Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Направление исследований (обзор литературы) 10
1.1.Адаптогены – характеристика группы и перспективы использования 10
1.2. Лимонник китайский как один из основных растительных объектов адаптогенного действия: сырьевая база, химический состав, применение .13
Заключение по главе 1 23
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования 24
2.1.Объекты исследования .24
2.2.Методы исследования 33
2.2.1. Физико-химические методы исследований .33
2.2.2. Технологические методы исследований 33
2.2.3. Биофармацевтические методы исследований 34
2.2.3.Микробиологические методы исследований 37
2.2.4.Фармакологические методы исследований 38
ГЛАВА 3. Разработка состава и технологии дерматологических форм с лимонника китайского семян со2-экстрактом 41
3.1.2.Определение основных показателей качества лимонника китайского семян СО2 – экстракта 41
3.1.3. Обоснование дозировки лимонника китайского семян СО 2 – экстракта в модельных композициях 44
3.1.4. Биофармацевтические исследования с целью выбора оптимальной основы45 3.1.5.Изучение термической и коллоидной устойчивости модельных
композиций 52
3.1.6.Оценка намазывающей и адгезионной способности геля 55
3.2.Обоснование состава компонентов и технологии производства салфеток с лимонника китайского семян СО2 – экстрактом 63
3.2.1.Выбор материала–носителя и способа нанесения экстракта семян лимонника 63
3.2.2.Выбор состава вспомогательных веществ для салфеток с лимонника китайского семян СО2 – экстрактом .66
Заключение по главе 3 71
ГЛАВА 4 . Разработка показателей качества геля и салфеток с лимонника китайского семян СО2 – экстрактом
4.1.Установление критериев подлинности геля с лимонника китайского семян СО2 – экстрактом 72
4.2. Количественное определение действующих веществ в геле, содержащем лимонника китайского семян СО2 – экстракт 74
4.3. Определение стабильности геля и сроков его хранения 80
4.4.Установление критериев подлинности салфеток с СО2 - экстрактом семян лимонника китайского 82
4.5.Количественное определение действующих веществ в салфетках с лимонника китайского семян СО2 – экстрактом.. 82
4.5. Определение стабильности салфеток и сроков их хранения 88
Заключение по главе 4 .90
ГЛАВА 5. Фармакологические исследования геля и салфеток с лимонника китайского семян СО2 – экстрактом .91
5.1.Установление антиоксидантной активности геля с лимонника китайского семян СО2 – экстрактом .91
5.2.Влияние геля с СО2 – экстрактом семян лимонника китайского на физическую работоспособность и неврологический статус животных при разовом моделировании физической и психоэмоциональной нагрузки 92
5.3. Изучение общетоксического действия геля и салфеток, содержащих лимонника китайского семян СО2 – экстракт 99
5.4.Исследование местнораздражающего действия дерматологических форм лимонника, содержащих СО2 – экстракт семян лимонника китайского .100
Заключение по главе 5 104
Общее заключение .105
Список сокращений 107
Список литературы
- Лимонник китайский как один из основных растительных объектов адаптогенного действия: сырьевая база, химический состав, применение
- Технологические методы исследований
- Обоснование дозировки лимонника китайского семян СО 2 – экстракта в модельных композициях
- Количественное определение действующих веществ в геле, содержащем лимонника китайского семян СО2 – экстракт
Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время актуальным вопросом, который должен решаться современной медициной, является увеличение числа различных астенических расстройств, чаще всего связанных с нарушениями адаптации организма к психоэмоциональным и физическим нагрузкам.
В фармакотерапии этих состояний значительную роль играет
назначение препаратов, восстанавливающих регуляторные функции
организма, к числу которых относятся адаптогены. Перспективным
представителем последних является лимонник китайский. Его
фармакологически активные вещества, по химической структуре
представляющие собой флавонолигнаны, обладают адаптогенной,
ноотропоной, антиоксидантной, актопротекторной активностью.
Исследования последних лет доказали их положительное влияние на углеводный обмен. Имеются обнадеживающие результаты применения лекарственных препаратов лимонника китайского и биологически активных добавок, содержащих экстракты его плодов или семян, для профилактики развития астенических или астеноподобных состояний у студентов, спортсменов, военных и лиц, чья деятельность связана с вредными или опасными условиями труда.
Однако на сегодняшний день на российском рынке лекарственные препараты лимонника китайского зарегистрированы только в форме настойки, применение которой осложнено для некоторых категорий потребителей (спортсмены, водители) из-за наличия в ее составе спирта этилового. Ассортимент биологически активных добавок к пище на основе сырья лимонника или его экстрактов несколько шире, хотя все они предназначены для перорального применения.
Отсутствие широкого ассортимента лекарственных форм лимонника можно объяснить несовершенством технологических решений в процессе экстракции сырья. В настоящее время этот вопрос можно решить, используя
ее современные варианты, в частности, экстракцию сжиженным диоксидом углерода в сверхкритических условиях. Что касается эффективности и безопасности современных лекарственных средств, содержащих лимонник китайский, то они обладают определенными побочными действиями на ЖКТ, поэтому создание наиболее рациональных лекарственных форм на базе лимонника китайского - вопрос чрезвычайно важный.
Степень разработанности темы. Фармакологические свойства препаратов лимонника китайского исследовались отечественными учеными с 50 годов ХХ века. Еще в 70 годах прошлого столетия была обозначена проблема выбора рациональной лекарственной формы для препаратов лимонника китайского. Несмотря на то, что отечественными учеными (Шиков А.Н., Куркин В.А., Садтарова Ф.Ш.) в последние десятилетия проводились многочисленные исследования, посвященные решению этой проблемы, на сегодняшний день зарегистрирована только настойка лимонника. Имеются сведения о перспективности трансдермального введения лекарственных веществ природного происхождения, однако лигнаны лимонника китайского в этом отношении не изучались.
Цель и задачи исследования. Разработка состава, оптимальной технологии, и стандартизация лекарственных форм лимонника китайского в виде трансдермального геля и салфеток для аппликаций, содержащих лимонника китайского семян СО 2 - экстракт, подтверждение их фармакологической активности.
Данная цель была конкретизирована следующими задачами:
Провести качественный и количественный анализ лимонника китайского семян СО2 - экстракта как полупродукта для введения в состав композиций.
Подтвердить возможность трансдермального проникновения из СО 2 -экстракта семян лимонника китайского комплекса фармакологически активных веществ.
Разработать состав трансдермального геля и салфеток для аппликаций, содержащих лимонника китайского семян СО2-экстракт на основании результатов биофамацевтических исследований in vitro.
Разработать технологию и предложить оптимальную технологическую схему производства трансдермального геля и салфеток для аппликаций, содержащих лимонника китайского семян СОг– экстракт.
Определить показатели качества для разрабатываемых составов.
Разработать методики анализа, провести их валидацию.
Установить сроки годности трансдермального геля и салфеток для аппликаций, содержащих лимонника китайского семян СО2- экстракт.
Провести их предварительные фармакологические исследования.
Научная новизна. На основании био фармацевтических, технологических и фармакологических, исследований предложен состав и рациональная технология трансдермального геля и салфеток для аппликаций, содержащих лимонника китайского семян СО2 - экстракт. Разработаны методики качественного и количественного анализа предлагаемых композиций, выполнена их валидация. Проведена оценка качества и установлены сроки годности для геля и салфеток. Впервые проведены фармакологические исследования трансдермального геля, содержащего лимонника китайского семян СО2 - экстракт и подтверждена его адаптогенная активность. Установлено отсутствие токсического и местнораздражающего действия как для трансдермального геля, так и для салфеток, содержащих лимонника китайского семян СОг - экстракт.
Теоретическая и практическая значимость работы. Полученный экспериментальный материал послужил основанием для создания геля и салфеток с лимонника китайского семян СО2 - экстрактом. На разработанные композиции составлены и утверждены нормативные документы в виде технологических инструкций и технических условий (ТИ и ТУ) на производство геля и салфеток для ООО НПФ «ФИТЭКО», г. Ростов-на-Дону.
Технологическая апробация разработанных составов подтверждена
соответствующими актами на фармацевтическом предприятии «ФИТЭКО», г.Ростов-на-Дону.
Полученные в диссертационной работе данные включены в учебно-методические материалы кафедры технологии лекарственных форм и организации фармацевтического дела ФГБОУ ВПО «Северо-Осетинский государственный университет им. К.Л. Хетагурова», г. Владикавказ, кафедры технологии лекарств ПМФИ – филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России.
Методология и методы исследований. В диссертационном
исследовании использованы технологические, биофармацевтические,
физико-химические, фармакологические, микробиологические и
статистические методы. Методология исследования базируется на основных технологических и биофармацевтических условиях разработки мягких и аппретированных композиций. Рассмотрены возможности их использования в целях резорбтивного действия для коррекции дезадаптационных расстройств.
Положения, выносимые на защиту:
-
Результаты биофармацевтических и технологических исследований по выбору оптимального состава геля трансдермального и салфеток для аппликаций, содержащих лимонника китайского семян СО2- экстракт.
-
Технологические схемы производства разрабатываемых составов.
-
Результаты исследований по выбору оптимальных методов анализа геля трандермального и салфеток для аппликаций, содержащих лимонника китайского семян СО2 – экстракт.
-
Доказательства адаптогенной и антиоксидантной активности предлагаемых композиций.
Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов достигается благодаря использованию современных
технологических, биофармацевтических, химических, физико- химических и биологических методов, позволяющих получать воспроизводимые и однозначные результаты. Результаты измерений обработаны с применением математических методов и статистически значимы.
Основные положения работы доложены на 8 конференциях, по результатам опубликовано 15 печатных работ, из них 3–в изданиях, рекомендованных ВАК.
Личный вклад автора. Включает в себя сбор информации и обоснование темы диссертационной работы, публикации, выступления на научных конференциях. Все экспериментальные фрагменты диссертации выполнялись при личном участии. Из этого следует, что личный вклад при выполнении диссертационной работы составил не менее 85%.
Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 111 страницах машинописного текста, содержит 26 таблиц, 17 рисунков и 4 формулы, состоит из «Введения», обзора литературы (1 глава), 1 главы, посвященной объектам и методам исследований, 3 глав собственных исследований, заключения, списка сокращений, списка литературы и приложения. Список литературы включает 108 источников, в том числе 12 иностранных.
Лимонник китайский как один из основных растительных объектов адаптогенного действия: сырьевая база, химический состав, применение
В последние годы в фармацевтической, косметической, пищевой, химической промышленности часто используют экстракцию сжиженным диоксидом углерода, что позволяет извлечь из сырья комплекс биологически активных веществ в нативном виде. Вязкость жидкого углекислого газа в 14 раз меньше вязкости воды, в 5 раз – этилового спирта, а температура кипения лежит в пределах от – 56,6 до +310С, что обеспечивает хорошие диффузионные свойства этого экстрагента и позволяет быстро удалить его из вытяжек при незначительном повышении температуры. Углекислый газ хорошо извлекает из сырья жирные и эфирные масла, соединения флавоноидной природы, жирорастворимые витамины, сесквитерпены; несколько хуже – растительные смолы, воски, жироподобные вещества. При грамотном выборе условий СО2 – экстракт может содержать весь комплекс биологически активных веществ, извлеченных из сырья в нативном виде. Доказано, что такие экстракты обладают выраженной антибактериальной активностью и могут использоваться, как природные консерванты. Следует также отметить, что экстрагирование сырья сжиженными газами экономически выгодно (препараты достаточно концентрированные) и экологически безопасно.
СО2- экстракт семян лимонника китайского применяется в косметической и пищевой промышленности. Изучен его химический состав, выделены и идентифицированы лигнаны (схизандрин, - схизандрин, деоксисхизандрин); жирные кислоты, терпеноиды, витамины, фитостерины, эфирное масло, содержащее сесквитерпены – сквален, лимонен. В составе экстракта содержатся также воскообразные соединения.
Экстракт семян лимонника китайского, полученный с применением сжиженного углекислого газа, в мягких желатиновых капсулах был зарегистрирован под торговым наименованием «Схизатон» как адаптогенное средство, обладающее доказанной антиоксидантной активностью. Препарат не прошел процедуру перерегистрации, однако успешный опыт его применения позволяет сделать вывод о перспективности использования СО2– экстракта лимонника для производства лекарственных средств и биологически активных добавок к пище. Проводились исследования, доказавшие отсутствие токсичности этой субстанции, в том числе на клеточном уровне[66].
Все остальные препараты лимонника китайского также практически не обладают токсическим действием. Длительное их введение не вызывает истощения ЦНС, привыкания, синдрома отмены, они не относятся к числу допинговых, и могут применяться в спортивной медицине [105,68,67,70]. Немногочисленные побочные эффекты все же имеются. К их числу можно отнести раздражающее действие на ЖКТ[62], которое, однако, способен нивелировать грамотный выбор формы выпуска. В последние годы внимание исследователей все чаще привлекает трансдермальный путь введения биологически активных веществ, в том числе и растительного происхождения.
На сегодняшний день одной из задач фармацевтической науки является разработка новых лекарственных форм для веществ как синтетического, так и природного происхождения. Перспективен трансдермальный путь введения, обеспечивающий поступление биологически активных веществ непосредственно в системный кровоток, и, зачастую, не уступающий по эффективности внутривенной инфузии. Доставка лекарственных веществ через неповрежденный кожный покров, по сравнению с пероральным введением, обеспечивает быстрое наступление терапевтического эффекта и отсутствие раздражающего действия на желудочно-кишечный тракт. Трансдермальное введение препаратов получило достаточно широкое распространение для получения резорбтивного действия лекарственных средств[10].
Несмотря на эти преимущества, на сегодняшний день трансдермальные лекарственные формы представлены на российском рынке недостаточно широко. В терапевтической практике они применяются в форме гелей и пластырей, содержащих эстрогенные и андрогенные гормоны, нестероидные противовоспалительные средства, анестетики, анальгетики, никотин. Все они выпускаются зарубежными производителями. Оригинальные трансдермальные препараты российского производства на сегодняшний день, к сожалению, не зарегистрированы[27].
Помимо гелей и пластырей на российском фармацевтическом рынке присутствуют салфетки для аппликаций, содержащие активные фармацевтические субстанции (5-фторурацил, деринат, прополис, метронидазол, мочевину). Салфетки не крепятся к коже пациента, поэтому риск возникновения раздражения кожи сведен к минимуму. Как форма выпуска препаратов системного действия, салфетки практически не изучены, но не безынтересны[6,10,13,30]. Отечественными учеными проводятся исследования в области обоснования состава и технологии трансдермальных лекарственных форм, содержащих различные субстанции. В последние годы в состав трансдермальных терапевтических систем вводят фитокомпоненты. Так, разработана технология лекарственных пленок, трансдермальных систем доставки, содержащих алкалоиды аконита. В.А. Куркиным и соавторами доказана способность к трансдермальному проникновению фенилпропаноидов родиолы розовой, эхинацеи пурпурной, расторопши пятнистой. Флавонолигнаны расторопши как перспективные объекты для трансдермальной доставки подробно изучены в работе Е.А. Мориной, которой был разработан состав и технология матриксных ТТС, содержащих флавонолигнаны силикристин и силимарин[36,45,50,57].
Это позволяет предположить, что основные действующие вещества лимонника китайского, с химической точки зрения представляющие собой лигнаны, способны к проникновению через неповрежденный кожный покров. Рассмотрим основные физико-химические свойства лекарственных веществ, позволяющие включить их в состав трансдермальных препаратов, а также механизмы их переноса через кожный барьер.
Технологические методы исследований
Изучение характера изменений состояния основных звеньев антиоксидантной системы в различных тканях, сыворотке крови и эритроцитах при индукции свободнорадикальной патологии проводится в условиях воспроизведения стандартных фармакологических моделей[68]. В качестве таких моделей обычно используют: аллоксан-модифицированный сахарный диабет, повреждение печени четыреххлористым углеродом, ульцерогенное повреждение желудка.
Далее в биологических жидкостях и тканях проводят оценку антиоксидантного статуса организма. При этом принято выделять три главных звена АОС: . антирадикальные и антиперекисные ферменты (супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза и другие пероксидазы); система глутатиона и связанных с ним биоантиоксидантов: глутатион (восстановленный и окисленный), ферменты, участвующие в его метаболизме (глутатион-8-трансфераза, глутатионредуктаза, глутатиондегидроаскорбатредуктаза, а такжемочевая кислота, аскорбиновая кислота и ее формы, токоферолы, полифенолы, каротиноиды, ретинол и др.; . ферменты, участвующие в восстановлении НАДФ+до НАДФ Н (глюкозо-6 фосфатдегидрогеназа, декарбоксилирующая малатдегидрогеназа, изоцитратдегидрогеназа и др.). Определение каталазной активности. Оценку активности каталазы осуществляют по скорости снижения концентрации перекиси водорода в инкубационной среде. Регистрация осуществляется спектрофотометрически при длине волны 230 нм.
Определение супероксиддисмутазной активности. Генерацию супероксиданион-радикала осуществляют в ксантин-ксантиноксидазной реакции. Ксантиноксидаза в присутствии кислорода воздуха катализирует реакцию окисления ксантина с образованием О2 Супероксид анион-радикал вступая в реакцию с паранитрофенилтетразолием хлоридом, образует окрашенное в красный цвет соединение формазан с максимумом поглощения 540 нм [76]. Оценка выносливости и психоэмоционального состояния лабораторных животных
Исследование проведено на 132 крысах - самцах линии Wistar массой 200-230 грамм. Первый этап исследования проводился на 72 крысах и включал оценку выносливости и скоростно - силовых характеристик экспериментальных животных при однократном воспроизведении физической нагрузки на модели «челночного плавания» [15] без дополнительного отягощения. Данное исследование проводилось на 36 крысах, разделенных на 3 равные экспериментальные группы с использованием установки, представляющей собой прямоугольный бассейн размерами 1200х200х350 мм, заполненный десатурированной водой, температурой 15 С. Животное помещали в «зону старта» и одновременно с началом его движения в сторону «зоны финиша» включали секундомер. По достижении «зоны финиша» животное незамедлительно перемещали обратно в «зону старта». Заплыв повторялся. Критерием прекращения эксперимента является отказ животного плыть в заданном направлении, либо время преодоления дистанции превышало, 60 сек. Все экспериментальные животные предварительно проходили обучение плаванию на протяжении 3-х дней. При воспроизведении данной методики фиксировали: максимальное преодоленное расстояние (S, м), максимальное время плавания (t, сек), скорость плавания животного (V, м/сек), расстояние, преодоленное, за 60 сек. (S60). Также рассчитывали коэффициент усталости (Куст) равный отношению максимального времени плавания к максимальному преодоленному расстоянию. Кроме того выносливость экспериментальных животных (36 особей, разделенных на 3 группы) при однократных физических нагрузках оценивали на модели «принудительного плавания» с 20% нагрузкой от массы тела животного [1].
Второй этап исследования заключался в оценке выносливости и психоэмоционального состояния экспериментальных животных в условиях длительных истощающих физических нагрузок. На данном этапе эксперимента использовались 60 крыс, распределенных на 3 группы по 20 особей. Оценку выносливости животных проводили на модели «принудительного плавания» с 20% нагрузкой от массы тела животного [14]. «Оценку психоэмоционального статуса проводили до (исходные показатели) и после моделирования физической нагрузки в тестах «открытое поле» [Установка «Открытое поле» (НПК Открытая Наука, Россия)] и «приподнятый крестообразный лабиринт» («ПКЛ») [14].
Результаты опытов обрабатывали методом вариационной статистики. Вычисляли среднее значение и стандартную ошибку среднего значения. Полученные данные представляли в виде M+m, где M- среднее значение; m-стандартная ошибка среднего значения. Достоверность отличий между средними в различных группах опытов находили при помощи t-критерия Стьюдента
Обоснование дозировки лимонника китайского семян СО 2 – экстракта в модельных композициях
Как видно из данных, представленных на рисунке, оптимальным пенетрирующим компонентом для данной мазевой композиции является пропилегликоль-1,2 в концентрации 1,5%.
На следующем этапе исследования изготавливали модельные композиции на базе «классической» полиэтиленоксидной основы, содержащие СО2 - экстракт семян лимонника, в различной концентрации. Качество полученных составов оценивали визуально. При этом отмечали, что при введении экстракта семян лимонника в концентрации до 20% не наблюдается расслаивания геля и не требуется введения эмульгаторов.
На стеклянную пластинку помещали навеску геля массой 0,5 г, сверху покрывали второй пластинкой, на которую помещали груз. Измеряли диаметр образовавшегося под воздействием груза пятна изучаемого геля, который был тем больше, чем лучше намазывающая способность геля. Проводили 6 измерений. Диаметр пятна составил 7,9+0,04%, что указывает на удовлетворительную намазывающую способность геля. Прилипающую способность изучаемой композиции оценивали следующим образом. Наносили навеску геля массой около 0,5 г на фалангу пальца и оставляли отпечатки на целлофане до полного их исчезновения, после чего поверхность пленки обрабатывали белой глиной, подсчитывали проявившиеся отпечатки. Результат составил 23,8+0,02%, что позволяет сделать вывод о хорошей прилипающей способности геля.
Изучение структурно-механических свойств мазей (собственно мазей, гелей, кремов) особенно важно на этапе разработки их состава и технологии, эти показатели оказывают значительное влияние на терапевтическую эффективность, стабильность при хранении, способность легко выдавливаться из туб и распределяться по коже, определяя не только терапевтические, но и потребительские свойства препарата [11, 26, 90].
Оценку реологических параметров исследуемого геля проводили при помощи ротационного вискозиметра FUNGILAB S.A. V.1.1 (TYPE: ALPHA Series; CODE: V100002; SERIAL: ALPR100001, Барселона, Испания), принцип действия которого основан на измерении момента кручения вращающегося шпинделя в образце при заданной скорости.
Перед заполнением анализируемой пробой контейнер циркуляционной ячейки адаптера APM тщательно протирался спиртоэфирной смесью и высушивался; образцы геля (n=6) термостатировались в течение получаса при температуре 20С. Тип коаксильного шпинделя и объем исследуемой пробы подбирались согласно таблицам-приложениям к прибору и экспериментально. Анализ проводили с использованием 15 последовательно увеличивающихся скоростей вращения шпинделя (об/мин; прямой ход). Разрушение структуры изучаемой мази проводили путем вращения шпинделя в измерительном устройстве на максимальной скорости в течение 10 минут, после чего, остановив вращение прибора на 10 минут, регистрировали показания индикатора на каждой из 15 скоростей шпинделя при их уменьшении (обратный ход).
Измерения считали состоявшимися, только после того, как шпиндель совершал пять оборотов в связи с тем, что для стабилизации показаний требуется некоторое время. Изучение реологических свойств геля проводилось при строгом условии ламинарного течения жидкости, так как при ламинарном течении все частицы жидкости расположены в слоях, движущихся под действием внешней приложенной силы (турбулентное течение жидкости не допускается)[4].
Основные результаты проведенного эксперимента по изучению структурно-механических свойств разработанного геля, а также расчетные формулы скорости сдвига и напряжения сдвига приведены в таблице 6.
Таблица 6 – Результаты изучения реологических свойств геля с лимонника китайского семян СО2 -экстрактом
Скорость Скорость сдвига, у, с" (0,28 XRPM) Восходящая Нисходящая вращенияшпинделя,RPM / SP Напряжение сдвига, Ск=цху) Вязкость, т,, mPaxsh Напряжение сдвига, Ск=цху) Вязкость, Ч, mPaxsh Примечание: - коэффициент для используемого шпинделя TR-10, объем пробы 11,0 мл; - значение закручивания пружины для всех измерений находилось в интервале 15-100 %;- – напряжение сдвига;- – вязкость;- у – скорость сдвига.
Данные, представленные в таблице 6, указывают на увеличение предельного напряжения сдвига и уменьшение эффективной вязкости под воздействием возрастающих сил деформации, что является свидетельством наличия структуры в исследуемом образце [4].
Далее для изучения тиксотропных свойств геля на основании экспериментальных данных строились кривые зависимости скорости сдвига от напряжения сдвига (кривая течения, рисунок 7) и скорости сдвига от вязкости (кривая вязкости, рисунок 8).
Полученная кривая на рисунке 7 свидетельствует о том, что нисходящая (прямой ход) располагаясь над восходящей (обратный ход) образуют петлю гистерезиса, характерную для структурированных систем и указывающую на то, что исследуемый гель обладает тиксотропными свойствами, наличие последних, в свою очередь, характеризует способность дерматологической формы к намазываемости, выдавливанию из туб и другие потребительские свойства. Площадь и форма петли гистерезиса указывает на способность геля к восстановлению структуры после механического воздействия, сохранению формы и также технологичности разрабатываемого состава [4].
Количественное определение действующих веществ в геле, содержащем лимонника китайского семян СО2 – экстракт
Первоначальная продолжительность плавания группы крыс, которым наносили гель лимонника, составляла, 255,6+22,580 сек. и статистически значимо не отличалась от таковой у контрольных крыс. Как видно из графика, представленного на рисунке работоспособность данной группы крыс изменялась вариабельно. Так с 1-го по 3-й день эксперимента продолжительность плавания имела тенденцию к снижению. Затем с 4-го по 7-й день плавания с 20% нагрузкой работоспособность крыс, которым наносили гель лимонника, практически линейно повышалась и достигла максимального значения к 7-му дню эксперимента. Относительно исходного значения время плавания данной группы крыс увеличилось на 36,7%. Затем наблюдался спад физической активности. Однако изменения продолжительности плавания носили менее выраженный характер, чем у контрольной группы крыс и животных, получавших гель «Мексидол». Относительно дня пиковой активности работоспособность данной группы животных уменьшилась лишь на 52,9%, в то же время по сравнению с контрольной группой животных и крысами, которым наносили гель сравнения, наблюдалось повышение физической активности на 34,6% и 13,7% соответственно. К концу эксперимента продолжительность плавания группы крыс, получавших гель лимонника, снизилась относительно первоначального значения лишь на 19,6%.
Таким образом, оба исследуемых геля способствуют сохранению физической активности животных при длительных истощающих нагрузках. При этом лидером по данному виду фармакологической активности являлся гель лимонника.
При оценке неврологического статуса установлено, что у контрольной группы животных на фоне истощающих физических и психоэмоциональных нагрузок в тесте «открытое поле» наблюдалось снижение локомоторной и ориентировочно-исследовательской активности на 54,8% и 66,7% соответственно. Также отмечено угнетение неврологического статуса, что нашло отражение в увеличении продолжительности груминга в 2,3 раза. Данные полученные в тесте «ПКЛ» коррерировали с данными «открытого поля». Отмечено увеличение времени пребывания животных контрольной группы в закрытых рукавах «ПКЛ» на 20,3%., что может свидетельствовать о повышении уровня тревожности [14]. Кроме того наблюдалось снижение двигательной активности на 47,9% и числа вертикальных стоек в 1,7 раза, что может свидетельствовать о развитии мышечного утомления и психоневрологического дефицита у контрольной группы крыс [15]. У группы животных, которым наносили гель «Мексидол» относительно контрольной группы на 11-й день эксперимента локомоторная активность в тесте «открытое поле» увеличилась на 27,9%. Вертикальная исследовательская активность у данной группы также была выше, чем у контрольных крыс на 85,7%. Продолжительность груминга, напротив, была ниже относительно контрольной группы животных на 41,2%.
В тесте «ПКЛ» у данных крыс также отмечалось снижение уровня тревожности по сравнению с контрольной группой в 2,1 раза. Кроме того наблюдалось увеличение количества вертикальных стоек на 14,6%и свешиваний на 42,7%. Экспериментальные животные, которым ежедневно наносили гель лимонника в тестах «открытое поле» и «ПКЛ» были значительно более активны, чем животные группы контроля. В тесте «открытое поле» относительно группы контроля отмечено увеличение локомоции на 25,5%, ориентировочно - исследовательской активности в 1,9 раза, уменьшение продолжительности груминга в 1,06 раза. В тесте «ПКЛ» у данных крыс наблюдалось увеличение времени пребывания в открытых рукавах на 15,9% относительно контрольной группы крыс. Также отмечено уменьшение продолжительности груминга в 1,2 раза и времени пребывания в закрытых рукавах «ПКЛ» на 20,7%, что может свидетельствовать об уменьшении уровня тревожности [9] при длительном нанесении геля лимонника.
Таким образом, применение исследуемых гелей на фоне длительных истощающих нагрузок способствовало сохранению физической, ориентировочно - исследовательской активности и уровня тревожности практически на неизменном уровне.
В связи с тем, что обязательным тестом безопасности использования препаратов назначаемых наружно, является изучение общетоксического действия, включающего определение острой токсичности и местнораздражающего действия, для препаратов лечебно-профилактического действия разработаны тесты на выявление кожно-резорбтивного токсического, кожно-раздражающего и сенсибилизирующего эффекта, которые выполняются согласно МУ 2102-79 МЗСССР от 01.11.79.
Острую токсичность геля и салфеток определяли на 20 белых беспородных крысах обоего пола [54]. 10 см2. Гель накладывали тонким равномерным слоем. Салфетки наносили однослойно с концентрацией действующих веществ в дозе 10 г/кг массы животного, что в десять раз превышает дозы препарата, применяемого в медицине[38], фиксируя их коже с помощью лейкопластыря на 5-7 минут. Контролем служили животные, кожа которых обрабатывалась в той же дозе вазелиновым маслом. О степени токсичности препаратов судили по изменению общего состояния животных (внешний вид, поведенческая реакция, активность, частота дыхания, состояние рефлекторной деятельности, пробы на болевое раздражение, потребление пищи) и гибели животных. Общая длительность наблюдения составила 14 дней. При однократном применении геля и салфеток гибели животных не наблюдали, что позволяет отнести их к практически нетоксичным препаратам При этом у животных снимали шерстяной покров на поверхности спины площадью