Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы
1.1. Гены-маркеры, ассоциированные со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов .
1.1.1. Распределение мутаций генов BRCA 1/2 при неоплазиях женских репродуктивных органов в мировых популяциях .
1.1.2. SNP промоторных регионов генов цитокинов и их ассоциация с неоплазиями женских репродуктивных органов .
1.2. Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная продукция цитокинов in vitro PBMC больных и доноров
Глава II. Материалы и методы исследования 38
2.1. Реактивы, тест-системы и материалы 38
2.2. Экспериментальные методы 39
2.3. Контингент обследованных лиц 45
2.4. Статистическая обработка данных 47
Глава III. Результаты исследований 48
3.1. Мутации генов BRCA1/2 при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов у жителей РА 48
3.2. Полиморфизмы генов про- и противовоспалительных цитокинов 50
3.3. Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro продукция цитокинов PBMC 69
3.4. Влияние генотипов и гаплотипов промоторных регионов генов цитокинов на продукцию медиаторов 78
Обсуждение результатов 87
Выводы 99
Практические рекомендации 100
Список литературы
- Распределение мутаций генов BRCA 1/2 при неоплазиях женских репродуктивных органов в мировых популяциях
- SNP промоторных регионов генов цитокинов и их ассоциация с неоплазиями женских репродуктивных органов
- Контингент обследованных лиц
- Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro продукция цитокинов PBMC
Распределение мутаций генов BRCA 1/2 при неоплазиях женских репродуктивных органов в мировых популяциях
BRCA1 одна из наиболее распространенных в мире мутаций, ранее считавшаяся специфичной для евреек-Ашкенази при РМЖ, с высокой частотой выявлена в географически удаленных странах мира: 22,7% -Израиль [Levy-Lahad et al., 1997); 22,0% - Египет [El-said El-Debaky et al., 2011]; 20,7% и 16,4% – Индия [Vinodkumar et al., 2007; Vaidyanathan et al., 2009]; 18,0% – Канада [Phelan et al., 2002] и др. (Приложение А). Следует отметить, что высокие значения частот 185delAG мутации гена BRCA1 представлены в исследованиях на малых выборках больных [Levy-Lahad et al., 1997; Vinodkumar et al., 2002]. У женщин славянской языковой группы (России, Украины, Польши, Белоруссии – стран Восточной Европы) с РМЖ и РЯ частота 185delAG составляет 0 - 3,1%, поэтому спорным остается вопрос об использовании этой мутации как маркера, ассоциированного с риском развития ЗНО [Gorski et al., 2004; Смирнова, 2008; Zakhartseva et al., 2009; Silin et al., 2009; Порханова, 2009; Любченко, 2009; Часовникова и др., 2010; Brozek et al., 2011; Лобейко, 2012].
Распространенность 5382insC гена BRCA1 проанализирована в 45 работах (табл. 2); частота мутации в небольших выборках онкологических больных разных этнических групп (Египет, n=50; Польша, n=200; Россия, n=224, Чехия, n=151, Румыния, n=26) составляет соответственно 56,0% : 34,0% : 28,6% : 12,0% : 11,5%. В больших выборках обследованных больных (Польша, n=4177) частота 5382insC не превышает 4,5%. По другим мутациям и полиморфизмам гена BRCA1 в международных базах имеются немногочисленные сведения (HuGEN, Pubmed).
Делеция 6174delT гена BRCA2 с частотой 1,2 - 16,4% выявлена при РМЖ и РЯ у афро-американок и евреек-Ашкенази, проживающих в США, Израиле, Канаде [Struewing et al., 1997; Neuhausen et al., 1998; Georgiou et al., 2003; Lavie et al., 2010]. У славянок с ЗНО женских репродуктивных органов частота этой мутации не превышает 1% [Diez et al., 1999; Zakhartseva et al., 2009; Silin et al., 2009; Ходорович, 2009; Порханова, 2009; Поспехова, 2011; Фарахтдинова, 2012].
В результате проведенного мета-анализа нами не определены общие мутации генов BRCA1/2, которые при скрининговых исследованиях могут быть использованы как унифицированные маркеры ЗНО молочной железы, яичников, тела и шейки матки, поэтому на следующем этапе работы представлялось целесообразным провести сравнительный анализ частот наиболее известных мутаций BRCA1/2 в некоторых этнических группах и регионах мира.
Евреи Ашкенази. Распространенность мутации BRCA1/2 в популяциях евреев по данным G. J.Mann et al. (2006) составляет около 0,2%, однако у евреек-Ашкенази 29 - 41% случаев рака молочной железы и яичников связано с наследованием одной из трех founder mutations в генах BRCA1/2 (185delAG, 5382insC - BRCA1 и 6174delT - BRCA2), однако и у других народов около 10% ЗНО женских репродуктивных органов обусловлено этими же мутациями. Делеция 185delAG, встречающаяся у 1% евреев, вносит значительный вклад (16-20%) при ранних (до 50 лет) случаях РМЖ [Robles-Daz et al., 2004]. Мутации 5382insC в гене BRCA1 и 6174delT в гене BRCA2 обнаружены соответственно у 0,13% и 1,52% Ашкенази [Roa et al., 1996]. Наиболее распространенная в популяции евреев-Ашкенази делеция во втором экзоне гена BRCA1 185delAG возникла, по мнению S. L. Neuhausen et al. (1996), примерно в 1235 г. нашей эры.
Европа. В странах Восточной Европы распространена мутация гена BRCA1 в 20 экзоне – 5382insC, частота которой колеблется от 5,4 до 8,9% у жительниц Белоруссии и Украины [Zakhartseva et al., 2009; Silin et al., 2009; Uglanitsa et al., 2010]. Для северных регионов Европы характерно наличие других мутаций-основателей гена BRCA1: в Норвегии - 3347delAG, 1135insA, 1675insA, Финляндии - 3604delA, Дании - 2594delC, в Германии у больных наследственным РМЖ в возрасте до 41 года частота мутации 5382insC гена BRCA1 составляет 1,1% [Vehmanen et al., 1997; Sarantaus et al., 2001; Bergthorsson et al., 2001; Bjorge et al., 2004].
В странах Центральной и Южной Европы спектр мутаций гена BRCA1 при ЗНО женских репродуктивных органов значительно шире [Osorio et al., 2002; Pohlreich et al., 2005; Capalbo et al., 2006; Koumpis et al., 2011; Blay et al., 2013]. У женщин Западной Польши в 3% случаев семейного РМЖ и РЯ выявлена мутация гена BRCA1, а для Словении характерна миссенс-мутация 1806С Т, которая с меньшей частотой обнаружена у жительниц Чехии [Pohlreich et al., 2005; Krajc et al., 2008]. В России наиболее распространенной мутацией гена BRCA1 является 5382insC, обнаруженная в 9% случаев раннего (до 40 лет) развития РМЖ, на долю которой приходится около 90% всех мутаций гена BRCA1, типированного для Центрального и Сибирского регионов России [Карпухин и др., 2002; Grudinina et al., 2005; Krylova et al., 2006].
Носительство 5382insC среди разных народов Европейских государств (Польши, Германии, Бельгии, Чехии, Румынии, Латвии, Белоруссии) как у евреев-Ашкенази, по мнению некоторых исследователей, объясняется ее независимым происхождением. Е.Н. Имянитов (2010) предполагает вероятность славянского происхождения мутации BRCA1 5382insC, а обнаружение данного варианта у евреев-Ашкенази в Восточной Европе является следствием длительного сосуществования славян и евреев на территории Прибалтики и некоторых государств (Приложение В).
Страны Азии и Африканского континента характеризуются минорными мутациями, не встречающимися в других географических зонах (Приложение Г). В китайской и корейской популяциях среди пациенток РМЖ распространенность мутаций гена BRCA1/2 не превышает 1,1% [Khoo et al., 2002; Kwong et al., 2012; Son et al., 2012; Kang et al., 2013]. Согласно исследованиям N.M. Suter et al. (2004) и по данным международной базы BIC, мажорная Tyr856His миссенс-мутация, выявляемая в 4,2% у онкологических больных в Китае, характерна также для населения Малайзии (HuGEN, Pubmed).
W. Mahfoudh et al. (2012) рассматривают 916delTT гена BRCA1 как founder mutation при РЯ и РМЖ у жительниц Туниса (частота составляет 12,5%). В Японии, согласно работам K. Sugano et al. (2008), семейные формы ЗНО женских репродуктивных органов ассоциированы с несколькими нонсенс-мутациями гена BRCA1: Leu63Stop, Tyr130Stop, Glu908Stop, Gln934Stop и др. 185delAG гена BRCA1 с частотой 0,4-2,4% встречается в этнических группах Ирана и Вьетнама [Yassaee et al., 2002; Mehdipour et al., 2006; Ginsburg et al., 2010].
SNP промоторных регионов генов цитокинов и их ассоциация с неоплазиями женских репродуктивных органов
В гене IL-17А человека идентифицировано 74 SNP, 10 из которых наиболее изучены: 112G A и 175T C в 5 некодирурующем регионе, 1230G A во 2 экзоне; rs8193037 (121G A), rs2275913 (197G A), rs3819024 (444A G), rs9791323 (525A C), rs8193036 (737C T), rs4711998 (877A G) расположены в 5 кодирующем регионе; rs3819025 (45G A) – в первом интроне. Из шести SNP гена IL-17А, ассоциированных с заболеваниями (ревматизмом, ревматоидным артритом, бронхиальной астмой, аллергическими заболеваниями, множественным склерозом, злокачественными новообразованиями желудка, молочной железы и др., в мировых популяций исследованы преимущественно G197A (rs2275913) или 197G A [Shibata et al., 2009; Wu et al., 2010; Zhang et al., 2011; Кутихин и др., 2012; Wang L. et al., 2012]. Установлена ассоциация гомозиготного A197A генотипа (OR=3.02; 95%CI, 1.86-4.91; p 0.0001) и 197A аллеля (OR=1.42; 95%CI, 1.09-1.85; p=0.010) гена IL-17A у больных раком желудка интестинального типа [Shibata et al., 2009].
IL-17F. Четыре из 157 SNP IL-17F: 482A G (A7488G, His161Arg; rs763780), 34-361G T (rs7771466), 377A G (rs2397084), 368C G (rs612242) типированы при бронхиальной астме, колитах, кардио-васкулярных заболеваниях, раке желудка и молочной железы, артритах и рассеянном склерозе [Shibata et al., 2009; Wu et al., 2010; Paradowska-Gorycka et al., 2010; Wang L. et al., 2012; Qian et al., 2012].
Аллельные варианты генов IL-17А и IL-17F, вовлеченные в патогенез многих системных заболеваний, в ряде работ рассматриваются совместно [Wu et al., 2010; Paradowska-Gorycka et al., 2010; Quan et al., 2012]. Из 8 SNP гена IL-17А и IL-17F у жительниц Китая по данным Wang L. et al. (2012), со злокачественными новообразованиями молочной железы достоверно (р=0,0029) ассоциирована 197A аллель гена IL-17А. Частоты G/A аллелей IL-17A в группах доноров и больных с РМЖ составили соответственно 0,640:0,360 и 0,574:0,426. Аналогичные результаты получены Quan Y. et al. (2012) при раке шейки матки (р=0,008). Значимых различий для полиморфизмов His161Arg гена IL-17F не представлено.
В России у онкологических больных Кемеровской области со злокачественными новообразованиями желудочно-кишечного тракта исследованы G197/197A полиморфизмы IL-17А (rs2275913). Частоты G197/197A аллелей у доноров и больных, по данным А.Д. Еникеевой с соавторами (2012 г.) достоверно не различались (соответственно 0,620/0,380, и 0,623/0,377, 2=0,01; р=0,91). Ассоциации G197/197A полиморфизмов IL-17А и His161/161Arg аллелей IL-17F с другими локализациями новообразований в РФ не исследованы (HuGEN, Pubmed). SNP гена IL-10 (1082G/A, 819C/T, 592C/A)
Основной противовоспалительный IL-10 – плейотропный цитокин, ключевой регулятор иммунного ответа, который вырабатывается Th2-клетками, моноцитами, цитотоксическими Т-клетками, продуцируется не только разными популяциями иммунокомпетентных клеток, но и опухолевыми тканями. IL-10 способен ингибировать синтез других цитокинов, подавлять экспрессию молекул MHC II класса, пролиферацию Т-клеток, развитие гиперчувствительности замедленного типа, проявляет опухоль-стимулирующие и опухоль-ингибирующие свойства. Различные опухолевые линии способны продуцировать IL-10, подавляющий Т-клеточный иммунный ответ, активность Т-лимфоцитов, снижение экспрессии антигенов MHC I класса [Turner et al., 1997; Rao et al., 2006; Alvero et al., 2012; Dobrzanski et al., 2012; Симбирцев, 2004; Кетлинский и др., 2008].
Mocellin et al. (2004) объясняют противоположные эффекты IL-10 полиморфизмами гена, регулирующими уровень его продукции (гипо- или оверэкспрессия) или структурные изменения соответствующих белковых продуктов с различной активностью. Однонуклеотидные замены в геномной ДНК – SNP в специфических генах-кандидатах влияют на экспрессию и активность кодируемых белков и приводят к развитию новообразований, в том числе рака молочной железы [Jong et al., 2002]. По данным Turner et al. (1997) и Gibson et al. (2001) SNP в промоторной области гена IL-10 воздействуют на экспрессию гена и, следовательно, играют определенную роль в патогенезе и клиническом течении рака молочной железы.
Ген IL-10 локализован на 1-ой хромосоме 1q31-1q32 (рис. 5) и состоит из пяти экзонов и четырех интронов (www.genecards.org). Сообщается, что несколько важных полиморфных сайтов в гене IL-10, в том числе три в области промотора (1082G/A, 819C/T, 592C/A) могут влиять на транскрипцию мРНК и экспрессию IL-10 in vitro [Eskdale et al., 1997].
Рис.5 Локализация гена IL-10 в 1-ой хромосоме, стрелкой указано месторасположение гена (по данным GeneCards)
В международных базах данных за последние пять лет в 155 работах отмечена ассоциация основных полиморфизмов промоторного региона гена IL-10 (1082G/A, 819C/T, 592C/A) с развитием злокачественных новообразований, в 8 из них – с РМЖ и РШМ (HuGEN, Pubmed). В некоторых исследованиях показано участие IL-10 в патогенезе, прогнозе течения рака молочной железы и шейки матки, однако еще не идентифицированы определенные полиморфизмы IL-10 как маркеры, ассоциированные у разных народов с новообразованиями женских репродуктивных органов [Langsenlehner et al., 2005; Howell et al., 2007; Gerger et al., 2010]. В таблице 4 обобщены данные (статистически не всегда значимые) по распределению и возможной ассоциации трех полиморфизмов гена IL-10 со ЗНО органов женской репродуктивной системы у разных народов. В России исследования по ассоциации полиморфизмов гена IL-10 с неоплазиями женских репродуктивных органов единичны.
Контингент обследованных лиц
Вовлеченность IL-17А в патогенез аутоиммунных, сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний путем активации Т-лимфоцитов, клеточной адгезии, стимулирования пролиферации эндотелиоцитов, мезенхимальных стволовых клеток, опухолевых клеток in vitro обуславливает необходимость исследования сывороточных концентраций, продукции IL-17А в культуре интактных мононуклеарных клеток периферической крови и при активации in vitro ФГА у доноров и обследованных больных со злокачественными новообразованиями огранов женской репродуктивной системы (табл. 31).
Для большинства медиаторов иммунной системы низкие сывороточные концентрации, в норме не превышающие 100 pg/ml, сочетаются с высоким уровнем спонтанной и стимулированной продукции в культуре РВМС. Однако по IL-17А у обследованных больных и доноров выявлены чрезвычайно высокие сывороточные уровни IL-17A, варьирующие в диапазоне значений 2003-2624 pg/ml (M±m=2218,2±214,8/2561,6±62,8; Ме=2308,8/2496,6), превышающие физиологические нормы для других провоспалительных цитокинов в десятки раз и не имеющие научной ценности. В культуральной среде интактных и стимулированных ФГА РВМС доноров и больных с онкопатологией концентрации IL-17A достоверно отличались от сывороточных значений (табл. 31). Интактные РВМС онкологических больных по сравнению с донорами характеризовались достоверно сниженной продукцией IL-17A и отсутствием стимуляции при инкубации с ФГА (Me: 0/36,8; 0/92,1 соответственно). Полученные данные по спонтанной и стимулированной продукции IL-17A PBMC больных подтверждают клеточную ареактивность онкологических больных по медиаторному звену иммунной системы.
Уровни спонтанной и стимулированной продукции IL-17A PBMC больных в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы, вовлечения регионарных лимфатических узлов проанализированы при РМЖ (таблицы 32-33).
Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Me -медиана; t- критерий Стьюдента При высоко- и низкодифференцированных гистотипах аденокарциномы с вовлечением регионарных лимфатических узлов, интактные PBMC больных в подавляющем большинстве случаев (95%, Me =0) не продуцируют IL-17А (табл. 32-33). В отличие от других медиаторов иммунной системы, ФГА не оказывает стимулирующего влияния на синтез этого провоспалительного цитокина. Согласно полученным экспериментальным данным можно предположить, что in vivo PBMC онкологических больных не являются продуцентами IL-17А, обуславливающими повышенные сывороточные концентрации медиатора. Поэтому наиболее информативным критерием экспрессии гена IL-17А является способность PBMC продуцировать медиатор и отвечать на стимулирующее влияние ФГА.
Ключевой регулятор иммунного ответа IL-10 ингибирует синтез других цитокинов, подавляет экспрессию MHC II класса. При некоторых неоплазиях системное повышение IL-10 сочетается с опухолевой прогрессией и является плохим прогностическим признаком [Gibson et al., 2001], однако, при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов спонтанная и стимулированная in vitro продукции IL-10 практически не исследованы (HuGEN, Pubmed). Экспериментально нами определены концентрации медиатора в сыворотках, культуральной среде интактных и стимулированных ФГА PBMC у доноров и больных с неоплазиями (табл. 34).
Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Me- медиана; t- критерий Стьюдента В культуральной среде интактных PBMC больных со ЗНО женских репродуктивных органов IL-10 детектируется в следовых количествах (0-3 pg/ml). ФГА не оказывает стимулирующего влияния. PBMC доноров в отличие от больных способны к спонтанной и индуцированной ФГА продукции IL-10 (t = 4,99 и 10,32 соответственно).
Уровни продукции IL-10 интактными и стимулированными ФГА PBMC больных с разными вариантами прогностически неблагоприятных гистотипов аденокарциномы, вовлеченности регионарных лимфатических узлов при ЗНО женских репродуктивных органов представлены в таблице 35.
В зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в лимфатические узлы концентрации IL-10 в сыворотках, культуральной среде интактных и стимулированных ФГА PBMC больных не превышали физиологических значений (Me= 0,4-3,9) и достоверно не различались (табл. 35). IL-2
Потенциальная роль IL-2 как фактора пролиферации Т-лимфоцитов в канцерогенезе определяется его сигнальными путями, которые ведут к клеточным онкогенам. Содержание этого медиатора иммунной системы в образцах сыворотки (но не в культуральной среде интактных и стимулированных PBMC) исследованы в мировых популяциях для немногочисленных групп доноров и больных со ЗНО различных локализаций [Forones N. et al., 2001; Lyon D. et al., 2008; Тугуз А.Р., 2002]. Экспериментально нами проанализированы концентрации IL-2 у доноров и больных с РМЖ, РТМ, РШМ (табл. 36) в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в регионарные лимфоузлы (табл. 37).
По сравнению с другими цитокинами, сывороточные концентрации IL-2 колеблются в широком диапазоне значений (М±т = 0-428), у доноров и больных со ЗНО достоверно не различаются. Интактные РВМС доноров продуцируют более высокие уровни IL-2 (р 0,05), но не стимулируются поликлональным митогеном ФГА. Таблица 37. Продукция IL-2 в культурах PBMC больных в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в регионарные лимфатические узлы
Биологические среды Концентрации IL-2, pg/ml t1; Р Концентрации IL-2, pg/ml t2; Р Высоко- иумереннодифференцированнаяаденокарцинома Низкодиффе-ренцированная аденокарцинома T1.4N0M0 T1.4N1-3M0 M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me 17,9421, 9468, 7 M±m, pg/ml Me Сыворотка крови 76,2±45,0 0 304,8±175 17,8 1,26; 0,05 182,8±119 337,1±188 89,3 0,11; 0,05
Культура интактных PBMC (спонтанная продукция) 328,9±86 390,6 972,9±276 796,9 2,30; р0,05 498,7±101 999,6±320 750,0 1,75; 0,05
КультурастимулированныхPBMC+ФГА 482,2±52 468,7 602,7±111 484,4 0,98; 0,05 526,1±67 541,7±113 445,3 0,13; 0,05
Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Me- медиана; t- критерий Стьюдента для: 1- уровня дифференцировки аденокарциномы; 2-вовлеченности регионарных лимфатических узлов; р0,05
Достоверное повышение спонтанной продукции IL-2 PBMC отмечено при низкодифференцированной аденокарциноме (t=2.30; р0.05). Вовлеченность лимфатических узлов в опухолевый процесс не оказывает влияния на содержание IL-2 в исследованных образцах биоматериалов (табл. 37).
Патогенетическая роль цитокинов в неопластических процессах обусловлена преимущественно их гипо- или гиперпродукцией, которая зависит от полиморфных вариантов промоторных регионов, регулирующих уровни экспрессии мРНК генов и синтез белкового продукта [Gooch et al., 1998; Nagai et al., 2000]. Влияние SNP гена IL-4 на сывороточные концентрации, уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции медиатора практически не исследовано (HuGEN, Pubmed), но может иметь важное значение в процессах канцерогенеза, т.к. IL-4 регулирует экспрессию молекул МНС и состояние протвоопухолевого иммунитета [Morga, 1996; Zhong, 1996].
Поэтому нами исследовано содержание противовоспалительного IL-4 в биологических средах (сыворотке, культуральной среде PBMC) доноров и больных в общих группах (табл. 38), а также изменение его концентрации в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и вовлеченности регионарных лимфатических узлов в опухолевый процесс (табл. 39).
Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro продукция цитокинов PBMC
В РФ и мире информация по продукции IL-10 мононуклеарными клетками крови больных с неоплазиями женских репродуктивных органов представлена в единичных работах. Так, Я.В. Кухарев (г. Томск, 2010), сравнивая функциональные возможности PBMC больных РМЖ до и после химиотерапии, отмечает, что стандартные курсы полихимиотерапии угнетают in vitro спонтанную и стимулированную ФГА продукцию IL-10. Merendino R.A. et al., (1999) однако, выявили значительное повышение уровня продукции IL-10 интактными PBMC больных РМЖ по сравнению с донорами. Данные, полученные для жителей РА также свидетельствуют о снижении способности PBMC онкологических больных продуцировать основной противовоспалительный медиатор: в культуральной среде интактных и индуцированных ФГА PBMC больных РМЖ, РТМ, РШМ, IL-10 детектируется в следовых количествах (2,8±0,5 / 2,1±0,9pg/ml) и достоверно отличается от уровней IL-10 в культуральной среде PBMC доноров (41,2±26,7 / 208,1±70,2pg/ml).
Сывороточные концентрации IL-10, уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции медиатора мононуклеарными клетками крови при развитии ЗНО репродуктивных органов могут зависеть от SNP промоторного региона гена IL-10 (G1082A, C819Т, C592A), однако аналогичные исследования в мире не проводились. Впервые нами экспериментально показана взаимосвязь полиморфных вариантов гена с сывороточными концентрациями, уровнями продукции IL-10 интактными и стимулированными ФГА PBMC доноров и больных РМЖ, РШМ, РТМ. Установлено влияние разных SNP на продукцию IL-10: у доноров G1082 аллель в гомо- и гетерозиготном состояниях достоверно снижают, а C819Т, С592А, С592С полиморфизмы повышают спонтанную продукцию IL-10. У больных с ЗНО исследованные концентрации IL-10 в культуральной среде интактных и стимулированныхй ФГА PBMC не зависят от генотипов трех полиморфизмов, но статистически значимо снижены по сравнению с донорами.
По сочетанному влиянию гаплотипов или полиморфизмов трех сайтов промоторного региона гена IL-10 на способность PBMC секретировать противовоспалительный цитокин в электронных базах HuGEN, Pubmed нет данных. Нами показано, что исследованные варианты гаплотипов при ЗНО женских репродуктивных органов не регулируют секрецию IL-10 PBMC, тем самым подтверждая отсутствие взаимного влияния SNP на продукцию медиатора.
IL-2. Пролиферативная активность IL-2 в отношении антиген активированных Т-лимфоцитов предполагает его вовлеченность в патогенез новообразований. Участие IL-2 в канцерогенезе, в особенности злокачественных новообразований женских репродуктивных органов, недостаточно исследовано, что подтверждается единичными ссылками в мировых базах данных. В большинстве исследований отражена роль рецептора IL-2 (IL-2R), но не полиморфизмов гена IL-2 [Tesarova, 2000; Тугуз, 2002; Kuhn, 2005]. Возможная связь аллельных вариантов гена IL-2 с РМЖ по 384, 475 и 631 сайтам промоторного региона SNP проанализирована в двух работах, однако ни Erdei E. et al. (2010) по 384G/T полиморфизмам, ни Горева Е.П. с соавт. для 631G/A и 475A/T полиморфных вариантов гена IL-2 не выявили ассоциации с РМЖ.
Аналогичные выводы получены нами при сравнении распределения частот T330G аллельных вариантов промоторного региона гена IL-2 в выборках доноров и онкологических больных с РМЖ, РТМ, РШМ: по частотам аллелей и генотипов T330G IL-2 статистически значимых отличий для сравниваемых групп не установлено, что противоречит данным Hu X.B. et al. (2013) об ассоциации гетерозиготного T330G (р=0,0021) и гомозиготного G330G генотипов (р 0,0001) IL-2 с РМЖ. Впервые нами у больных РА установлено достоверное повышение частот нормальной Т330 аллели при раке молочной железы, тела и шейки матки с метастазированием в регионарные лимфатические узлы.
Содержание IL-2 в образцах сыворотки у доноров и онкологических больных исследовано для некоторых мировых популяций. Достоверные повышения сывороточных уровней IL-2 по сравнению с донорами отмечены Forones N. et al. (2001) у больных раком желудка (Бразилия), Lyon D. et al., (2008) при РМЖ (Канада), Тугуз А.Р., 2002 (Россия) при ЗНО разных локализаций, Садвакасовой Г.С. и др., 2010 (Казахстан) и Erdei E. et al., 2010 (США) для больных РМЖ. В отличие от цитируемых работ, в наших исследованиях высокие концентрации сывороточного IL-2 у доноров (279,2±149,3 pg/ml) и онкологических больных РА (244,5±101,6pg/ml) достоверно не различались. Это может быть обусловлено небольшими выборками больных и доноров, сопутствующей патологией или этническими особенностями обследованных групп населения, что требует дальнейших исследований в первую очередь, как свободных, так и связанных уровней IL-2.
Информативным показателем участия IL-2 в канцерогенезе может быть способность PBMC онкологических больных in vitro продуцировать медиатор и отвечать на стимулирующее влияние ФГА, однако в международных базах данные о продукции IL-2 PBMC при онкопатологии немногочисленны и противоречивы. Экспериментально нами показано достоверное снижение спонтанной продукции IL-2 в культуральной среде интактных PBMC больных с РМЖ, РШМ, РТМ по сравнению с донорами. Поликлональный митоген ФГА при инкубации с PBMC этих же больных не оказывал стимулирующего эффекта.
Влияние T330G полиморфизмов гена на сывороточные уровни, спонтанную и стимулированную ФГА продукцию IL-2 PBMC доноров, а тем более больных с неоплазиями женских репродуктивных не исследованы. Впервые нами показано, что Т330G SNP и генотипы промоторного региона IL-2 не влияют на уровни медиатора в сыворотке, культуральной среде интактных и инкубированных с ФГА in vitro PBMC доноров и онкологических больных.