Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Анализ субпопуляционного состава В-лимфоцитов периферической крови больных хроническим вирусным гепатитом С 47
1.1. Субпопуляционный состав В-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС на основании экспрессии CD5 и CD27 47
1.2. Субпопуляционный состав В-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС на основании экспрессии CD38 и CD27 50
1.3. Иммунопатогенетические взаимосвязи содержания субпопуляций В лимфоцитов периферической крови больных ХВГС с некоторыми клинико лабораторными показателями 54
Глава 2. Анализ субпопуляционного состава Т-хелперных лимфоцитов периферической крови больных ХВГС
2.1. Субпопуляции Т-хелперных клеток памяти периферической крови больных ХВГС 59
2.2. Субпопуляции Т-хелперных клеток памяти периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CD27 и CD28 61
2.3. Субпопуляции Т-хелперных клеток памяти периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CXCR3 и CCR6
2.4. Популяции активированных Т-хелперных клеток периферической крови больных ХВГС 69
2.5. Субпопуляции Т-регуляторных клеток периферической крови больных ХВГС 75
2.6. Иммунопатогенетические взаимосвязи содержания субпопуляций Т хелперных лимфоцитов периферической крови больных ХВГС с некоторыми клинико-лабораторными показателями 77
Глава 3. Анализ субпопуляционного состава Т-цитотоксических лимфоцитов периферической крови больных хроническим вирусным гепатитом С .82
3.1. Субпопуляции Т-цитотоксических клеток памяти периферической крови больных ХВГС 82
3.2. Субпопуляции Т-цитотоксических клеток памяти периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CD27 и CD28 85
3.3. Субпопуляции Т-цитотоксических клеток памяти периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CXCR3 и CCR6 88
3.4. Популяции активированных Т-цитотоксических клеток периферической крови больных ХВГС 91
3.5. Иммунопатогенетические взаимосвязи содержания субпопуляций Т-цитотоксических лимфоцитов периферической крови больных ХВГС с некоторыми клинико-лабораторными показателями .96
Глава 4. Анализ субпопуляционного состава NK- и NKT-лимфоцитов периферической крови больных хроническим вирусным гепатитом С 100
4.1. Субпопуляции NK-лимфоцитов и NKT-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС 100
4.2. Субпопуляции NK-лимфоцитов и NKT-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CD38 и CD8 .101
4.3. Субпопуляции NK-лимфоцитов и NKT-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CXCR3 и CCR6 . 102
4.4. Иммунопатогенетические взаимосвязи субпопуляций NK-лимфоцитов и
NKT-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС с некоторыми клинико лабораторными показателями 105
Заключение 106
Выводы .118
Практические рекомендации .119
Перспективы дальнейшей разработки темы 120
Список сокращений и условных обозначений .121
Список литературы
- Субпопуляционный состав В-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС на основании экспрессии CD38 и CD27
- Субпопуляции Т-хелперных клеток памяти периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CXCR3 и CCR6
- Субпопуляции Т-цитотоксических клеток памяти периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CD27 и CD28
- Субпопуляции NK-лимфоцитов и NKT-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CXCR3 и CCR6 .
Субпопуляционный состав В-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС на основании экспрессии CD38 и CD27
При помощи гистограммы распределения клеток по параметрам малоуглового (относительный размер клеток) и бокового (структура клеток) светорассеяния выделяли область лимфоцитов. Для корректного исключения из зоны анализа клеток, которые не соответствовали по размерам и структуре неповрежденным лимфоцитам (слипшиеся и разрушенные клетки), вводили двухпараметрическую гистограмму распределения клеток по малоугловому светорассеянию, где по одной из осей анализировали интегральный сигнал, а по другой – пиковый сигнал данного параметра. Для определения популяций В-лимфоцитов и Т-регуляторных клеток область лимфоцитов выделяли при помощи гистограммы распределения клеток по параметру бокового светорассеяния и экспрессии молекулы CD45. Для каждого из образцов анализировали не менее 50000 лимфоцитов, отвечающих указанным выше условиям. Полученные результаты выражали в процентах и абсолютных значениях. Абсолютные значения были получены в одноплатформенной системе с помощью реагента FlowCount (Beckman Coulter, США) или двуплатформенной системе с использованием гематологического анализатора Pentra 60 (Horiba ABX, Франция).
Стратегия определения субпопуляций Т-цитотоксических лимфоцитов различных стадий дифференцировки периферической крови
При помощи «иммунологического гейтирования» (однопараметрическая гистограмма распределения клеток по уровню экспрессии CD3 – линейного маркера всех Т-лимфоцитов) отделяли Т-клетки от остальных популяций лимфоцитов. Для выявления цитотоксических Т-клеток с фенотипом CD3+CD4– CD8+ использовали гистограмму распределения Т-клеток по уровню экспрессии CD4 и CD8. Для последующего анализа использовали клетки с фенотипом CD3+CD4–CD8+. Далее при помощи гистограммы распределений цитотоксических Т-клеток по уровню экспрессии CD45RA и CD62L определяли содержание «наивных» клеток (CD45RA+CD62L+), клеток центральной (CD45RA–CD62L+) и эффекторной (CD45RA–CD62L–) памяти, а также «терминально дифференцированных» эффекторных клеток с фенотипом CD45RA+CD62L–. Для анализа основных популяций наивных цитотоксических и цитотоксических Т-клеток памяти вводили в исследование гистограммы распределения клеток по уровню экспрессии CD27 и CD28, на которых отображались лимфоциты соответствующих популяций (Рисунок 1). Рисунок 1. Стратегия определения субпопуляций Т-цитотоксических лимфоцитов (CD3+CD4–CD8+) периферической крови различных стадий дифференцировки при помощи антител против CD45RA, CD62L, CD27 и CD28
Гистограмма 1.1 (выделение популяции лимфоцитов): по оси абсцисс – боковое светорассеяние, характеризующее структуру клеток, по оси ординат – малоугловое светорассеяние, характеризующее размер клеток; область «лимфоциты» – клетки, соответствующие по параметрам светорассеяния, популяции лимфоцитов периферической крови. Гистограмма 1.2 (удаление слипшихся лимфоцитов из зоны анализа): по оси абсцисс – интегральный сигнал по малоугловому светорассеянию, по оси ординат – пиковый сигнал по малоугловому светорассеянию; область «одиночные клетки» – лимфоциты без примеси клеточных агрегатов. Гистограмма 1.3 (выделение популяции Т-лимфоцитов): по оси абсцисс – интенсивность флуоресценции антител против CD3, по оси ординат – чисто клеток; в области «Т-лимфоциты» находятся Т-клетки периферической крови, экспрессирующие CD3. Гистограмма 1.4 (выделение цитотоксических Т-клеток): по оси ординат и по оси абсцисс– интенсивность флуоресценции антител против CD4 и CD8, соответственно; в области «CD3+CD4–CD8+» располагаются цитотоксические Т-лимфоциты. Гистограмма 1.5 (выделение основных популяций цитотоксических Т-клеток): по оси абсцисс и по оси ординат – интенсивность флуоресценции антител против CD62L и CD45RA, соответственно. Гистограммы 1.6-1.9 (оценка уровня экспрессии CD27 и CD28 цитотоксическими Т-клетками разного уровня дифференцировки): по оси абсцисс и по оси ординат – уровень экспрессии CD27 и CD28 «наивными», клетками центральной и эффекторной памяти, а также «терминально-дифференцированными» эффекторными цитотоксическими Т-лимфоцитами, соответственно. Над каждой из гистограмм в квадратных скобках указаны популяции лимфоцитов, отображаемые на гистограммах.
Стратегия определения субпопуляций Т-хелперных лимфоцитов различных стадий дифференцировки периферической крови
При помощи «иммунологического гейтирования» (однопараметрическая гистограмма распределения клеток по уровню экспрессии CD3 – линейного маркера всех Т-лимфоцитов) отделяли Т-клетки от остальных популяций лимфоцитов. Для выявления Т-хелперных клеток с фенотипом CD3+CD4+CD8– использовали гистограмму распределения Т-клеток по уровню экспрессии CD4 и CD8. Для последующего анализа использовали клетки с фенотипом CD3+CD4+CD8–. Далее при помощи гистограммы распределений Т- хелперных клеток по уровню экспрессии молекул CD45RA и CD62L определяли содержание «наивных» клеток (CD45RA+CD62L+), клеток центральной (CD45RA-CD62L+) и эффекторной (CD45RA–CD62L–) памяти, а также «терминально дифференцированных» эффекторных клеток (CD45RA+CD62L–). Для анализа основных популяций наивных Т-хелперов и различных Т-хелперов памяти вводили в исследование гистограммы распределения клеток по уровню экспрессии CD27 и CD28, на которых отображались лимфоциты соответствующих популяций (аналогично Рисунку 1). Стратегия определения активированных Т-хелперных лимфоцитов периферической крови Для выявления хелперных Т-клеток с фенотипом CD3+CD4+ использовали гистограмму распределения Т-клеток по уровню экспрессии CD3 и CD4. На Т хелперах было определено содержание Т-хелперов, экспрессирующих активационных маркеры CD38, HLA-DR, CXCR3 и CCR6. При помощи гистограммы распределений хелперных Т-клеток по уровню экспрессии CD38 и HLA-DR определяли содержание субпопуляций CD38+HLA-DR-, CD38+HLA-DR+, CD38-HLA-DR-, CD38-HLA-DR+.
При помощи гистограммы распределений хелперных Т-клеток по уровню экспрессии CXCR3 и CCR6 определяли содержание субпопуляций CXCR3+ СCR6–, CXCR3+CCR6+, CXCR3–CCR6–, CXCR3–CCR6+ (Рисунок 2). При помощи гистограммы распределений хелперных Т-клеток по уровню экспрессии CD45RA и CD62L определяли содержание «наивных» клеток (CD45RA+CD62L+), клеток центральной (CD45RA–CD62L+) и эффекторной (CD45RA–CD62L–) памяти, а также «терминально-дифференцированных» эффекторных клеток с фенотипом CD45RA+CD62L–; далее для анализа популяций наивных Т-хелперов и Т-хелперов памяти вводили в исследование гистограммы распределения клеток по уровню экспрессии CXCR3 и CCR6, на которых отображались лимфоциты соответствующих популяций (Рисунок 3).
Субпопуляции Т-хелперных клеток памяти периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CXCR3 и CCR6
На основании экспрессии молекул CD62L и CD45RA определили содержание наивных СD4+ Т-клеток (N; CD62L+CD45RA+) и популяций СD4+ Т-клеток памяти: центральных (CM; CD62L+CD45RA–), эффекторных (EM; CD62L– CD45RA–) и «терминально-дифференцированных» эффекторных Т-клеток (TEMRA; CD62L–CD45RA+).
Количество наивных Т-хелперов было сниженным (p=0,033) у группы больных ХВГС по сравнению с группой контроля, и составило соответственно 220,7 (145,6; 302,7) и 292,1 (201,4; 380,7) 10/л; процент субпопуляции наивных клеток среди СD4+ Т-клеток также был сниженным (p 0,0001) – 25,74 (17,65; 31,54) и 38,76 (28,56; 48,73), соответственно. У больных ХВГС наблюдалось перераспределение популяций CD4+ Т-клеток в сторону увеличения эффекторных и «терминально-дифференцированных» эффекторных Т-клеток памяти. Количество эффекторных Т-хелперов составило 298,4 (227,3; 420,2) 10/л у больных ХВГС и 158,2 (125,7; 238,2) 10/л у группы контроля (p 0,0001); в процентах относительно CD4+ Т-клеток – 34,08 (26,95; 41,83) и 22,1 (17,58; 26,81) (p 0,0001). Количество «терминально-дифференцированных» эффекторных Т-хелперов составило 30,12 (18,15; 79,69) 10/л у больных ХВГС и 12,39 (7,03; 20,44) 10/л у группы контроля (p=0,0002); в процентах относительно CD4+ Т-клеток – 3,39 (1,89; 9,55) и 1,52 (0,91; 2,36) (p=0,0004). Было достоверно сниженным (р=0,026) относительное количество центральных CD4+ Т-клеток памяти у группы больных ХВГС - 32,38 (26,8; 39,34) и 38,43 (31,73; 41,14) у группы контроля; абсолютные значения составили 292,2 (203,3; 407,3) и 295,1 (231,7; 385,5) 10б/л, соответственно. Распределение Т-хелперов по наивным, центральным, эффекторным, «терминально-дифференцированным» эффекторным клеткам представлено на Рисунке 8.
Большинство работ, касающихся Т-клеток памяти, посвящено исследованию цитотоксических Т-лимфоцитов, хотя Т-хелперные клетки памяти безусловно требуют пристального изучения. В нашей работе наблюдалось значительное перераспределение субпопуляций Т-хелперов в сторону увеличения эффекторных субпопуляций Т-хелперов с уменьшением наивной субпопуляции и центральных СD4+ Т-клеток памяти. Аналогичная картина наблюдалась в исследовании Shen et al. при использовании в качестве маркеров клеток памяти молекул CD27 и CD45RA за исключением повышенного содержания центральных Т-хелперных клеток памяти [93]. Обнаружение специфических Т-хелперов методологически затруднено при ХВГС [14], они определялись преимущественно в острую фазу болезни и у выздоровевших, у которых данные клетки имели фенотип CCR7+CD45RA–CD27+ [28], характерный для клеток центральной памяти, количество которых было сниженным в нашем исследовании. Данное обстоятельство может объясняться использованием в нашей работе маркера CD62L, имеющего отличия в экспрессии по сравнению с молекулами CD27 и ССR7 [85].
Среди популяций Т-хелперов различного уровня дифференцировки (N, СM, EM, TEMRA) было определено содержание клеток, экспрессирующих костимулирующие молекулы CD27 и CD28 (Таблица 6). Наивные СD4+ Т-клетки экспрессировали обе костимулирующие молекулы в обеих исследованных группах. Было определено повышенное количество клеток с фенотипами CD28+CD27– EM CD4+CD3+ и CD28+CD27+ EM CD4+CD3+ у больных ХВГС. Среди центральных CD4+ Т-клеток памяти было определено повышенное количество субпопуляции фенотипа CD28+CD27– и сниженное субпопуляции фенотипа CD28+CD27+. Содержание клеток фенотипа CD28+CD27+ TEMRA CD4+CD3+ было повышенным у больных ХВГС по сравнению с группой контроля. Имело место также перераспределение среди субпопуляций центральных Т-хелперных клеток памяти с уменьшенным процентом фракции CD28+CD27+ клеток и повышенным процентом CD28+CD27– клеток. Таблица 6. Субпопуляционный состав Т-хелперных клеток памяти периферической крови больных ХВГС и практически здоровых доноров на основании экспрессии CD27 и CD28 [Me (Q25 – Q75)]
Примечание: % – содержание клеток относительно популяции Т-хелперов; 10/л – абсолютное количество клеток. Процентное содержание клеток субпопуляций CD28+CD27–, CD28+CD27+, CD28–CD27– и CD28–CD27+ определяли относительно популяций наивных Т-хелперных клеток (N), центральных (CM), эффекторных (EM) и «терминально-дифференцированных» эффекторных (TEMRA) T-хелперных клеток памяти. Согласно исследованию Okada et al. Тh1-эффекторные клетки памяти включены преимущественно в субпопуляции эффекторных Т-хелперных клеток памяти с фенотипами CD28+CD27–CD45RA–CCR7– и CD28+CD27+CD45RA– CCR7–, а Тh2-эффекторные клетки памяти включены в субпопуляцию CD28+CD27–CD45RA–CCR7– Т-хелперов, Th1- и Тh2-эффекторные клетки находятся в субпопуляциях CD28–CD27–CD45RA–CCR7– и TEMRA Т-хелперов [70]. Таким образом, так как не происходило количественных изменений субпопуляции фенотипа CD28–CD27– эффекторных и «терминально дифференцированных» эффекторных Т-хелперов, можно говорить об отсутствии значительного вклада Th1- и Th2-эффекторов в перераспределение субпопуляций Т-хелперных клеток памяти, но вероятно участие в этом Th1- и Th2-эффекторов памяти.
Субпопуляции Т-цитотоксических клеток памяти периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CD27 и CD28
Не было выявлено достоверно значимых различий между группой больных ХВГС и группой контроля для субпопуляций Т-цитотоксических лимфоцитов, экспрессирующих активационные маркеры CD38 и HLA-DR, за исключением повышенного у больных ХВГС количества субпопуляции CD38+HLA-DR+ Т-цитотоксических лимфоцитов – комбинации в последнее время широко применяемой в качестве характеристики ативации клеток у Т-цитотоксических лимфоцитов.
Среди популяций Т-цитотоксических лимфоцитов было определено содержание клеток, экспрессирующих молекулы CXCR3 и HLA-DR (Таблица 24). Не было выявлено достоверно значимых различий между группой больных ХВГС и группой контроля для субпопуляций Т-цитотоксических лимфоцитов, экспрессирующих молекулы CXCR3 и CD38.
Корреляционной связь между процентом CXCR3+ клеток и CD38+ клеток от Т-цитотоксических лимфоцитов у больных ХВГС (r=-0,338; p=0,011) не была столь же сильной как у Т-хелперов.
Иммунопатогенетические взаимосвязи субпопуляций цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС с некоторыми клинико-лабораторными показателями Установлена корреляционная связь между уровнем вирусной нагрузки и процентом HLA-DR+ клеток от цитотоксических Т-лимфоцитов (r=0,394, p=0,034). Кроме того, было определено, что процент CD38+HLA-DR+ клеток от цитотоксических Т-лимфоцитов коррелирует с уровнем вирусной нагрузки у больных ХВГС (r=0,408, p=0,028), данное обстоятельство было справедливо и для процента CD38–HLA-DR– клеток от цитотоксических Т-лимфоцитов (r=-0,38, p=0,042), а также процента CXCR3+CCR6– клеток от цитотоксических наивных Т-лимфоцитов (r=0,441, p=0,017). Таблица 24. Субпопуляционный состав Т-цитотоксических лимфоцитов периферической крови больных ХВГС и практически здоровых доноров на основании экспрессии CD38 и CXCR3 [Me (Q25 – Q75)]
Примечание: % – содержание клеток относительно популяции Т-цитотоксических лимфоцитов;10/л – абсолютное количество клеток. При сравнении групп больных ХВГС с высокой (более 400000 МЕ/мл) и низкой (менее 400000 МЕ/мл) вирусной нагрузкой было определено повышенное относительное количество субпопуляции HLA-DR+CD38+ клеток от цитотоксических Т-лимфоцитов (p=0,028) – 10,66 (8,5; 17,64) % и 6,48 (4,09; 9,42) %. При исследовании популяций клеток памяти у группы больных ХВГС с высокой вирусной нагрузкой установлено повышенное относительное количество CXCR3+CCR6– клеток от наивных цитотоксических Т-лимфоцитов (p=0,028) – 62,37 (51,03; 67,88) % и 48,86 (33,11; 57,16) %, и сниженное относительное количество CXCR3–CCR6+ клеток от наивных цитотоксических Т-лимфоцитов (p=0,042) – 1,27 (0,86; 2,56) % и 3,25 (1,44; 5,38) %. Кроме того, у группы больных ХВГС с высокой вирусной нагрузкой наблюдалось повышенное относительное количество CXCR3–CCR6– клеток от эффекторных Т-цитотоксических клеток памяти (p=0,014) – 19,68 (11,63; 27,43) % и 10,51 (8,26; 12,74) %.
У больных хроническим вирусным гепатитом С активность АЛТ обратно коррелировала с процентным содержанием CXCR3+ клеток (r=-0,438, p=0,041) и CXCR3+CD38– клеток среди цитотоксических Т-лимфоцитов (r=0,541, p=0,009), а активность АСТ прямо коррелировала с процентным содержанием CD38+ клеток среди цитотоксических Т-лимфоцитов (r=0,481, p=0,027) и обратно коррелировала с процентным содержанием CXCR3+ клеток (r=-0,478, p=0,028) и CXCR3+CD38– клеток среди цитотоксических Т-лимфоцитов (r=-0,624, p=0,003).
При сравнении содержания субпопуляций цитотоксических Т-лимфоцитов у группы больных ХВГС с 1 генотипом вируса и группы с не-1 генотипом не было выявлено значимых различий.
У группы больных ХВГС F0-F1 по сравнению с группой F2-F4 наблюдалось повышенное относительное количество CD27+CD28+ клеток от TEMRA CD8+ Т-леток (p=0,049) – 26,61 (14,18; 39,36) % и 14,16 (5,29; 21,27) %, CD27+CD28– клеток от TEMRA CD8+ Т-клеток (p=0,022) – 13,61 (10,01; 18,08) % и 5,67 (4,08; 6,82) %, и сниженное относительное количество CD27–CD28– клеток от TEMRA CD8+ Т-клеток (p=0,018) – 50,48 (35,59; 70,41) % и 76,66 (57,0; 88,2) %. Относительное количество CXCR3–CCR6– клеток от цитотоксических Т-клеток было сниженным у группы F0-F1 (p=0,026) – 27,99 (18,2; 33,99) и 37,98 (26,93; 44,85). При исследовании содержания субпопуляций цитотоксических Т-клеток памяти у группы F0-F1 по сравнению с группой F2-F4 было определено повышенное относительное количество CXCR3+ клеток от центральных клеток памяти (p=0,009) – 86,92 (84,53; 90,36) % и 75,63 (73,51; 86,49) %, CXCR3+ клеток от эффекторных клеток памяти (p=0,042) – 84,65 (73,79; 88,35) % и 68,27 (51,89; 79,22) %, а также сниженное относительное количество CXCR3–CCR6– клеток от центральных клеток памяти (p=0,008) – 11,19 (7,92; 13,51) % и 20,49 (12,75; 23,07)%.
Таким образом, для Т-цитотоксических лимфоцитов наблюдается зависимость уровня экспрессии молекул CD38, HLA-DR и CXCR3 от уровня вирусной нагрузки и уровня аминотрансфераз при ХВГС. У группы больных ХВГС F0-F1 по сравнению с группой F2-F4 было определено повышенное содержание CXCR3+ клеток и сниженное содержание CXCR3–CCR6– клеток от центральных клеток памяти.
Субпопуляции NK-лимфоцитов и NKT-лимфоцитов периферической крови больных ХВГС, экспрессирующие CXCR3 и CCR6 .
У подгруппы больных хроническим вирусным гепатитом С со степенями фиброза F0 и F1 наблюдалось повышенное содержание субпопуляции В клеток памяти (p=0,015) и сниженное В2-клеток (p=0,012) по сравнению с контрольной группой, но сниженное содержание субпопуляции В клеток памяти (p=0,015) и повышенное В2-клеток (p=0,004) по сравнению с подгруппой больных со степенью фиброза F3 и циррозом печени. Содержание субпопуляций CXCR3+B1-и CXCR3+В2-клеток у группы больных со степенями фиброза F0 и F1 было сниженным по сравнению с группой со степенью фиброза F3 и циррозом печени (p=0,05; p=0,027). Наблюдалась тенденция к увеличению количества CXCR3+B1-и CXCR3+В2-клеток по мере роста степени фиброза.
У больных ХВГС общее содержание Т-хелперов (CD3+CD4+CD8–CD45+) было достоверно повышенным (p=0,0152) по сравнению с группой контроля. Было выявлено перераспределение субпопуляций лимфоцитов от наивных Т-хелперов и центральных Т-хелперных клеток памяти в сторону повышения содержания эффекторных и «терминально-дифференцированных» эффекторных клеток памяти. При дальнейшей дифференцировке популяций Т-хелперных клеток памяти с использованием молекул CD27 и CD28 было определено повышенное содержание субпопуляций CD27+CD28+ и CD27–CD28+ эффекторных и «терминально-дифференцированных» эффекторных клеток памяти, а при анализе экспрессии CXCR3 и CCR6 было выявлено также перераспределение среди TEMRA-клеток в сторону повышенного содержания субпопуляции с фенотипом CXCR3–CCR6–, а среди EM-клеток – в сторону повышенного содержания прежде всего CXCR3+ субпопуляций. У больных ХВГС определен повышенный процент субпопуляций CXCR3+ (p 0,0001), CCR6+ Т-хелперов (p=0,0179) и сниженный процент CD38+ Т-хелперов (p=0,0208). У группы больных ХВГС по сравнению с группой контроля было определено повышенное содержание субпопуляции CD62L– Т-регуляторных клеток (p 0,0001) и сниженный процент субпопуляции CD62L+ Т-регуляторных клеток (p=0,0004) относительно Т-хелперов.
У группы больных хроническим вирусным гепатитом С установлены прямые корреляционные связи между уровнем вирусной нагрузки и относительным содержанием HLA-DR+ клеток среди Т-хелперов (r=0,444; p=0,016), CXCR3+ клеток среди TEMRA-хелперов (r=0,406, p=0,029) и CCR6+ клеток среди TEMRA-хелперов (r=0,386, p=0,039). Обратные корреляционные связи определены между уровнем вирусной нагрузки и относительным содержанием CD38+ клеток среди Т-хелперов (r=-0,417; p=0,024), CXCR3+HLA-DR– клеток среди Т-хелперов (r=-0,482; p=0,008), CXCR3–CD38+ клеток среди Т-хелперов (r=-0,439; p=0,017), CXCR3–CCR6– клеток среди Т-хелперов (r=-0,356, p=0,005), CXCR3–CCR6– клеток среди TEMRA-хелперов (r=-0,414, p=0,026) и абсолютным количеством CXCR3–CCR6– Т-хелперов (r=-0,419, p=0,024).
У группы больных хроническим вирусным гепатитом С с F0-F1 было определено повышенное содержание субпопуляции CXCR3+CCR6– клеток среди TЕМ-хелперов по сравнению с F2-F4 (p=0,036), CXCR3–CCR6– Т-хелперов по сравнению с группой F3-F4 (p=0,049), а также CXCR3–CCR6+ Т-хелперов по сравнению с группой F2 (p=0,021).
Была обнаружена сильная отрицательная корреляционная связь между процентом CXCR3+ клеток среди Т-хелперов и CD38+ клеток среди Т-хелперных лимфоцитов как у больных хроническим вирусным гепатитом С (r=-0,747; p 0,0001), так и у группы контроля (r=-0,679; p 0,0001), что предполагает связь экспрессии молекул CD38 и CXCR3 между собой вне зависимости от наличия хронического вирусного гепатита С.
Содержание Т-цитотоксических лимфоцитов (CD3+CD4–CD8+CD45+) было достоверно увеличенным (p=0,0237) у больных ХВГС по сравнению с группой контроля. Было выявлено перераспределение субпопуляций лимфоцитов от наивных Т-цитотоксических лимфоцитов в сторону «терминально дифференцированных» эффекторных клеток памяти. При дальнейшей дифференцировке популяций Т-цитотоксических клеток памяти с использованием молекул CD27 и CD28, как и для Т-хелперных лимфоцитов, было выявлено повышенное содержание субпопуляций CD27+CD28+ и CD27–CD28+ эффекторных и «терминально-дифференцированных» эффекторных клеток памяти, которые обладают менее выраженными цитолитическими свойствами по сравнению с субпопуляцией CD27–CD28–. При использовании молекул CXCR3 и CCR6 не было выявлено значимых изменений в субпопуляционном составе, за исключением повышенного содержания популяций, экспрессирующих CXCR3 – CXCR3+EM (p=0,01) и CXCR3+TEMRA (p=0,0208). При сочетанном анализе различных активационных маркеров у группы больных ХВГС наиболее значимой оказалась только комбинация CD38 и HLA-DR, что еще раз подтверждает обоснованность применения в клинических исследованиях данных маркеров при анализе Т-цитотоксических клеток.
У группы больных хроническим вирусным гепатитом С установлены прямые корреляционные связи между уровнем вирусной нагрузки и относительным содержанием HLA-DR+ клеток среди цитотоксических Т-лимфоцитов (r=0,394, p=0,034), CD38+HLA-DR+ клеток среди цитотоксических Т-лимфоцитов (r=0,399, p=0,032) и CXCR3+CCR6– клеток среди цитотоксических наивных Т-лимфоцитов (r=0,441, p=0,017). Обратная корреляционная связь определена между уровнем вирусной нагрузки и относительным содержанием CD38–HLA-DR– клеток среди цитотоксических Т-лимфоцитов (r=-0,38, p=0,042).
У больных хроническим вирусным гепатитом С активность АЛТ обратно коррелировала с процентным содержанием CXCR3+ клеток (r=-0,438, p=0,041) и CXCR3+CD38– клеток среди цитотоксических Т-лимфоцитов (r=0,541, p=0,009), а активность АСТ прямо коррелировала с процентным содержанием CD38+ клеток среди цитотоксических Т-лимфоцитов (r=0,481, p=0,027) и обратно коррелировала с процентным содержанием CXCR3+ клеток (r=-0,478, p=0,028) и CXCR3+CD38– клеток среди цитотоксических Т-лимфоцитов (r=-0,624, p=0,003).