Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
Глава 2. Материалы и методы исследования 39
2.1. Организация работы и объем исследований 39
2.2. Иммунологические методы исследования 40
2.3. Статистическая обработка данных 46
Глава 3. Особенности развития периферических в-лимфоцитов при беременности, осложненной задержкой роста плода 48
3.1. Особенности содержания, созревания, дифференцировки периферических В-лимфоцитов при беременности, осложненной задержкой роста плода 48
3.2. Характер дифференцировки периферических В-клеток памяти при беременности, осложненной задержкой роста плода 67
3.3. Функциональные особенности периферических В-лимфоцитов при беременности, осложненной задержкой роста плода 73
3.4. Особенности сывороточного содержания BAFF и его рецепция периферическими В-лимфоцитами при беременности, осложненной задержкой роста плода 80
3.5. Содержание периферических регуляторных В-лимфоцитов и сывороточный уровень интерлейкина 10 при беременности, осложненной задержкой роста плода 86
Глава 4. Характер апоптоза периферических в-лимфоцитов при беременности, осложненной Задержкой роста плода 91
Глава 5. Обсуждение результатов исследования 100
Заключение 123
Выводы 126
Практические рекомендации 128
Список сокращений 129
Список литературы
- Иммунологические методы исследования
- Статистическая обработка данных
- Характер дифференцировки периферических В-клеток памяти при беременности, осложненной задержкой роста плода
- Содержание периферических регуляторных В-лимфоцитов и сывороточный уровень интерлейкина 10 при беременности, осложненной задержкой роста плода
Иммунологические методы исследования
В литературе существует две основных модели описания конечных этапов В-клеточного развития: линейная и бифуркационная [288]. Согласно линейной модели развития В-клетки, прошедшие путь герминативного развития, образуют фракцию В-клеток памяти, которые, в свою очередь, формируют пул плазматических клеток [288]. Большинство авторов придерживаются бифуркационной модели развития В-лимфоцитов, согласно которой В-клетки зародышевых центров дифференцируются по двум независимым направлениям: клетки памяти и плазматические клетки [288]. Таким образом, согласно бифуркационной модели развития В-клеток, в зародышевых центрах формируется пул плазмобластов, предшественников плазматических клеток и пул клеток памяти [74, 170, 219]. Известно, что процесс дифференцировки активированных фолликулярных В-клеток до плазматических клеток существенно облегчается путем активации через TLR [43, 219]. Плазмобласты подвижны, способны к пролиферации, экспрессируют на своей поверхности молекулы MHC, BCR, обладающие высоким сродством к антигену [269]. Важными факторами созревания плазмобластов до плазматических клеток являются IL-2, IL-6, IL-10, IL-21 [150, 288]. Они утрачивают способность экспрессировать хемокиновый рецептор CXCR5, но приобретают рецептор CXCR4, в результате чего они покидают зародышевый центр [219, 242]. В дальнейшем большая часть плазмобластов мигрирует в красный костный мозг, где завершается их дифференцировка до плазматических клеток, которые получили название «долгоживущие» [170, 219]. Эта фракция плазмоцитов в красном костном мозге может сохраняться месяцы, годы и даже в течение всей жизни [170, 219]. Возможность длительного существования плазмоцитов в красном костном мозге обуславливает синтез стромальными клетками BAFF и/или APRIL при их взаимодействии с рецепторами на плазматических клетках и при участии IL-5, IL-6, IL-21, TNF и хемокина CXCL12 (SDF-1) [36, 43]. Другая часть плазматических клеток мигрирует в слизистые оболочки внутренних органов: в lamina propria и в послизистый слой (преимущественно кишечника), в дерму кожи [47, 74, 219]. Около четверти всех антителопродуцентов остается во вторичных лимфоидных органах [36, 74, 145, 219, 222]. Плазматические клетки полностью теряют способность к движению, утрачивают возможность экспрессии MHC класса, ВCR на своей поверхности [11, 30, 36].
Плазматические клетки характеризует поверхностная экспрессия CD138, CD38, CD28 [145, 219]. Известно, что часть плазматических клеток, которые экспрессируют хемокиновый рецептор CXCR3, могут мигрировать в очаг воспаления, где способны к длительному выживанию за счет стромальных взаимодействий [36]. На молекулярном уровне дифференцировка В-лимфоцитов до плазматических клеток совпадает с ослаблением экспрессии проапоптотического фактора Bcl-6 и началом синтеза Blimp-1 [288, 298]. А формирование В-клеток памяти происходит в случае ослабления экспрессии Bcl-6 и Blimp-1 [36, 96, 288, 298]. Факторы, определяющие развитие В-клеточных предшественников по пути формирования плазматических клеток или клеток памяти, до конца не определены [219]. Предполагается участие эпигенетических процессов [298]. В литературных источниках нами была найдена единственная работа Selvaggi L. и соавторов (1983), которые на малой выборке женщин установили, что уровень плазматических клеток был выше в периферической крови женщин с ЗРП не менее чем в 10 раз по сравнению с параметрами неосложненной беременности [46]. Плазматические клетки, созревающие в герминативных центрах, являются высокоспециализированными клетками, основная функция которых - синтез антител одного определенного изотипа (IgG, IgA или IgE), аллотипа, идиотипа, одной специфичности [36, 288].
Известно, что материнские антитела способны проникать через плаценту и принимать участие в формировании иммунной защиты плода при беременности [134]. В литературе описывается особый тип материнских антител, которые играют важную роль в формировании толерантности материнского организма к семиаллогенному плоду [124, 151]. При физиологической беременности в периферической крови женщин происходит повышение так называемых ассиметричных или блокирующих антител класса G (aIgG), которые возвращаются к нормальному уровню после родов [51, 124]. Особенностью этих иммуноглобулинов является то, что один из Fab-фрагментов гликозлилирован, что не позволяет им участвовать в классических эффекторных иммунных реакциях [50, 124]. Однако aIgG способны связывать антигены, образуя иммунные комплексы, которые не вызывают последующих эффекторных иммунных реакций, в том числе фиксации комплемента, тем самым препятствуя развитию реакций клеточной цитотоксичности и фагоцитоза [124]. Предполагается, что все это обуславливает нейтрализацию материнских антител против антигенов главного комплекса гистосовместимости плода отцовского происхождения [285]. Исследования in vitro показали, что продуцентоми aIgG являются плацентарные трофобласты и эндотелиальные клетки [124]. Доказано, что сниженный уровень блокирующих антител при беременности ассоциируется с развитием привычного невынашивания [50]. Некоторыми авторами предполагается, что aIgG могут играть важную роль при других патологиях беременности и бесплодии [226].
Данные по сывороточному содержанию иммуноглобулинов основных классов при беременности, осложненной ЗРП, немногочисленны и противоречивы [24, 111]. В литературе имеются данные, что уровень иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA при ЗРП существенно не отличался от такового при физиологической беременности [111]. По данным Кудряшовой А. В. и соавторов (2009) сывороточное содержание IgM и IgG было достоверно повышенным в первом триместре беременности у женщин с развившейся впоследствии ЗРП [24]. Этими же авторами установлено, что при физиологическом течении беременности и при ЗРП отмечалось достоверное снижение уровня сывороточных IgM и IgA в динамике гестационного процесса [24]. При ЗРП снижение уровня IgM было не столь значительным и оставалось существенно повышенным в третьем триместре беременности по сравнению с таковым при неосложненной беременности [24].Только в случае развития ЗРП при беременности дополнительно отмечалось существенное снижение уровня IgG в сыворотке крови к концу беременности [24].
Статистическая обработка данных
Как видно из данных, представленных в таблице 3.1.1, уровень CD19+ В-лимфоцитов в общей группе женщин с ЗРП существенно не отличался от такового в контрольной группе (p 0,05). Уровень CD19+ В-лимфоцитов в группе женщин, родивших детей с ЗРП и без ЗРП, был практически одинаковым и соответствовал таковому в группе контроля (p 0,05 в обоих случаях). Достоверных различий по уровню CD20+ В-клеток в общей группе женщин с ЗРП, по сравнению с таковым в группе контроля выявлено не было (p 0,05). В основной группе женщин, родивших детей с ЗРП, и группе женщин, без ЗРП у новорожденных, содержание CD20+ В-лимфоцитов не различалось и в обоих случаях соответствовало исследуемому параметру группы контроля (p 0,05 во всех случаях).
Была выявлена тенденция к снижению уровня периферических B-клеток c фенотипом CD20+CD5- в общей группе женщин с ЗРП, и установлено достоверное снижение уровня данного параметра по сравнению с показателем контрольной группы в группе женщин с подтвержденной ЗРП у новорожденных (p=0,038). В группе женщин с ЗРП, родивших детей без ЗРП, количество CD20+CD5- лимфоцитов не отличалось от такового в группе контроля (p 0,05). Различий в содержании CD20+CD5- лимфоцитов между группами женщин, родивших детей с ЗРП и без нее выявлено не было (p 0,05).
Содержание периферических CD20+CD5+ В-клеток не имело достоверных различий с таковым в группе контроля во всех группах женщин с ЗРП вне зависимости от наличия ЗРП у новорожденных (p 0,05 во всех случаях).
В дальнейшем мы оценили содержание основных популяций периферических В-лимфоцитов у беременных женщин с ЗРП в зависимости от тяжести ЗРП у детей при рождении. Содержание CD20+CD5- и CD20+CD5+ В-лимфоцитов у женщин с ЗРП в зависимости от тяжести ЗРП у новорожденных представлены в таблице 3.1.2.
Содержание CD19+ и CD20+ В-лимфоцитов в периферической крови женщин с ЗРП в зависимости от тяжести ЗРП у детей при рождении Показатель,%(M±m) Контрольная группа(n=15) ЗРП— ЗРП(n=30) ЗРП— ЗРП I(n=9) ЗРП— ЗРП II-III(n=21) CD 19+ 6,84±0,95 5,91±0,55 7,19±1,09 CD20+ 7,51±0,78 9,14±1,57 8,38±0,87 n - число обследованных. p - достоверность различий показателей женщин с ЗРП по сравнению с показателями группы контроля. Исходя из данных, представленных в таблице 3.1.2, видно, что уровень периферических CD19+ В-клеток в общей популяции лимфоцитов у беременных женщин с ЗРП не менялся в зависимости от тяжести ЗРП у новорожденных и соответствовал таковому в группе контроля (p 0,05 во всех случаях). Различий в содержании периферических CD20+ В-лимфоцитов в группах женщин с ЗРП І, так и ЗРП ІІ-ІІІ у детей при рождении по сравнению с таковым контрольной группы, так и между собой, выявлено не было (p 0,05 во всех случаях). Таблица 3.1.3 Содержание CD20+CD5- и CD20+CD5+ клеток в периферической крови беременных женщин с ЗРП в зависимости от тяжести ЗРП у новорожденных Показатель,%(M±m) Контрольная группа(n=20) ЗРП— ЗРП(п=31) ЗРП— ЗРП I(п=10) ЗРП— ЗРП П-Ш(п=21) CD20+CD5- 88,34±0,81 85,34±1,84 83,98±1,98(p=0,050) CD20+CD5+ 11,70±0,81 14,70±2,24 12,51±1,18 n - число обследованных. p - достоверность различий показателей женщин с ЗРП по сравнению с показателями группы контроля. Нами было установлено, что уровень CD20+CD5- лимфоцитов достоверно не менялся в группе женщин с ЗРП при рождении детей с легкой степенью ЗРП, хотя он и имел тенденцию к снижению по сравнению с контрольными значениями (p 0,05). В то же время, в группе женщин с ЗРП, родивших детей с умеренной или тяжелой степенью ЗРП, отмечалось достоверное снижение уровня CD20+CD5- В-клеток, по сравнению с таковым в группе контроля (p=0,050). Содержание периферических CD20+CD5- В-клеток, хотя и имело тенденцию к повышению у женщин с ЗРП, родивших детей с ЗРП ІІ-ІІІ, по сравнению с таковыми с ЗРП І у новорожденных, достоверно не различалось (p 0,05). Содержание периферических В1-лимфоцитов с фенотипом CD20+CD5+ в крови женщин с ЗРП существенно не менялось как в случае рождения детей с ЗРП І, так и ЗРП ІІ-ІІІ, и соответствовало таковому в группе контроля (p 0,05 во всех случаях).
Процесс дифференцировки В-лимфоцитов в периферических лимфоидных органах после встречи с антигеном сопровождается переключением классов поверхностных иммуноглобулинов с IgM на IgG, IgA или IgE и созревание их аффинности, что способствует повышению эффективности антительного иммунного ответа [36, 47, 170, 242]. Мы оценили содержание IgM- и IgG-позитивных CD20+ В-лимфоцитов в периферической крови женщин с ЗРП. Данные представлены в таблице 3.1.4 и на рисунках 3.1.1 и 3.1.2. Таблица 3.1.4
Особенности содержания CD20+IgM+ и CD20+IgG+ В-лимфоцитов в периферической крови беременных женщин c ЗРП в сроке 32-36 недель Показатель,%(M±m) Контрольная группа (n=14) Общаягруппа ЗРП(n=26) ЗРП— ЗРП(n=19) ЗРП— без ЗРП(n=7) CD20+IgM+ 21,71±3,69 36,97±4,05 pl=0,011 41,70±5,68 pl=0,007 p2=0,032 27,52±2,45 CD20+CD5-IgM+ 18,89±1,35 32,27±3,92 pl=0,003 37,06±5,63 pl=0,006 p2=0,030 23,22±1585 CD20+CD5+IgM+ 4,39±0,83 4,71±0,50 4,48±0,64 5,24±0,79 CD20+IgG+ 3,65±0,71 6,67±0,93 pl=0,014 7,28±1Д4 pl=0,011 p2=0,021 4,32±0,35 CD20+CD5-IgG+ 2,93±0,79 6,29±0,84 pl=0,007 6,95±1508 pl=0,006 4,71±1507 CD20+CD5+IgG+ 1,35±0,34 1,24±0,43 1,06±0,47 1,82±1509 n - число обследованных. p1 - достоверность различий показателей женщин с ЗРП по сравнению с показателями группы контроля; p2 - достоверность различий показателей женщин с ЗРП, родивших детей с ЗРП, по сравнению с показателями группы женщин с ЗРП, родивших детей без ЗРП. Результаты исследований показали, что в общей группе женщин с ЗРП достоверно повышалось содержание CD20+IgM+ В-лимфоцитов по сравнению с показателем группы контроля (p=0,011). Уровень CD20+IgM+ клеток в основной группе женщин, родивших детей с ЗРП, также был существенно выше как по сравнению с показателем группы контроля (p=0,007), так и группы женщин, родивших детей без ЗРП (p=0,032). В группе женщин с ЗРП во время беременности, но родивших детей без данной патологии, уровень CD20+IgM+ В 54 клеток, хотя и имел тенденцию к повышению, существенно не отличался от контрольных значений (p 0,05).
Уровень CD20+CD5-IgM+ лимфоцитов в общей группе женщин с ЗРП был существенно выше, чем в контрольной группе (p=0,003). Содержание CD20+CD5-IgM+ клеток также было существенно выше в основной группе женщин, родивших детей с ЗРП, по сравнению с параметрами группы контроля (p=0,006) и группы женщин с нереализовавшейся ЗРП у детей при рождении (p=0,030). У женщин основной группы, родивших детей без ЗРП, уровень периферических CD20+CD5-IgM+ клеток имел лишь тенденцию к повышению, но достоверно не отличался от такового группы контроля (p 0,05).
Уровень CD20+CD5+IgM+ B1-лимфоцитов в периферической крови существенно не менялся во всех исследуемых группах женщин с ЗРП и соответствовал показателям контрольной группы (p 0,05 во всех случаях).
В общей группе женщин с ЗРП, содержание периферических CD20+IgG+ В-лимфоцитов достоверно повышалось по сравнению c таковым в группе контроля (p=0,014). Уровень CD20+IgG+ В-лимфоцитов в основной группе женщин, родивших детей с подтвержденной ЗРП, был существенно выше аналогичного параметра женщин контрольной группы, и группы, родивших детей без ЗРП (p=0,011, p=0,021 соответственно). Содержание CD20+IgG+ В-лимфоцитов в группе женщин, имевших при беременности ЗРП, которая не реализовалась у новорожденных, не отличалось от такового в группе контроля (p 0,05).
Уровень В2-лимфоцитов с фенотипом CD20+CD5-IgG+ был существенно выше как в общей группе женщин с ЗРП, так и в основной группе женщин с подтвержденной ЗРП у новорожденных, по сравнению с контрольными значениями (p=0,007, p=0,006 соответственно). В периферической крови женщин основной группы, родивших детей без ЗРП, содержание CD20+CD5-IgG+ клеток имело лишь тенденцию к повышению, но достоверно не отличалось от такового группы контроля (p 0,05). Содержание периферических CD20+CD5-IgG+ В-клеток, хотя и имело тенденцию к повышению у женщин с ЗРП, которая реализовалась при рождении по сравнению с основной группой женщин, родивших детей без ЗРП, достоверно не различалось (p 0,05).
Достоверных различий по уровню CD20+CD5+IgG+ В1-лимфоцитов во всех исследуемых группах женщин с ЗРП, как по сравнению с таковым группы контроля, так и между собой выявлено не было (p 0,05 во всех случаях).
Результаты исследования уровня периферических В-лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности иммуноглобулиновые рецепторы класса M при беременности, осложненной ЗРП, в зависимости от тяжести патологии у новорожденных, представлены на рисунке 3.1.1
Характер дифференцировки периферических В-клеток памяти при беременности, осложненной задержкой роста плода
Как видно из представленных в таблице 3.4.1 данных, в группе женщин, беременность которых осложнилась задержкой роста плода, отмечалась лишь тенденция к снижению уровня BAFF в сыворотке крови, но существенных изменений по сравнению с контрольными значениями не наблюдалось (p 0,05). Только в основной группе женщин, родивших детей с ЗРП, сывороточное содержания BAFF было существенно ниже, чем в группе контроля (p=0,049) и группе женщин, родивших детей без ЗРП (p=0,004). Сывороточное содержание BAFF существенно не менялось по сравнению с аналогичным параметром группы контроля у женщин, беременность которых осложнилась ЗРП, но родивших детей без ЗРП (p 0,05).
Было установлено, что содержание CD19+BAFFR+ В-лимфоцитов было существенно выше в группе женщин, беременность которых осложнилась ЗРП, чем в контрольной группе (p=0,000). В группе женщин с ЗРП, с реализовавшейся ЗРП у новорожденных, уровень CD19+BAFFR+ В-клеток был существенно выше аналогичного параметра группы контроля (p=0,000), и не отличался от такового в группе женщин с ЗРП, родивших детей без ЗРП (p 0,05). Уровень периферических CD19+ BAFFR+ В-клеток в основной группе женщин, родивших детей без ЗРП, был также существенно выше контрольных значений (p=0,000).
Уровень средней интенсивности флюоресценции (MFI) BAFF рецептора на периферических CD19+ В-лимфоцитах был выше у женщин, беременность которых осложнилась ЗРП, чем в контрольной группе (p=0,019). У женщин с ЗРП, которая реализовалась у новорожденных, уровень средней интенсивности флюоресценции BAFFR периферическими CD19+ В-лимфоцитами был также повышенным в сравнении с аналогичным параметром группы контроля (p=0,020), но существенно не отличался от такового у женщин с ЗРП, родивших детей без ЗРП (p 0,05). У женщин основной группы, родивших детей без ЗРП, уровень MFI BAFF-рецептора на CD19+ В-клетках, хотя и имел тенденцию к повышению, достоверно не отличался от такового группы контроля (p 0,05). Таблица 3.4.2 Особенности сывороточного содержания и рецепции BAFF периферическими CD19+ В-лимфоцитами у женщин с задержкой роста плода в зависимости от тяжести ЗРП у новорожденных Показатель (M±m) Контрольная группа(n=25) ЗРП— ЗРП(n=32) ЗРП— ЗРП I(n=ll) ЗРП— ЗРП II-III(n=21) BAFF, нг/мл 0,54±0,06 0,41±0,04 0,36±0,05 p=0,021 CD19+BAFFR+, % 63,55±2,26 72,07±3,14 p=0,043 76,59±2,29 p=0,000 MFI BAFFR, ед. 4239,21±236,77 4823,00±335,24 5220,00±323,07 p=0,025 n - число обследованных. p - достоверность различий показателей женщин с ЗРП по сравнению с показателями группы контроля.
Данные, представленные в таблице 3.4.2, свидетельствуют, что сывороточный уровень BAFF был достоверно ниже, чем в контрольной группе, только в группе женщин с ЗРП, родивших детей с ЗРП ІІ-ІIІ (p=0,021). В основной группе женщин, родивших детей с легкой степенью ЗРП, отмечалась лишь тенденция к снижению сывороточного уровня BAFF (p 0,05). Выявлена выраженная тенденция к снижению сывороточного уровня BAFF у беременных женщин с ЗРП с усилением тяжести патологии у новорожденных, однако, достоверного снижения уровня данного показателя выявлено не было (p 0,05).
Содержание периферических CD19+BAFFR+ лимфоцитов было существенно выше у женщин с ЗРП, как при рождении детей ЗРП І, так и ЗРП ІІ-ІIІ, по сравнению с показателями группы контроля (p=0,043, p=0,000 соответственно). Хотя нами и была отмечена тенденция к повышению содержания CD19+ BAFFR+ В-лимфоцитов в периферической крови женщин с ЗРП с утяжелением ЗРП у детей при рождении, но, существенных различий по уровню данного параметра выявлено не было (p 0,05).
При оценке средней интенсивности флюоресценции BAFF-рецептора на CD19+ В-лимфоцитах при ЗРП, было установлено существенное повышение уровня данного параметра по сравнению с таковым группы контроля в группе женщин с ЗРП, только в случае рождения детей с ЗРП ІІ-ІIІ (p=0,025). У женщин с ЗРП, родивших детей с ЗРП легкой степени тяжести, уровень MFI BAFF-рецептора существенно не менялся и соответствовал таковому в группе контроля (p 0,05). Достоверных различий между группами женщин с ЗРП, родивших детей с легкой ЗРП и ЗРП умеренной или тяжелой по уровню средней интенсивности флюоресценции CD19+ BAFFR+ В-клеток выявлено не было (p 0,05).
Для оценки возможности использования иммунологических показателей для прогнозирования степени тяжести задержки внутриутробного роста у детей, родившихся от женщин с ЗРП, мы провели ретроспективный анализ сывороточного содержания BAFF у женщин в сроке 32-36 недель беременности с ЗРП и в контрольной группе. По результатам проведенного анализа был разработан дополнительный прогностический критерий, который основан на оценке сывороточного содержания BAFF у женщин с ЗРП в сроке 32-36 недель беременности. При его значении равном или менее 0,48 нг/мл прогнозировали рождении детей с умеренной или тяжелой степенью ЗРП. Метод отличается высокой точностью - 74%, чувствительностью - 90%, специфичностью - 54%, AUC=0,698. Полученные данные представлены на рисунке 3.2.2
Содержание периферических регуляторных В-лимфоцитов и сывороточный уровень интерлейкина 10 при беременности, осложненной задержкой роста плода
Суммируя полученные данные, можно заключить, что у беременных женщин при реализации ЗРП у детей при рождении, особенно при крайней степени ее выраженности, усиление процессов дифференцировки и функциональной активности В-лимфоцитов могло определяться аутокринным регулирующим действием периферических В-лимфоцитов, продуцирующих IL-4 и IL-6.
Известно, что основные процессы дифференцировки и созревания В-лимфоцитов происходят в селезенке и в лимфоузлах [36, 43, 47, 72, 74, 208, 219, 281, 300]. Литературные данные свидетельствуют, что Breg оказывают супрессорный эффект как путем продукции цитокинов IL-10 и TGF-, так и при непосредственном контакте клетка-клетка, инициируя апоптоз [113, 127, 188, 189, 195, 237, 242, 260, 301]. По нашим данным при ЗРП отмечается несоответствие между сниженным уровнем периферических IL-10+ В-лимфоцитов и повышенным содержанием IL-10 в сыворотке крови. По-видимому, сывороточное содержание IL-10 не отражает функциональной активности Breg. Вероятно, повышенное сывороточное содержание IL-10 обусловлено его усиленной продукцией другими типами клеток: регуляторными Т-лимфоцитами и/или моноцитами, так как в литературе имеются данные о повышении уровня Treg и IL-10+ моноцитов в периферической крови женщин с ЗРП в 3 триместре гестации [24, 213]. Кроме того, общеизвестно, что IL-10 может выступать не только в качестве иммуносупрессорного фактора, но и играть важную роль в процессах дифференцировки В-клеток, в частности, способствуя созреванию В-лимфоцитов в плазматические клетки [69, 74, 81, 199, 214]. Вероятно, при беременности, осложненной ЗРП, повышенное содержание IL-10 определяет усиление дифференцировки В-лимфоцитов до конечных стадий - плазматических клеток. Это предположение хорошо согласуется с ранее описанными нами данными о достоверном повышении уровня плазматических клеток в периферической крови только у женщин, имеющих достоверно повышенное сывороточное содержание IL-10. Эти изменения были характерны для основной группы женщин, родивших детей с умеренными и тяжелыми проявлениями ЗРП и при рождении детей без ЗРП.
Можно предположить, что при ЗРП снижение уровня Breg в периферической крови происходит за счет апоптоза, ограничивая их супрессорное воздействие на процессы дифференцировки эффекторных В-лимфоцитов. Процессы элиминации клеток по механизму апоптоза имеют важное значение в функционировании иммунной системы [213, 293]. Данные литературы свидетельствуют, что нарушение апоптоза играет важную роль в патогенезе задержки роста плода [9]. Одним из механизмов апоптоза клеток многоклеточного организма является Fas-FasL-зависимый путь [169, 180, 257]. Поверхностная экспрессия молекул Fas или CD95 свидетельствует о готовности клеток к вступлению в апоптоз [169, 180, 257]. При взаимодействии рецептора с его специфическим лигандом - FasL (CD95L) происходит запуск каскада реакций, ведущих к гибели клетки [48, 78, 169, 258]. Также известно, что CD95L может выступать в качестве негативного регулятора апоптоза, препятствуя естественному процессу Fas-индуцированной элиминации клеток [9].
Мы оценили особенности Fas-FasL-зависимого апоптоза периферических В-лимфоцитов беременных женщин с ЗРП. Содержание В-лимфоцитов, вступивших в апоптоз, определялось по результатам аннексинового теста. Нами было выявлено, что уровень CD95+ и CD5-CD95+ В-клеток был существенно снижен в периферической крови беременных женщин, родивших детей с ЗРП. Уровень CD95L+ и CD5-CD95L+ В-лимфоцитов был достоверно повышенным по сравнению с контрольными значениями у женщин с реализованной у детей ЗРП за счет существенного повышения исследуемых параметров группы с умеренной и тяжелой степенью патологии. В группе женщин, родивших детей с ЗРП, достоверно снижался уровень как В2, так и В1-лимфоцитов, вступивших в апоптоз. Содержание Fas- и FasL-позитивных лимфоцитов в популяции периферических В1-клеток не имело существенных изменений во всех исследуемых группах женщин с ЗРП.
Полученные данные свидетельствуют, что при беременности у женщин, родивших детей с ЗРП, отмечалось выраженное нарушение апоптоза периферических В2 и В1-лимфоцитов, что могло вести к накоплению активированных клонов В-клеток. Основные изменения параметров апоптоза по Fas-FasL-зависимому пути были характерны для CD20+CD5- субпопуляции периферических В-клеток. При этом выраженность изменений положительно коррелировала со степенью тяжести патологии новорожденного и была максимальной в группе пациенток, родивших детей с умеренной или тяжелой степенью ЗРП. В случае рождения детей с легкой степенью ЗРП было характерно снижение готовности В-клеток к апоптозу, что определялось по снижению уровня CD95+ В-лимфоцитов за счет выраженного снижения уровня CD95+ В2-клеток. При рождении детей с умеренной или тяжелой ЗРП угнетение апоптоза у беременных матерей было обусловлено как снижением готовности к апоптозу, так и усилением антиапопототических свойств В-лимфоцитов. Это выражалось не только снижением уровня CD95+ и CD95+ В2-лимфоцитов, но и существенным повышением содержания CD95L+ В-клеток за счет повышенного уровня CD95L+ B2-лимфоцитов. Можно предположить, что отмеченное нами ранее накопление «непереключенных» В-лимфоцитов памяти в периферической крови женщин с ЗРП могло быть связано с нарушением процессов их апоптоза. Нарушение апоптоза В1-лимфоцитов при ЗРП, по-видимому, не было связано с реализацией Fas-FasL зависимого пути, а определялось другими механизмами. У беременных женщин с ЗРП, родивших детей без нее, процессы иммунного апоптоза периферических В-клеток существенно не менялись.
Суммируя полученные данные, можно сделать вывод, что при беременности, осложненной ЗРП, отмечается существенное нарушение параметров дифференцировки, функциональной активности и апоптоза периферических В-лимфоцитов. Причем выраженность изменений в организме матери связана с реализацией патологии и ее тяжестью у новорожденного. У всех женщин с ЗРП общее содержание В-клеток не менялось в периферической крови, но отмечалось изменение соотношения В-клеточных фракций. Характер дифференцировки был смещен в сторону высокоэффекторных В-лимфоцитов: плазматических клеток и «непереключенных» В-клеток памяти. При этом выявленные нарушения были обусловлены преимущественно изменениями в субпопуляции В2-лимфоцитов. По-видимому, вектор дифференцировки периферических В-клеток определялся активирующим влиянием IL-10, усилением BAFF-BAFFR-зависимого пути созревания, повышением аутокринного регулирующего влияния IL-4 и IL-6 на В-лимфоциты, снижением супрессорной роли Breg на фоне нарушенных процессов иммунного апоптоза. Отражением усиления функциональной активности В-лимфоцитов у женщин с ЗРП явилось накопление в сыворотке крови циркулирующих иммунных комплексов.
Установлено, что при рождении детей с нормальными массо-ростовыми показателями у матерей патогенез ЗРП реализуется не полностью и связан только с накоплением плазматических клеток в периферической крови на фоне стимулирующего действия IL-10 и недостаточной супрессии со стороны Breg.
Таким образом, ЗРП при беременности характеризуется усилением дифференцировки и функциональной активности периферических В-лимфоцитов, нарушением их апоптоза. Для беременных женщин, родивших детей с наиболее тяжелыми проявлениями ЗРП, характерна максимальная выраженность нарушений со стороны В-звена иммунитета. Вероятно, наибольшая роль в патогенезе ЗРП принадлежит В2-субпопуляции клеток, поскольку отмеченные нами изменения касались преимущественно данной фракции клеток.