Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Современные представления роли в лимфоцитов в патогенезе ревматоидного артрита (обзор литературы) 13
Глава 2 Материалы и методы исследования 48
2.1. Дизайн исследования 48
2.2. Лабораторные методы исследования 53
2.3. Статистические методы исследования 59
Глава 3 Особенности В-лимфоцитов при серопозитивном варианте течения суставной формы ревматоидного артрита 61
3.1. Особенности иммунного статуса у больных с серопозитивным вариантом суставной формы ревматоидного артрита 61
3.2. Характеристика клеточного и гуморального звена иммунной системы у пациентов с серопозитивным вариантом суставной формы ревматоидного артрита при длительности заболевания до 5 лет 70
3.3. Характеристика клеточного и гуморального звена иммунной системы при длительности заболевания более 5 лет у пациентов с серопозитивным вариантом суставной формы ревматоидного артрита 79
3.4. Сопоставительный анализ показателей клеточного и гуморального звена иммунной системы в зависимости от длительности течения серопозитивного ревматоидного артрита суставной формы 88
3.5. Характеристика В-звена иммунной системы при средней степени активности серопозитивного ревматоидного артрита суставной формы 97
3.6. Особенности иммунного статуса при высокой степени активности серопозитивного варианта суставной формы ревматоидного артрита 105
3.7. Сопоставительный анализ показателей клеточного и гуморального звена иммунной системы при серопозитивном варианте ревматоидного артрита суставной формы в зависимости от степени активности воспалительного процесса 115
Глава 4 Особенности В-лимфоцитов при серонегативном варианте течения суставной формы ревматоидного артрита 124
4.1. Особенности иммунного статуса у больных серонегативным ревматоидным артритом суставной формы 124
4.2. Характеристика клеточного и гуморального звена иммунной системы у пациентов с серонегативным вариантом суставной формы ревматоидного артрита при длительности заболевания до 5 лет 133
4.3. Характеристика клеточного и гуморального звена иммунной системы у пациентов с серонегативным вариантом суставной формы ревматоидного артрита при длительности заболевания более 5 лет 142
4.4. Сопоставительный анализ показателей иммунной системы и фенотипов В1 и В2-лимфоцитов при серонегативном варианте суставной формы ревматоидного артрита в зависимости от длительности течения 151
4.5. Характеристика В-звена иммунной системы при средней степени активности воспалительного процесса серонегативного варианта суставной формы ревматоидного артрита 159
4.6. Характеристика В-звена иммунной системы при высокой степени активности воспалительного процесса серонегативного варианта суставной формы ревматоидного артрита 167
4.7. Сопоставительный анализ показателей иммунной системы и фенотипов В1 и В2 - лимфоцитов при серонегативном варианте суставной формы ревматоидного артрита в зависимости от степени активности воспалительного процесса 175
Глава 5 Обсуждение полученных результатов 185
Заключение 222
Выводы 225
Практические рекомендации 226
Список сокращений 227
Список литературы 228
- Современные представления роли в лимфоцитов в патогенезе ревматоидного артрита (обзор литературы)
- Особенности иммунного статуса у больных с серопозитивным вариантом суставной формы ревматоидного артрита
- Особенности иммунного статуса у больных серонегативным ревматоидным артритом суставной формы
- Сопоставительный анализ показателей иммунной системы и фенотипов В1 и В2 - лимфоцитов при серонегативном варианте суставной формы ревматоидного артрита в зависимости от степени активности воспалительного процесса
Современные представления роли в лимфоцитов в патогенезе ревматоидного артрита (обзор литературы)
Одной из основных характеристик значимости той или иной болезни или группы заболеваний с точки зрения государственных приоритетов является их распространенность в популяции (Фоломеева О.М., 2010). Накопление хронических больных в обществе снижает его трудовой, экономический и психологический потенциал, существенно повышает общественные и индивидуальные расходы на здравоохранение (Насонов Е.Л., 2012). Ревматические заболевания (РЗ) по уровню своего негативного влияния на современное общество занимают одно из первых мест (Фоломеева О.М., 2010).
Среди аутоиммунных ревматических заболеваний (АРЗ) особое место занимает ревматоидный артрит (РА). Его распространенность среди взрослого населения составляет 0,5–1,5%, а экономические потери от данного заболевания сопоставимы с заболеваниями сердечно - сосудистой системы (Насонов Е.Л. и др., 2015). Социальная значимость РА во многом определяется его отрицательным влиянием на функциональные возможности и трудоспособность пациентов. Для данных больных характерно прогрессирующее поражение суставов, что приводит к выраженным ограничением способностей к выполнению профессиональной и непрофессиональной деятельности, а в тяжелых случаях и не возможности к самообслуживанию. Трудно оценить ущерб, наносимый этим заболеванием обществу за счет ранней инвалидизации пациентов, которая при отсутствии своевременно начатой активной терапии, может наступать в первые 5 лет от дебюта заболевания (Фоломеева О.М., 2010). РА – аутоиммунное ревматическое заболевание, характеризующийся хроническим эрозивным артритом и системным воспалительным поражением внутренних органов (Насонов Е.Л. и др.,2008; Супоницкая Е.В. и др., 2013).
По современным представлениям, в основе патогенеза РА лежит сложное сочетание генетически обусловленных и приобретенных дефектов иммунорегуляторных механизмов, ограничивающих патологическую активацию иммунной системы в ответ на потенциально патогенные факторы внешней среды, а частности курение, нарушение микробиоты кишечника, инфекции и т. д. (Насонов Е.Л. и др., 2015). В соответствии с последними литературными данными сочетание воздействие неблагоприятных факторов внешней среды и генетической предрасположенности к РА может приводить к активации иммунной системы и реализации самого заболевания. К таким факторам относится дисбиоз кишечной микробиоты, который, как полагают, может приводить к локальному воспалению, потере барьерной функции кишечника и транслокации кишечной бактериальной флоры в кровяное русло. В недавних исследованиях было показано, что в стуле пациентов с ранним артритом отмечается нарастание содержания некоторых бактерий, в частности Prevotella corpi (Scher J.U. et al., 2016; Wu X. et al., 2016). Выявлена подгруппа пациентов с ранним РА, у которых выявлена антитела (IgG- или IgA-изотипов) к пептиду P. corpi, «презентируемому» HLADR, обнаружение которых коррелирует с преобладанием Th17-типа иммунного ответа над Th1 типом (Scher J.U. et al., 2016; Wu X. et al., 2016). При этом IgA опосредованный ответ Th17- типа ассоциировался с обнаружением антицитруллинированных белков (АЦБ) (Pianta A. et al., 2016). В других исследованиях, проведенных в рамках изучения набора генов всех микроорганизмов, находящихся в кишечнике при РА, отмечено преобладание образцов Lactobacillus над Haemophilus (Zhang X. et al., 2015), преобладание последних ассоциировалось с отсутствием АЦБ, что свидетельствует о «протективной» роли этих кишечных микроорганизмов в развитии РА. Полагают, что аутоантитела, реагирующие с кишечными неоантигенами, могут перекрестно реагировать с аутоантигенами синовиальной оболочки и индуцировать развитие артрита (Zhang X. et al., 2015).
Одним из факторов внешней среды приводящему к риску развития РА является снижение потребления полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) (Di Giuseppe D. et al., 2014; Gan R.W. et al., 2017). Оказалось, что снижение содержания омега-3 ПНЖК в эритроцитах коррелирует с увеличением титров РФ и АЦБ у носителей shared epitops (SE) ("общий эпитоп"). Для объяснения причин этой ассоциации выдвинута гипотеза о том, что омега-3 ПНЖК могут влиять на конформацию и экспрессию HLA-DR. Прием омега-3 ПНЖК уменьшает интенсивность болей в суставах у пациентов с артритом (Насонов Е.Л., 2017). Механизм действия омега-3 ПНЖК может быть связан с увеличением уровня антивоспалительных эйкозаноидов – ресолвинов (Насонов Е.Л., 2017). Действительно, имеются данные о том, что у пациентов с РА наблюдается достоверное снижение сывороточного уровня так называемых D - ресолвинов (RvD1, RvD2, RvD3) по сравнению с контролем (Arnardottir H.H., Dalli J., 2016).
Среди факторов внешней среды инициирующих цитруллинирование как потенциального механизма формирования аутоантигенного репертуара, является курение (Terao C., 2014; Lugli E.B. et al., 2015). У курильщиков в бронхоальвеолярном лаваже обнаруживается избыточное количество цитруллинированных белков (Насонов Е.Л., 2017), что связывают с локальным увеличением активности пептидил аргениндезаминазой 2 (ПАД-2). Выявлена взаимосвязь между развитием бронхоэктазов, фиброза легких и увеличением концентрации антител к АЦБ (Janssen K.M.J. et al., 2015) и образованием ростковых центров, накоплением В-клеток и плазматических клеток в ткани легких АЦБ-позитивных людей, у которых в последующем развился РА. А также у этих пациентов наблюдается увеличение содержания цитруллинированных белков (виментин) в бронхиальной и синовиальной тканях (Ytterberg A.J. et al., 2015).
Наряду с тканью легких, важным местом образования пострасляционных модификаций (ПТМ) белков является ткань десен. Во многих исследованиях было показано увеличение распространенности РА у пациентов с периодонтитом (Насонов Е.Л., 2017), а также связь между развитием периодонтита, серопозитивностью по РФ/АЦБ и активностью РА (Dissick A. et al., 2010; De Smit M. et al., 2012). В воспаленном периодонте наблюдается увеличение экспрессии пептидил аргениндезаминазы (ПАД), содержания цитруллинированных белков (Nesse W. et al., 2012), а в десенной жидкости – увеличение уровня антител к цитруллинированным белкам (АЦБ) (Насонов Е.Л., 2017). Высказана гипотеза о том, что синтез АЦБ при РА представляет собой последствие протективного иммунного ответа против P. gingivalis, реализующийся за счет феномена «молекулярной мимикрии» (Насонов Е.Л., 2017; Li S. et al.,2016). У людей с генетическим риском развития РА обнаружение антител к P. gingivalis в сыоротке ассоциируется с гиперпродукцией АЦБ и РФ (Насонов Е.Л., 2017; Kharlamova N. et al., 2016).
Антицитруллинированные белки принимают участие не только в развитии воспаления, но и в индукции остеокластогенеза и боли. Установлено, что АЦБ, взаимодействуя с виментином, присутствующим на мембране предшественников остеокластов (ОК), обладают способностью индуцировать дифференцировку ОК и тем самым стимулировать резорбцию костной ткани (Harre U. et al., 2012). Это объясняют локальной экспрессией и активацией ПАД, запускающей процесс цитруллинирования виментина, что в свою очередь приводит к усилению дифференцировки ОК посредством аутокринной стимуляции синтеза ФНО (Насонов Е.Л., 2017). Этот эффект был воспроизведен при исследовании моноклональных антител, синтезирующихся В-клетками, выделенными из синовиальной ткани пациентов с РА (Krishnamurthy A. et al., 2016), и связан как с прямым распознаванием (Fab-фрагмент антител сохранял ОК-активирующую активность), так и с активацией Fc-рецепторов ОК (Насонов Е.Л., 2017).
Оказалось также, что потеря сиаловой кислоты в молекуле IgG АЦБ, присутствующих в сыворотках пациентов с РА, ассоциируется с нарушением архитектоники костной ткани (Harre U. et al., 2015). Это соответствует данным клинических исследований о том, что потеря костной ткани в околосуставной зоне у АЦЦП-позитивных пациентов начинается до развития клинических проявлений РА, а при раннем РА увеличение концентрации АЦЦП коррелирует с развитием системного остеопороза (Kleyer A. et al., 2014; Bugatti S. et al., 2016). Остеокласты и их предшественники являются наиболее часто встречающимися клетками, экспрессирующими цитруллинированные белки на своей мембране в нормальном суставе. При этом ПАД индуцировала цитруллинирование белков только на остеокластах, но не на других клетках, участвующих в развитии РА, – фибробластоподобных синовиоцитах, Т-клетках и В-клетках.
Поликлональные АЦБ, изолированные из сывороток пациентов с РА, индуцируют остеокластогенез за счет ПАД-зависимого аутокринного механизма, опосредуемого хемокином ИЛ8 (CXCL1 у мышей), который рассматривается как основная эффекторная молекула, синтезирующаяся остеокластами, активированными АЦБ. Примечательно, что синтез других «противовоспалительных» цитокинов (ФНО-, ИЛ6, ИЛ1) остеокластами после стимуляции АЦБ существенно не менялся (Krishnamurthy A. et al., 2016; Titcombe P.J. et al., 2016).
Особенности иммунного статуса у больных с серопозитивным вариантом суставной формы ревматоидного артрита
При анализе результатов обследования больных серопозитивным вариантом суставной формы ревматоидного артрита не выявлено изменений относительного количества лимфоцитов в сравнении с контрольной группой, однако отмечается увеличение абсолютного количества лейкоцитов, что приводит к увеличению абсолютного количества всей популяции лимфоцитов периферической крови (таблица1, рисунок1).
При изучении показателей клеточного звена иммунной системы выявлено статистически достоверное увеличение как относительного, так и абсолютного количества Т-лимфоцитов по сравнению с группой контроля. Анализ субпопуляционного состава Т-лимфоцитов показал увеличение количества Т-хелперов (CD3+CD4+CD45+) и экспрессии на них маркеров ранней активации CD25 при сохранности относительно контроля количества Т – регуляторных клеток CD4+CD25+FOXp3+ (T-reg). Абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов цитотоксической субпопуляци (CD3+CD8+CD45+) превышает показатели контрольной группы. В то же время число CD16+CD3-CD45+ лимфоцитов врожденного иммунного ответа меньше, чем в контроле, а в фагоцитарном звене выявлено снижение коэффициента стимуляции в НСТ-тесте по отношению к контрольной группе (таблица 1, рисунок 1).
В соответствии с поставленной целью исследования, особый интерес представляло изучение как количественных, так и функциональных параметров популяции В-лимфоцитов. В зависимости от наличия мембранного CD5-антигена все В-лимфоциты подразделяются на две субпопуляции: CD5+ (В1-клетки) и CD5- (B2-клетки) (Гаврилова М.В., 2016). Одной из функций В-1 лимфоцитов является синтез аутоантител. В2-лимфоциты вырабатывают разнообразные иммуноглобулины, обладающие высоким сродством к различным антигенам в процессе адаптивного иммунного ответа и формируют клетки памяти (Насонов Е. Л., 2012).
При изучении количественного числа CD5+ В1-лимфоцитов выявлено увеличение их относительного и абсолютного содержания в периферической циркуляции у больных с серопозитивным вариантом суставной формы РА по сравнению с контрольной группой. При оценке содержания CD5- В2- клеток также установлено увеличение относительного и абсолютного количества. Таким образом, нами показано увеличение общего пула В-лимфоцитов, при этом процентное соотношение субпопуляций В1 и В2 составляет 7,3% и 92,7% соответственно. Анализ процессов дифференцировки и созревания В2-лимфоцитов выявил увеличения содержания наивных CD27- клеток, при этом количество CD27+ клеток памяти статистически значимо не изменялось по отношению к контролю (таблица 2, рисунок 2).
Процесс активации лимфоцитов определяется экспрессией мембранных структур, обеспечивающих проведение сигнальных путей для медиаторов, обладающих активирующим воздействием. Анализ активационных маркеров выявил увеличение экспрессии на В2-клетках маркеров ранней CD23 и CD25 активации. При оценке процесса элиминации пролиферирующих и активированных клеток выявлено увеличение на В2 лимфоцитах экспрессии рецептора готовности к апоптозу CD95 и увеличение количества апоптотирующих CD19+An+ клеток в реакции с аннексином –V (таблица 2, рисунок 2).
Для реализации своих эффекторных функций Т и В-лимфоцитам необходимы следующие условия: презентация антигена Т-лимфоцитам и наличие межклеточного взаимодействия между Т и В-лимфоцитами для образования иммунологического синапса. В-клетки могут презентировать антиген, так как они являются «профессиональными» антигенпредставляющими (АПК) клетками. Межклеточное взаимодействие реализуется через корецепторное взаимодействие между CD 86 на АПК и систему CD40 и CD40L. Молекула CD40 постоянно экспрессируется на поверхности клеточной мембраны В- клеток, тогда как ее лиганд CD40L появляется на Т-хелперах только в процессе межклеточного взаимодействия Ярилин А.А., 2010).
Нами показано, что у пациентов с серопозитивным вариантом суставной формы РА выше перечисленные условия реализовывались следующим образом: статистически достоверно увеличено относительное и абсолютное количества В-лимфоцитов с экспрессией HLA DR, ответственных за презентацию антигена; повышена экспрессия костимуляторной молекулы CD 86 и CD 40 на В2 - клетках, также как и CD40L на Т- хелперах, обеспечивающих межклеточную кооперацию (таблица 3, рисунок 3).
Анализ гуморальных компонентов иммунного ответа показал, что суммарная интеграция работы В-1и В-2 клеток привела к повышению синтеза сывороточных иммуноглобулинов классов IgА, IgМ, IgG, а также ЦИК (таблица 4, рисунок 4).
Таким образом, в стадию активности патологического процесса, мы выявили существенные изменения функциональных потенций различных фенотипов В-лимфоцитов. Однако учитывая, что РА хронический воспалительный процесс, протекающий годами, определенный интерес представлял анализ функциональных свойств фенотипов В-лимфоцитов в стадии реактивации в зависимости от длительности течения патологического процесса.
Особенности иммунного статуса у больных серонегативным ревматоидным артритом суставной формы
При изучении количества лейкоцитов и лимфоцитов у пациентов с серонегативным вариантом суставной формы РА в активную фазу выявлено статистически достоверное увеличение абсолютного содержания лейкоцитов и лимфоцитов, при этом относительное количество лимфоцитов не отличалось от контроля (таблица 30, рисунок 30).
Анализ клеточного состава лимфоцитов выявил увеличение относительного и абсолютного количества CD3+-лимфоцитов, за счет субпопуляции Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов. CD4+-клетки характеризовались увеличением их активационного потенциала, при этом относительное количество регуляторных Т-клеток, ответственных за сдерживание гипериммунного ответа, статистически значимо было снижено по отношению к контролю (таблица 30, рисунок 30). Выявлено количественное снижение содержания CD16+ лимфоцитов. При оценке функциональной активности нейтрофилов выявлено снижение образования активных форм кислорода, что документируется снижением по отношению к контролю коэффициента стимуляции НСТ-теста (таблица 30, рисунок 30 ).
При изучении количественного содержания субпопуляции В1 лимфоцитов, имеющих фенотип CD19+CD5+, выявлено статистически значимое увеличение их числа по отношению к контрольной группе. При анализе количественного содержания В2-лимфоцитов с фенотипом CD3-CD19+CD5- документируется их увеличение (таблица 31, рисунок 31). Таким образом, выявлено увеличение общего пула В-лимфоцитов как за счет В1, так и В2- субпопуляций при соотношении В1: В2 как 7,6%: 92,4%.
Способность к восприятию В2-лимфоцитами стимулирующих воздействий проявлялось повышением экспрессии поверхностных мембранных антигенов ранней активации CD23+, CD25+ . Дальнейшее проведение активационного сигнала внутрь клетки приводило к пролиферации В2-клеток, их дифференцировке в наивные CD3-CD19+CD27 , зрелые CD3-CD19+CD5- и клетки иммунологической памяти CD19+CD45RA-CD27+. У пациентов с серонегативным РА суставной формы выявлено увеличение наивных и зрелых В2-лимфоцитов и отсутствие статистически значимых изменений в количестве клеток памяти (таблица 31,рисунок 31).
Элиминация активированных и пролиферирующих клеток осуществляется с помощью процесса апоптоза. Так, на В2-лимфоцитах у пациентов с серонегативным РА суставной формы регистрируется повышение экспрессии мембранного рецептора CD95 готовности к апоптозу, а так же количество апоптотирующих В2-клеток в реакции с V-аннексином (таблица 31,рисунок 31).
Антигенпрезентирующая функция В2-лимфоцитов проявляется усилением экспрессии на них мембранного маркера HLA DR, что подтверждено нашими данными (таблица 32, рисинок 32). Дальнейшее представление антигена Т-лимфоцитам и их активация не возможна без помощи корецепторных молекул. Выявлено увеличение экспрессии корецепторной молекулы CD40 на В2-лимфоцитах и лиганда CD40L к ней на активированных Т-хелперах. Для усиления действия сигнала, возникшего при взаимодействии CD40+/ CD40L, необходима другая корецепторная молекула - CD86, которая в наших исследованиях проявлялась повышением экспрессии на В2-клетках (таблица 32, рисунок 32).
Реализация эффекторной функции В1 и В2- лимфоцитов у пациентов с серонегативным РА суставной формы проявилась увеличением содержания иммуноглобулинов классов Ig A, Ig M, Ig G и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) (таблица 33, рисунок 33)
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что у больных серонегативным РА суставной формы регистрируются существенные нарушения функционирования всех звеньев иммунной системы и определяются увеличением количества Т-лимфоцитов за счет как хелперно индукторной, так и цитотоксической субпопуляций при снижении числа Treg, ответственных за супрессию иммунного ответа; угнетением функциональных резервов нейтрофилов и уменьшением количества лимфоцитов системы врожденного иммунитета; активацией параметров функционирования гуморального звена адаптивного иммунитета. Так, документируется увеличение общего пула В-клеток за счет В1 и В2 субпопуляций, усиление экспрессии маркеров ранней активации, рецепторов, определяющих способность к презентации антигена и межклеточной кооперации, гипериммуноглобулинемия Ig A, Ig M, Ig G. Представляет интерес анализ динамики клеточного звена и фенотипов В1, В2- лимфоцитов при реактивации патологического процесса в зависимости от давности заболевания.
Сопоставительный анализ показателей иммунной системы и фенотипов В1 и В2 - лимфоцитов при серонегативном варианте суставной формы ревматоидного артрита в зависимости от степени активности воспалительного процесса
При сопоставительном анализе показателей клеточного звена иммунной системы у пациентов с серонегативным РА суставной формы в зависимости от степени активности воспалительного процесса выявлена тенденция к увеличению лейкоцитов по мере прогрессии заболевания, тогда как относительное и абсолютное количество лимфоцитов значимо не зависело от степени активности (таблица 54, рисунок 54).
По мере увеличения степени активности наблюдается тенденция к снижению CD3+-клеток, Т - регуляторных лимфоцитов, содержащих внутриклеточный фактор FOXp3 и нарастанию CD8+ -лимфоцитов.
Популяция Т-хелперов характеризовалась, статистически значим увеличением относительного количества при II степени, тогда как при высокой степени активности наблюдается снижение (таблица 54, рисунок 54). Следует отметить тенденцию к снижению экспрессии на CD3+CD4+-лимфоцитах мембранного антигена CD25, являющегося рецептором к ИЛ -2 при III ст. активности (таблица 54, рисунок 54).
Нами не выявлено значимых различий в количестве CD16+CD3 натуральных киллеров и функциональной активности нейтрофилов с увеличением степени активности воспалительного процесса (таблица 54, рисунок 54).
При сопоставлении показателей В-звена иммунной системы у больных с серонегативным РА суставной формы в зависимости от степени активности было обнаружено, что абсолютное и относительное количество минорной популяции В1-лимфоцитов значимо уменьшается от II ст. активности к III ст. (таблица 55, рисунок 55).
Активационный потенциал В2-лимфоцитов проявлялся тенденцией к снижению мембранных маркеров ранней активации CD19+CD23+, CD19+CD25+ (таблица 55, рисунок 55).
Процессы пролиферации и дифференцировки В2- клеток имели тенденцию к увеличению количества наивных CD19+CD45RA+CD27-, зрелых CD3-CD19 + CD5- и В-клеток памяти CD19+CD45RA-CD27+ с ростом степени активности воспаления (таблица 55, рисунок 55).
Способность В2-лимфоцитов воспринимать апоптотический сигнал, характеризующаяся экспрессией мембранного антигена CD95, значимо не изменялась от нарастания степени активности, тогда как количество ушедших в апоптоз В-клеток в реакции с аннексином имело тенденцию к снижению при росте степени активности, что создат предпосылки для циркуляции активированных клеток (таблица 55, рисунок 55).
Антигенпредставляющая функция В2-лимфоцитов по мере прогрессии воспалительного процесса статистически значимо не изменялось, что документировалось отсутствием изменения степени экспрессии мембранного антигена HLA DR (таблица 56, рисунок 56).
При сравнительном анализе процессов контактного взаимодействия Т и В-лимфоцитов выявлено отсутствие значимых изменений в экспрессии костимулирующих молекул CD86 и CD40 на В2-клетках от II степени активности к III (таблица 56, рисунок 56). При этом наблюдается статистически значимое снижение относительного количества активированных Т-хелперов, экспрессирующих CD40L к молекуле CD40 на В2- лимфоцитах по мере роста степени активности воспалительного процесса (таблица 56, рисунок 56). При сопоставительном анализе функциональной активности В лимфоцитов выявлена тенденция к незначительному росту иммуноглобулинов классов IgA, Ig M, Ig G и ЦИК от II к III степени активности (таблица 57, рисунок 57).
Таким образом, формирование основных этапов иммунного ответа с участием В-лимфоцитов при серонегативном РА суставной формы с нарастанием степени активности воспалительного процесса проявлялось уменьшением популяции В1–лимфоцитов, при этом В2-клетки характеризовались отсутствием значимых изменений в антигенпредставляющей способности, тенденцией к снижению экспрессии маркеров ранней активации, тенденцией к увеличению наивных, зрелых и В-клеток памяти, тенденцией к снижению количества апоптотирующих клеток, а так же нарушением передачи активационного сигнала через комплекс CD40\ CD40L, что приводило к анергии Т-хелперов и иллюстрировалось количественным их снижением.