном уровне ь ИГ периферической крови больных ИБС и ДШ.ІП, а также возможности их коррекции ни^коиитенсивным излучением гелт'-неонового лазера. При этом решались следующие конкретике задачи:
изучить состав открытых гликопротеидних детерминант плазматической к'еиброны и связанные с ними агрегационные свой-отва НГ;
изучить связанную с системой миелопероксидазы, генерацию активных ?-орм кислорода в. НГ;
определить содержание некоторых метаболитов арахйдоно-воЯ кислоты в НГ периферическое кроЕи;
- провести компьютерный анализ плоскостных изображений НГ
. с регистрацией поверхностно-объемных отноиениі!, числа специфи
ческих и ьзуроФильнкх гранул-и тол-цшы слоя подме;>;бранного ак
тина;
провести регистрацию лектиникдуцированного выброса ATS из НГ у больных 1ЕС и практически здоровых лиц;
количественно охарактеризовать и провести сравнительный анализ -выявленных функциональные и морфологических особенностей НГ у больных ИВС,' Щ3\ и практически здорочкх лиц;
количественно охарактеризовать и провести сравнительный анализ изменений, происходящих в НГ после однократного облучения цельной крови гелий-неоновым лазером in vitro у больных ШС, ДОЛ п.-практически здоровых пщ;
. - изучить злиянне ьну^р;';;енн;;го с-^луш ?іия у.'.>і--н'л т\-: ;.Г;-кео-
7 повыл лазером на лабораторные показатели крови и клиническое течение НБС.
Научная новизна. Б результате решения поставленных в работе задач полугены новие данные, касаю?диеся структуры и функции НГ при ШС и ДОЛ. В частности, впервые:
с помощью набора из 9 лектинов различной углеводной специфичности изучен состав открыть» гликопротеидных детерминант плазматическое мембраны НГ у больных ИБС, ДОЛІ и практически здоровых лиц. При этом выявлены отличительные особенно--стй для обоих нозологических единиц, а также динамика их изменений после облучения крови гелий-иеоновым лазером;
выявлены разнонаправленные изменения генерации активных іорм кислорода в НГ крови больных ШС, с усилением для одних лектинов и снижением для других;
выявлено, усиление спонтанное, но снижение лектининдуци-рованной генерации активных форм кислорода в НГ крови больных ЖЯ1;
установлено снижение содержания продуктов обмена арахи-лононой кислоты в ІІГ больных ДО'.-ТІ;
установлены и количественно охарактеризованы выраженные морфологические отличия НГ крови больных ДК1,.П, заключающиеся н-утолщении. слоя нодмеибраниого актина и увеличении размеров, числа и плотности упаковки специ{ических гранул в цитоплазме;
установлены морфологические отличия НГ крови больных 1ЕС, заключа»>'диеся ь уменьшении толщины слоя подмембраиного актина, просветлении цитозоля и вакуолизации клеток;
доказано" нормализующее влияние излучения гели ^.-неонового лазера на большинство изученных показателей, характері'-
' . 8
з.умцпх .структуру и функцию ІТГ у больных ИБО и ДО,!!.
Практическая ценность работы.
Освещены некоторое аспекты патогенеза ДОЛ, связанные с системо?: нєіітрофшіьнщ гр'анулоцитов. Предложено использовать обнаруженные -функциональные и морфологические особенности ЇІГ бсяьпых ~Д{\:$\ для дифференциальное диагностики этого заболевания.
Раскрі тн некоторые мехшизмы. лечебного действия гелий-неонового ларерл, .реализуемое через систему нейтрофильных гра-нулоцитов. Изучены изменении, вызываемые низкоинтеисивіп.Ім излученная гелий-неонового лазера в НГ тактически здоровій лиц.
.Предложен новый метод гемостш.;уляцим,при котором замкнутый обьем цельноі'і крови подвергается облучению .гелий-неоновым лазером не в статическом состоянии, а г. условиях, максимально {риблржниж к гемодинпмическим условиям сосудистого русла.
Учитывая тіуно^оду.№р/і>іі(ее действие излучения гєлий-не-еі.'ового лазера и обнаруженное нормализующее действие его tm систему непрофильных гранулоцитов, рекомендовано использовг-ть методи лазеротерапии в комплексном лечении дК.'ІІ.
Основные положенім, выносимые на защиту;
разнонытравленнье изменения генерации активных форм кислорода в ИГ крови больных ШС. свидетельствуют о ведущей ролл рецепторних образований в нарушении данной Функции НГ в ато;, группе больных;
усиление спонтанно!', но снижение лектининдуцированной. генерации активных Форгд 'кислорода в ЯГ крови больные Дл.ЛІ сви-дс :;^:ьст!.ует о нарушении процессов трансмембранно;, передачи
с; и -,.;.:, ' р, ч;,В'0Г КСТ^рОЇО v-OseT Оьть VTOJ; , -Л'С СЛОЯ !к>Ді..'СМ-
- структурно-функциональные изменения ВТ-при ДОН! могут
быть охарактеризованії как неРтройильнёя гранулоцитостения (по
ВЛІ.Таланкину и др., ІР90), клиническим проявлением "которой
и является ДО.чЛ;
- .улучшение функционально-морфологических показателе!! НГ
после облучения крови гелий-неоновым лазером связано не с мо
дифицирующим действием ливарного излучения на мембрпнные струк
туры конкретных клеток, а с повреждением, "еькіивиниєм" менее
резистентній клеток, что сопровождается "омоложением", обмен-'
ление».' нопулнционного состава НГ.
Практическое внесение полученных результатов.
Результати работы внедрены в практику отделение лазеротерапии, ХИЕС и кардиомиопатий НИИ экспериментально:; и клинической терапии !"3 и СО РГ. ПредлоленнкГ' метод гемостимуляции in vitro используется на ка.Тедре внутренних болезни М ГІІ--.МИ иі.і.Н. И. Пирогова.
Апробация диссертации. Основные положеній диссертации доложенн на на/чно-пряктическоР конференции молодых медиков Грузии (1937), ни объединенном заседании научных обществ терапевтов и патологоанатомов Грузии (1938), на заседании научного сб нестча кардиологов г.Тбилиси (1С83), на расширенном заседании ученого совета НИИ экспериментальной и клинкческоіі терапии ':.'}. и СО РГ (199^).
Связь і<аач_исслпдоііания с проблешьки планами. Диссертационная работа была ньчата и выполнялась о рамках общ;. сок,зяоі проблеми [7.03 и .-/огдунеродного сотрудничества СОР по теме ii.13.
І!.','блик?-:пии.Го те-:.» диссертации опубликовано ТІрайот, п то» ч!і"'.пе г) - в пентральнкх журналах.
10 Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов, 1У разделов описания результатов собственных исследований, обсуждения и выводов. Текст иллюстрирован 15 таблицами, 9 диаграммами, 9 гистограммами, 4 агрегатограммами и 21 электрон-нограимой. Список литературы содержит 299 источников, в том числе 99 на русском и 200 на других иностранных языках.