Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Куделькина Светлана Юрьевна

Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией
<
Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией
>

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Куделькина Светлана Юрьевна. Роль лабораторно-диагностических показателей в оценке прогрессии патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией: диссертация ... кандидата Биологических наук: 14.03.10 / Куделькина Светлана Юрьевна;[Место защиты: ФГБОУ ВО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения Российской Федерации], 2017.- 120 с.

Содержание к диссертации

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Эпидемиология папилломавирусной инфекции, факторы риска возникновения и прогрессирования заболевания 10

1.2. Строение ВПЧ и особенности течения папилломавирусной инфекции 14

1.3. Кофакторы папилломавирусной инфекции 22

1.4. Особенности иммунологических и микробиологических факторов при патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией .27

1.5. Диагностика заболеваний шейки матки 34

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Клиническая характеристика обследованных женщин .41

2.2. Клинико-лабораторные и инструментальные методы исследования

2.2.1. Гинекологическое исследование 43

2.2.2. Микроскопические методы исследования .43

2.2.3. Цитологическое исследование 44

2.2.4. Гистологическое исследование .46

2.2.5. Кольпоскопическое исследование 46

2.2.6. Исследования на обнаружение возбудителей инфекций, предающихся половым путем 47

2.2.7. Молекулярно-биологические исследования 47

2.2.8. Определение маркеров канцерогенеза .51

2.2.9. Иммунологические исследования 52

Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение

3.1. Собственно результаты исследования 54

3.2. Регрессионный анализ 80

3.3. Корреляционный анализ .84

Заключение 89

Выводы 90

Практические рекомендации 91

Список литературы

Строение ВПЧ и особенности течения папилломавирусной инфекции

Вирус папилломы человека относится к семейству паповирусов (Papoviridae). Это широко распространенная группа вирусов, в которой на данный момент открыто 120 генотипов, для 40 из которых подтверждена принадлежность к аногенитальному тракту человека. Папилломавирусы, вызывающие заболевания у человека, входят в состав 5 родов. Серотипы, вызывающие вирус ассоциированные заболевания гениталий, относятся к роду , который соответственно филогенетической классификации разделен на 7 групп по последовательности генов Е6, Е7, L1 [4, 16, 86, 140, 198, 200, 222, 224].

Вирус папилломы человека обладает способностью инфицировать клетки многослойного плоского эпителия (кератиноциты). Кератиноцит является клеткой-хозяином для ВПЧ, там происходит размножение вируса. Вирус папилломы человека проникает через поврежденные кожные покровы, что может привести к развитию папилломавирусной инфекции и появлению бородавок и папиллом, которые являются доброкачественными новообразованиями. В основной массе случаев при инфицировании не наблюдается проявление серьезной патологии, в итоге возможно самопроизвольное регрессирование папиллом [2, 10, 25, 240]. Другой вариант развития папилломавирусной инфекции – это длительное нахождение вируса в организме-хозяине (персистенция), что увеличивает риск возникновения цервикальной неоплазии [2, 10, 25, 85,205, 240].

Вирусы папилломы человека подразделяются на генотипы высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВКР) (16, 18, 31, 33, 35,39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 и др.) и генотипы низкого риска (ВПЧ НКР) (6, 11, 13, 40,42, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81, 89 и др.) [18, 67, 93, 101, 105, 109, 145, 188, 206, 219]. Наибольшим онкогенным потенциалом характеризуются ВПЧ 16 и 18 типов.

Вирион ВПЧ имеет 52-55 нм в диаметре. Геном вируса представлен циркулярной двуспиральной ДНК, защищенной белковой оболочкой – капсидом. В отличие от сложноорганизованных вирусов вирус папилломы человека лишен суперкапсида. В каждой спирали ДНК нуклеотидные последовательности однократны, а на концах содержатся повторы начальных участков. Благодаря этим повторам вирусная ДНК может замыкаться в кольцо и в такой форме проходить этапы репликации, транскрипции и встраивается в клеточный геном. Благодаря нуклеотидным повторам возможно отличать вирусную ДНК от клеточной [184, 24].

Ранние белки ответственны за репликацию, транскрипцию вирусного генома и трансформацию клеток, поздние – за образование капсида. Классификация типов ВПЧ основана на различиях в последовательности генов Е6 и L1 вируса [72, 114, 141, 226, 260].

Внедрение вируса в клетку идет в несколько этапов. Прикрепительные белки вируса, играющие роль рецептора, соединяются с рецепторным аппаратом клетки-хозяина и путем эндоцитоза проникают через клеточную мембрану, образуя мембранные пузырьки. Мембранные пузырьки транспортируются на рибосомы, ядро или эндоплазматическую сеть, где вирус постепенно освобождается от своего капсида. Далее начинается репродукция вируса с использованием генетического аппарата клетки.

Жизненный цикл вируса папилломы человека представляет из себя процесс самовоспроизведения - образования вирионов. Вирионы обладают инфекционной активностью. Запущенная в клетке-хозяине программа репликации идет по типу вируса, результатом чего служит воспроизведение вирусной ДНК. Это приводит к выработке новых вирионов, которые являются инфекционными агентами. Существует две формы существования вируса папилломы человека в зараженной клетке: эписомальная и интегрированная. Эписомальная форма считается доброкачественной (вирус присутствует вне хромосом клетки-хозяина), интегрированную форму инфицирования называют злокачественной (вирус встраивается в хромосому клетки-хозяина) [7, 39, 63, 166, 225]. Эписомальная форма существования ВПЧ отмечается при персиситенции вируса (латентное течение) – отсутствие клинических проявлений, при образовании папиллом и бородавок, то есть имеет место разрастание эпителия; эписомальная и интегративная формы – при неоплазиях различной степени тяжести [6, 11, 20, 32, 60, 70, 249, 255, 275]. Цикл клеточного роста состоит из нескольких фаз. В S-фазе геном клетки удваивается (происходит репликация), в последующей М-фазе материнская клетка образует две дочерние клетки. Между S- и M-фазами существуют промежуточные фазы G1 и G2. Клеточный цикл, а именно последовательность его фаз, находится под контролем многокомпонентной системы белков-регуляторов, которые обеспечивают процесс репликации ДНК, а также деление клетки исключительно в условиях, благоприятных для клеточного роста [39, 78, 96, 104, 166]. Ключевую роль в контроле клеточной пролиферации играет ретинобластомный белок, регулирующий функциональную активность факторов транскрипции (E2F). Факторы транскрипции способствуют запуску процессов экспрессии белков, ответственных за механизм перехода клетки из фазы G1 в фазу S и за репликацию генома клетки. Длительность фазы репликации клеточного генома напрямую зависит от степени фосфорилирования ретинобластомного белка. В условиях нормы в клеточном матриксе происходит гиперфосфорилирование ретинобластомного белка и высвобождение Е2F для активации процессов экспрессии белков, обеспечивающих переход клетки в S-фазу клеточного цикла. При неблагоприятных условиях ретинобластомный белок продолжает находиться в гипофосфорилированном состоянии, а факторы транскрипции Е2F сохраняются в прочно связанном с белком виде, вследствие чего не происходит репликации клеточного генома. Инфицированные вирусом клетки переходят в S-фазу клеточного цикла за счет связи онкобелка Е7 с ретинобластомным белком, в результате высвобождается фактор транскрипции Е2F. Следует отметить, что такой процесс происходит вне зависимости от наличия условий для клеточного роста.

В условиях инфицирования вирусом папилломы человека механизм апоптоза, запускающийся при патологической активации S-фазы, нарушен по причине того, что белок Е6 связывает проапоптозные белки Р53 и Bak с клеточным протеином Е6АР, тем самым лишая их функциональной активности. Такой комплекс включается в процессе образования фермента, который играет роль активатора запуска механизма деградации белков р53 и Bak [65, 74, 80, 91, 113, 168, 250].

Одним из решающих моментов в цикле жизни вируса папилломы человека является встраивание вирусного генома в хромосомный аппарат клетки-хозяина, что способствует подчинению вирусу ее процессов жизнедеятельности. При интеграции ДНК вируса останавливается процесс производства всех вирусных протеинов, за исключением Е6 и Е7, что вызывает постоянную бесконтрольную пролиферацию клеток, содержащих генетически измененную информацию. Обращает на себя внимание тот факт, что онкобелок Е7 в нормальных эпителиоцитах шейки матки не синтезируется.

Эписомальная (неинтегрированная) форма ВПЧ является продуктивной контагиозной инфекцией, имеющей низкий риск развития дальнейшей цервикальной неоплазии [68]. Включение ДНК вируса в геном клетки характеризует интегрированную форму ВПЧ, способную к злокачественной трансформации [66, 90, 149, 155, 163, 164]. Возможно сочетание эписомальной и интегрированной форм [69].

Особенности иммунологических и микробиологических факторов при патологии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией

Гинекологическое исследование проводилось врачами-гинекологами городских муниципальных женских консультаций и частных медицинских центров, в частности, медицинского центра «Тонус». Рутинный визуальный осмотр с помощью влагалищного зеркала шейки матки с использованием теста с 3-5% уксусной кислотой и раствором Люголя позволяет выявить основную массу патологических состояний различной степени тяжести. Было отмечено, что цервикальная интраэпителиальная неоплазия различной степени была выявлена и у ряда пациенток при отсутствии видимых патологических изменений шейки матки.

Для обнаружения диагностически значимых микроорганизмов и/или изменений клеточной морфологии проводилось микроскопическое исследование мазков, которые окрашивались по Граму. Микроскопия проводилась световым микроскопом «Nicon» (Япония) с использованием иммерсионной системы при увеличении 1000.

При микроскопическом исследовании внимание уделялось лейкоцитарной реакции, состоянию вагинального эпителия, наличию ключевых клеток (эпителиальные клетки с адсорбированными на них грамвариабельными коккобактериями).

Важными критериями в исследовании было обнаружение дрожжеподобных грибов рода Candida, микроорганизмов – облигатных анаэробов Leptotrichia, Mobiluncus.

Цитологическая диагностика применялась во всех случаях обследования пациенток. Чувствительность цитологического метода для диагностики предраковой патологии шейки матки варьирует от 50-80% [88]. Мазки с экзо- и эндоцервикса выполняли с использованием одноразовых щеток цервиксбраш и цитобраш. Далее мазки-соскобы высушивались на воздухе и фиксировались фиксатором спреем Биофикс производства Bio Optica Milano s.p.a. Формирование устойчивой растворимой пленки обеспечивает надежное сохранение клеточного материала после окрашивания. Окрашивали препарат по методу Папаниколау с использованием набора Fast PAP, Bio Optica Milano s.p.a., предназначенного для экспресс окраски, клеток цервикального канала, всего около 2 минут.

Микроскопия проводилась световым микроскопом «Nicon» (Япония) с использованием иммерсионной системы при увеличении 1000.

Мазок по Папаниколау (Pap-тест) – один из эффективных цитологических методов скрининга папилломавирусной инфекции. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) признает цитологический скрининг, как классический метод диагностики и рекомендует его для проведения крупномасштабных национальных программ [51, 117, 119, 124, 144, 148, 216]. Существует два способа приготовления цитопрепаратов: традиционный и жидкостный. Исследование мазков по Папаниколау, полученных традиционным методом сбора материала, показывает, что только от 6,5 до 18% взятых клеток наносятся на мазок, а часть из них вследствие неравномерного распределения по стеклу труднодоступны или вовсе недоступны для микроскопии [183]. Существует мнение, что использование традиционного метода дает от 6 до 55% ложноотрицательных результатов, а по данным обзора Шабаловой И.П., чувствительность традиционного метода составляет 55-65%, а специфичность – 65-70% [183]. Основой метода жидкостной цитологии является размещение клеточного материала в транспортной жидкости, а не на стекле. Многие авторы в своих работах обращают внимание на то, что чувствительность жидкостного метода составляет 71,4-95%, специфичность – 58-76,2%, что является явным преимуществом в диагностике патологии шейки матки легкой и тяжелой степени. Кроме этого, в литературе присутствуют данные о том, что использование жидкостной цитологии сокращает на 54% количество мазков, непригодных для исследования [117, 148].

Использование ПАП-теста позволяло выявить характерный цитоморфологический признак присутствия в организме вируса папилломы человека – койлоцитоз [25, 140]. Койлоцит – это клетка многослойного плоского эпителия промежуточного типа. Койлоциты возникают вследствие репродукции вируса и представляют собой большие полигональные клетки с одним или несколькими ядрами с четко выраженной перинуклеарной зоной просветления, цитоплазма вакуолизирована. Другой типичный признак папилломавирусной инфекции — дискератоциты: мелкие поверхностные клетки многослойного плоского эпителия с гиперхромными ядрами и эозинофильной цитоплазмой [116, 149, 151]. Часто встречаются двухядерные и многоядерные клетки, а в 5% случаев поражений папилломавирусом обнаруживаются клетки с резко дистрофичными ядрами [170]. Увеличение количества койлоцитов служит признаком прогрессии патологического процесса [25, 140].

Использовались результаты прицельной биопсии, проведенной всем пациенткам на 9-10 день менструального цикла. Папилломавирусная инфекция обусловливает кератинизацию, полиморфизм и высокую митотическую активность клеток. При этом всегда присутствует койлоцитоатипия [140]. Гистологический метод не относится к скрининговым, так как используется на этапе окончательной постановки диагноза. При уточнении картины дисплазии и ВПЧ-инфицирования, особенно совместно с воспалительным процессом, характерные для патологии признаки не всегда понятны при данном виде диагностики.

Простая и расширенная кольпоскопия проводились врачами-гинекологами по общепринятой методике [162] с помощью видеокольпоскопа «Sensitec-SLC» (Китай). Данные кольпоскопических картин интерпретировались согласно Международной кольпоскопической терминологии (Рим, 1990), обновленной Международной Ассоциацией по патологии шейки матки и кольпоскопии (Барселона, 2003).

Оценка тканей при кольпоскопии основывается на различиях в цвете нормального и патологического эпителия. Состояние эпителия определяется характером подлежащих тканей, сосудов, наличием или отсутствием воспалительных процессов. Учитывается состояние сосудистого рисунка, рельеф поверхности, состояние и размер желез. Проба с 3% уксусной кислотой позволяет отличить многослойный плоский эпителий от цилиндрического, а также выявить изменения в плоском эпителии, проявляющиеся в образовании белых участков – ацетобелый эпителий. Проба Шиллера с раствором Люголя в норме дает коричневое окрашивание при нормальном созревании всех слоев плоского эпителия. Наличие неокрашенных ийоднегативных участков свидетельствует о патологии эпителиоцитов.

Микроскопические методы исследования

В группе легких дисплазий (LSIL) прослеживается четкая линейная зависимость между величиной вирусной нагрузки и состоянием биотопа влагалища: значение данного показателя тем выше, чем более выражен дисбаланс нормо- и условно-патогенной микрофлоры. В группе тяжелых дисплазий (HSIL) обнаружена сходная тенденция. Как в группе легких, так и в группе тяжелых дисплазий наибольшая вирусная нагрузка наблюдается при выраженном дисбиозе влагалища.

Результаты исследования биоценоза урогенитального тракта свидетельствуют о том, что дисбаланс в составе колонизирующих его микроорганизмов часто сопутствует цервикальному поражению, ассоциированному с папилломавирусной инфекцией, и может отражать степень его выраженности.

Состояние микробиоценоза, величина вирусной нагрузки и генотип вируса не всегда однозначно связаны с характером деструктивных поражений шейки матки при папилломавирусной инфекции. Возникновение и развитие инфекционного процесса определяется адекватностью иммунного ответа организма, в первую очередь локального иммунного ответа. Входными воротами инфекции является многослойный плоский эпителий нижних отделов урогенитального тракта, развитие и возможное прогрессирование папилломавирусной инфекции проходит там же, что объясняет целесообразность определения показателей местного иммунитета в цервикальной слизи.

В качестве исследуемого агента был выбран трансформирующий фактор роста (TGF). Трансформирующий фактор роста (TGF) является как супрессором, так и промоутером опухолевого процесса. Данный фактор участвует в остановке клеточного цикла в пораженной вирусом клетке и индуцирует ее апоптоз. Проонкогенная активность проявляется в блокировании выработки некоторых провоспалительных цитокинов, что в совокупности с особенностями жизненного цикла ВПЧ способствует нераспознаванию вируса папилломы человека иммунной системой организма-хозяина на местном уровне. При исследовании показателей трансформирующего фактора роста в цервикальной слизи были получены следующие результаты (табл.9). Таблица 9.

Наиболее высокие цифры получены в группе тяжелых дисплазий (HSIL), что в 7 и более раз превышает аналогичные в группе легких дисплазий (LSIL), цервицитов и здоровых женщин (р3,1 0,0001; р3,2 0,0001; р3,к 0,0001). Статистически значимые отличия между группами легких дисплазий, цервицитов и группой контроля не выявлены (р 0,05). Увеличение локальной продукции в цервикальной слизи трансформирующего фактора роста (TGF) следует считать аналитическим критерием тяжести поражения при эпителиальных дисплазиях. Можно предположить, что увеличение экспрессии TGF в группе тяжелых дисплазий (HSIL) способствует формированию локальной иммуносупрессии, а также служит механизмом уклонения пораженных вирусом клеток от воздействия иммунной системы. Высокие цифры трансформирующего фактора роста (TGF) могут служить одним из прогностических критериев неблагоприятного развития цервикальной патологии.

Поскольку одной из групп, отобранных для исследования, являлась группа с воспалительными заболеваниями шейки матки, в работе были рассмотрены показатели лактоферрина - острофазового белка, обладающего противовирусными и противоонкогенными свойствами. Как и трансформирующий фактор роста (TGF) – это противовоспалительный агент иммунной системы человека. Лактоферрин, препятствуя выработке цитокинов, активирующих воспаление, тормозит весь воспалительный процесс, что способствует восстановлению нормального функционирования тканей. Лактоферрин способствует созреванию Т- и В-лимфоцитов, тем самым повышая активность иммунной системы. Лактоферрин определялся в сыворотке крови испытуемых женщин (табл.10). Таблица 10. Концентрация лактоферрина в группах обследуемых женщин, нг/мл Контрольная группа Группа 1 легкие дисплазии Группа 2 тяжелые дисплазии Группа 3 цервициты 844,0±59,3 3142,3±496,8 2462,8±389,4 3543,3±646,9 Примечание: - статистически значимые отличия от контрольной группы - статистически значимые отличия от контрольной группы и группы тяжелых дисплазий Самые высокие его показатели отмечены в группе цервицитов, что статистически значимо отличается от групп контроля, тяжелых дисплазий (HSIL) (p3,k 0,0001; p3,2 0,003). Для группы легких дисплазий (LSIL) эти отличия не значимы (p=0,324). Показатели лактоферрина в группе тяжелых дисплазий (HSIL) ниже, чем в группах легких дисплазий (LSIL) и цервицитов, но выше, чем в группе контроля.

Сходные показатели лактоферрина в группах легких дисплазий (LSIL) и цервицитов объясняются тем, что в том и другом случае имеет место воспаление урогенитального тракта, нарушено нормальное функционирование многослойного плоского эпителия, создаются благоприятные условия для жизнедеятельности вируса папилломы человека. Воспалительный процесс является фактором, позволяющим отнести цервициты к группе риска по возникновению цервикальных неоплазий, а также фактором, способствующим дальнейшему прогрессированию уже имеющейся цервикальной патологии. В случае тяжелых дисплазий (HSIL) выраженная воспалительная реакция практически не наблюдается, в большинстве случаев обнаруживаются нарушения в составе микробиоценоза влагалища, вызванные присутствием уреаплазм, гарднерелел, грибов рода кандида и прочих. Наличие большого процента дисбиозов влагалища с наличием условно-патогенной и патогенной микрофлоры, вероятно, обуславливает высокие показатели лактоферрина в крови испытуемых женщин в группе тяжелых дисплазий (HSIL) относительно группы контроля, поскольку наряду со многими лактоферрин обладает и выраженными антибактериальными свойствами. Низкие цифры лактоферрина в группе тяжелых дисплазий по сравнению с группами легких дисплазий и цервицитов, возможно, связаны тем, что лактоферрин обладает иммуномодулирующей активностью в отношении клеточного звена иммунной системы, а при тяжелом цервикальном поражении наблюдается локальная иммуносупрессия. Невысокие показатели лактоферрина при тяжелых неоплазиях относительно легких неоплазий обусловлены неадекватностью иммунного ответа организма.

Деление патологии шейки матки на неоплазии (дисплазии) высокой, низкой степени и цервициты, а также наличие вариантов существования папилломавирусной инфекции (эписомальная и интегративная формы) отражают имеющиеся меж ними диагностические и биохимические границы. Таким образом, выявление факторов воспаления с одной стороны и вирусной нагрузки, онкобелков Е7, р16, трансформирующего фактора роста (TGF), дисбиотических процессов с другой, будет способствовать лучшей диагностике предраковых заболеваний шейки матки и даст возможность использовать данные маркеры, как дополнительные диагностические показатели прогноза развития цервикальных неоплазий.

Корреляционный анализ

Достаточно большой объем нашей выборки позволил ориентироваться на частную классификацию силы корреляционной связи, позволяющую определить, какого уровня значимости достигает величина коэффициента корреляции при данном количестве наблюдений. Слабая корреляционная связь между переменными может оказаться достоверной и значимой при условии наличия большого количества экспериментальных данных.

На основании уровня статистической надежности р был проведен корреляционный анализ в суммарной совокупности результатов исследований.

В работе особое внимание было уделено количественному выражению вируса папилломы человека - показателю вирусной нагрузки (табл.13).

Исследователи не пришли к единому выводу по поводу прогностической ценности и влияния величины вирусной нагрузки на тяжесть интраэпителиального поражения. В ряде работ установлена зависимость данного показателя и возникновения, течения ВПЧ-асоциированных заболеваний шейки матки от стадии легких до стадии тяжелых неоплазий и рака [Чирский В.С. и соавт., Чуруксаева О.Н., Коломиец Л.А.; Киселева В.И. и соавт].

В ходе исследования были выявлена высокая значимая корреляция между величиной вирусной нагрузки и наличием высокоонкогенных типов вируса папилломы человека 16,18 типа. Папилломавирусная инфекция, вызванная генотипами 16,18 будет характеризоваться более высокими значениями вирусной нагрузки, чем инфекция с присутствием других типов ВПЧ. 16,18 типы папилломавируса являются высокоонкогенными. Их наличие свидетельствует о вероятности будущего злокачественного течения инфекционного процесса при персистенции ВПЧ. Можно предположить, что высокое количество вирусных частиц обеспечивает вирусам папилломы человека 16,18 типа большую возможность поражения клеток многослойного плоского эпителия с последующими морфологическими изменениями ткани в целом от стадии эктопий и легких интраэпителиальных неоплазий до тяжелых неоплазий и рака шейки матки.

Корреляция между вирусной нагрузкой и моноинфекцией вируса папилломы человека имеет обратный характер: при инфицировании одним типом вируса вирусная нагрузка имеет низкие значения. Для данной пары показателей корреляционная связь будет являться значимой со знаком минус. Моноинфекция вируса папилломы человека в сочетании с низкой вирусной нагрузкой является более благоприятным фактором течения папилломавирусной инфекции, чем мультиинфицирование с высокой вирусной нагрузкой.

Состояние дисбиоза характеризуется повышенными цифрами вирусной нагрузки ВПЧ. Была отмечена положительная значимая корреляция между этими показателями. Дисбиотические процессы влагалища при наличии высоких показателей вирусной нагрузки высокоонкогенных типов вируса папилломы человека являются неблагоприятным фактором течения папилломавирусной инфекции.

В нашем исследовании достоверно доказано, что величина вирусной нагрузки не является диагностическим критерием для воспалительных заболеваний шейки матки и цервикальных неоплазий. Однако этот количественный показатель можно использовать для определения клинически значимой инфекции. Одним из признаков, характеризующих интегративную фазу папилломавирусной инфекции, является присутствие в выделенных образцах онкопротеина Е7. Если эписомальная (продуктивная) форма существования вируса считается доброкачественной, то интегрированная (непродуктивная) – первая ступень в малигнизации процесса. При внедрении генома вируса папилломы человека в геном клетки-хозяина спонтанная элиминация ВПЧ, в большом проценте случаев происходящая в репродуктивную фазу инфекции, сводится к минимуму. В работе определены коррелятивные зависимости данного показателя и других факторов, сопутствующих инфекционному процессу (табл.14).

Уровень значимости р 0,01 0,05 0,05 Высокая значимая корреляция отмечена для вирусной нагрузки и наличия онкопротеина Е7. Величина вирусной нагрузки напрямую зависит от данного показателя. Онкобелок Е7 ВПЧ 16,18 типа продуцируется в интегративную фазу папилломавирусной инфекции, соответственно, можно предположить, что увеличение количества продуцируемых копий ДНК вируса увеличивает возможность интеграции их в геном клетки-хозяина.

Между состоянием дисбиоза влагалища и присутствием в цервикальных пробах онкобелка Е7 выявлена значимая корреляция. Интегративная форма папилломавирусной инфекции выявляется чаще при нарушении нормального соотношения микрофлоры влагалища, соответственно, дисбиотические процессы могут быть показателем степени выраженности интраэпителиального поражения шейки матки.

Высокая значимая корреляция наблюдается для онкопротеина Е7 и онкобелка р16 вирусов папилломы человека 16,18 типа. Обнаружение онкопротеина Е7 в исследуемых пробах свидетельствует о внедрении ДНК вируса папилломы человека в геном клетки-хозяина, а онкомаркера р16 о бесконтрольном процессе клеточной пролиферации. Онкобелок р16 является диагностическим критерием степени развития цервикальной неоплазии. Интегративная фаза папилломавирусной инфекции в присутствии онкомаркера р16 отражает наличие злокачественного течения папилломавирусной инфекции.