Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 19
1.1 Этиология и патогенез хронической венозной недостаточности и тромботических заболеваний у женщин репродуктивного возраста 19
1.2 Современные методы лечения хронической венозной недостаточности и тромботических осложнений 24
1.3 Фармакологические свойства и клиническое применение субтилизинов. 29
1.4 Фармакологические свойства и клиническое применение иммобилизированных субтилизинов 43
1.5 Применение иммобилизированных субтилизинов в клинической практике 49
1.6 Современные требования по безопасности применения лекарственных препаратов у женщин репродуктивного возраста 55
Глава 2 Материал и методы исследования 56
2.1 Сведения об исследуемом лекарственном средстве 56
2.2 Исследование репродуктивной токсичности иммобилизированных субтилизинов 58
2.2.1 Влияние лекарственного средства на антенатальный период развития потомства 59
2.2.2 Влияние лекарственного средства на постнатальный период развития потомства 61
2.2.3 Влияние лекарственного средства на генеративную функцию исследуемых животных (на стадиях прогенеза) 62
2.3 Исследование мутагенной активности иммобилизированных субтилизинов 63
2.3.1 Реактивы 64
2.3.2 Основные приборы и материалы 65
2.3.3 Экспериментальные животные 65
2.4 Исследование эффективности и переносимости лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов у женщин с хронической венозной недостаточностью, возникшей на фоне приёма комбинированных оральных контрацептивов 69
2.4.1 Дизайн исследования 69
2.4.2 Общеклиническое и гинекологическое исследования 73
2.4.3 Микробиологическое исследование 73
2.4.4 Ультразвуковое исследование 74
2.4.5 Биохимическое исследование 76
2.4.6 Методика оценки качества жизни 77
2.5 Статистическая обработка материалов исследования 82
Глава 3 Результаты собственных исследований 84
3.1 Исследование репродуктивной токсичности лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов 84
3.1.1 Влияние лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов на антенатальный период развития потомства 84
3.1.2 Влияние лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов на постнатальный период развития потомств 92
3.1.3 Влияние лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов на генеративную функцию исследуемых животных на стадиях прогенеза 101
3.1.3.1 Изучение влияния лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов на генеративную функцию крыс-самок. 101
3.1.3.2 Изучение влияния лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов на генеративную функцию крыс-самцов 104
3.2 Исследование мутагенной активности лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов 107
3.3 Характеристика пациенток с хронической венозной недостаточностью, возникшей на фоне приёма комбинированных оральных контрацептивов. 113
3.3.1 Клиническая характеристика пациенток с хронической венозной недостаточностью 113
3.3.2 Показатели биохимического исследования 119
3.3.3 Показатели системы гемостаза 120
3.3.4 Показатели ультразвукового исследования 130
3.4 Исследование эффективности и переносимости лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов у женщин с хронической венозной недостаточностью, возникшей на фоне приёма комбинированных оральных контрацептивов 135
3.5 Исследование эффективности лекарственного препарата на основе диосмина у женщин с хронической венозной недостаточностью, возникшей на фоне приёма комбинированных оральных контрацептивов 144
3.6 Оценка безопасности 148
Глава 4 Обсуждение полученных результатов 149
4.1 Материалы исследований по изучению репродуктивной токсичности лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов . 149
4.2 Материалы исследований по изучению возможной мутагенности лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов. 157
4.3 Результаты исследований по изучению клинической эффективности и безопасности лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов у женщин с хронической венозной недостаточностью, возникшей на фоне приёма комбинированных оральных контрацептивов. 158
Выводы 160
Практические рекомендации 161
Список сокращений и условных обозначений 162
Список литературы 163
Список иллюстративного материала 178
Приложение А (справочное) Опросник – Оценка качества жизни пациента c хронической венозной недостаточностью (CIVIQ – Chronic Venous Insufficiency Questionnaire) 184
- Современные методы лечения хронической венозной недостаточности и тромботических осложнений
- Влияние лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов на антенатальный период развития потомства
- Исследование эффективности и переносимости лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов у женщин с хронической венозной недостаточностью, возникшей на фоне приёма комбинированных оральных контрацептивов
- Материалы исследований по изучению репродуктивной токсичности лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов
Современные методы лечения хронической венозной недостаточности и тромботических осложнений
Анализируя вышеперечисленные обстоятельства, можно смело считать, что женщина, принимающая КОК, оказывается в достаточно опасной, порой даже, жизнеугрожающей ситуации. Принимая во внимание приверженность гинекологов к назначению КОК, было бы совершенно уместно ожидать от них варианты лечения и профилактики эстроген-индуцированных тромботических заболеваний и ХВН. Причём, их лечение должно быть, по возможности, таким же простым и комплаентным, как и применение КОК. Однако, в настоящее время такой фармакологической технологии в арсенале гинекологов нет. В случае возникновения ХВН широко используются только венотонические препараты (флеботоники) и компрессионный трикотаж. Надо отдать должное активности сосудистых хирургов, ими предложены многие способы применения этих препаратов у женщин с осложнениями приёма КОК [26; 47]. Все флеботоники обладают очень схожими фармакологическими эффектами, поскольку представляют собой биофлавоноидные фракции с венотонизирующей и антиоксидантной активностью. Флеботоники хорошо переносятся больными, удобны в применении, но у них нет значимого противовоспалительного эффекта, они не влияют на реологические свойства крови, не обладают антикоагулянтным и тромболитическим действием. Их применение не отслеживает всех патогенетических звеньев развития ХВН и тромботических осложнений. Как правило, в случае возникновения тяжёлых форм ХВН, лечение становится комплексным с включением в состав терапии противовоспалительных и реологически активных препаратов, а это, в свою очередь, увеличивает вероятность дополнительных осложнений, свойственных этим группам препаратов. Когда у женщины, принимающей КОК возникает тромботическое осложнение, то лечебная тактика становится многокомпонентной с применением достаточно мощной антикоагулянтной, антизагрегационной терапии, вплоть до хирургических вмешательств. Таким образом, сложившаяся практика лечения эстрогениндуцированной ХВН и тромботических осложнений далека от совершенства, обходится дорого для женщин в прямом и переносном смысле, и тем самым, существенно уменьшает приверженность приёму КОК.
Между тем, на фармацевтическом рынке есть новый оригинальный отечественный лекарственный препарат Тромбовазим, который по своим фармакологическим свойствам практически идеально подходит для лечения эстрогениндуцированных ХВН и тромботических осложнений. В качестве активного фармакологического агента в Тромбовазиме используется протеолитический фермент субтилизин. Применение субтилизинов в медицине со времени их углублённого изучения выглядело очень перспективно, и по мере нарастания объёма научно-исследовательской информации о них, расширялись перспективы их применения в клинической практике [43; 58; 77]. Субтилизины практически идеальные тромболитики, за счёт того, что они осуществляют протеолиз только тех белков, которые утратили свою нативную структуру, либо вследствие полимеризации, как фибрин, либо вследствие разрушения химического строения, как детрит клеточных белков. Более того, уникальные свойства субтилизинов исключают протеолиз факторов свёртывания крови, что делает их введение в организм безопасным с позиции риска геморрагического синдрома.
Проблема терапевтически значимой энтеральной биодоступности субтилизинов была решена посредством электронно-лучевой модификации, заключающейся в пегилировании молекулы белка с помощью потока ускоренных электронов [7; 11; 23; 29; 50]. Схематично данную технологию можно представить, как точечное прикрепление к глобуле белка «ворсинок» полиэтиленгликоля (ПЭГ) за счёт образования карбонильной группировки на молекуле ПЭГ и аминной группировки на молекуле белка. Таким образом, возникает химическая связь – основание Шиффа, индуцированное одномоментным радикало-образованием под воздействием потока ускоренных электронов. Поскольку ПЭГ обладает высокой степенью гидрофильности, у пегилированного белка появляются принципиально новые физико-химические свойства. Одна молекула ПЭГ способна связывать 2–3 молекулы воды, при присоединении нескольких молекул ПЭГ, формируется «водное облако» вокруг пегилированной молекулы белка, тем самым увеличивая ее гидродинамический радиус. В результате существенно повышается растворимость и биодоступность модифицированной белковой молекулы. Молекулы ПЭГ защищают белок от опсонизирующих факторов и фагоцитоза, обеспечивая «невидимость» для системы мононуклеарных фагоцитов, иммуноглобулинов и факторов комплимента за счет перекрытия антигенных детерминант. По технологии электронно-лучевого пегилирования в настоящий момент производится единственный лекарственный препарат – Тромбовазим (ЗАО «Сибирский центр фармакологии и биотехнологии», г. Новосибирск). В радиационной химии существует узаконенный термин – электронно-лучевая иммобилизация, поэтому фармакологически активный агент Тромбовазима – это иммобилизированный субтилизин.
На этапе доклинических исследований проводились масштабные эксперименты при внутривенном и пероральном пути введения препарата. Изучение фармакологических свойств иммобилизированных субтилизинов позволило сделать вывод, что клиническими значимыми являются следующие механизмы действия лекарственного препарата Тромбовазим: тромболитический, связанный с непосредственным воздействием на фибрин и клеточную массу тромба; антитромботический, связанный с препятствием полимеризации фибрина и снижением адгезии тромбоцитов; противовоспалительный и кардиопротективный. Неспецифическая противовоспалительная активность выражается в уменьшении проявлений эндотелиальной дисфункции [31].
Регистрационные клинические исследования пероральной формы препарата Тромбовазим проводились у больных с хронической венозной недостаточностью (ХВН). Отмечен комплексный терапевтический эффект. Прежде всего, при пероральном применении происходило уменьшение размеров имеющихся тромбов, уменьшение отёка нижних конечностей и болевого синдрома. Увеличивалась скорость и объём венозного и лимфатического оттока. Тромбовазим не влиял на нормальные показатели гемостаза, по механизму действия он хорошо совместим с флеботониками и при их совместном использовании отмечается более выраженный терапевтический эффект [51]. Первый опыт применения у пациенток с ХВН, сформировавшейся на фоне применения гормональной заместительной терапии и гормональных оральных контрацептивов, заключался в анализе применения препарата у 13 женщин в возрасте от 18 до 75 лет с клиническими проявлениями ХВН. Суточная доза препарата составила 1 600 ЕД, длительность приёма – 20 дней. После проведения курса терапии с применением препарата Тромбовазим у всех пациенток, включенных в исследование, была отмечена положительная динамика по модифицированной шкале СЕАР и повышение толерантности к физическим нагрузкам. После проведения терапии отмечалась нормализация показателей свертывающей системы крови, статистически значимое уменьшение уровня маркеров тромбинемии. По результатам исследования установлено, что препарат является эффективным и безопасным для лечения ХВН и дисгормональных тромбофилических состояний у женщин на фоне длительного приема гормональной заместительной терапии и гормональных контрацептивов[52].
Однако, масштабных, статистически достоверных исследований в данной нозологической группе до сих пор проведено не было. Потенциальные потребители препарата Тромбовазим – женщины детородного возраста, а это требует информации и о возможных рисках влияния иммобилизированных субтилизинов на репродуктивную систему женщины и на эмбриогенез. В этой связи необходимы исследования параметров репродуктивной токсичности лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов (ЛПИС), которые в настоящее время не представлены, а это, в свою очередь, вызывает существенные ограничения к применению в гинекологической практике. В современной фармакологии для полноценного изучения лекарственного препарата необходимо проведение экспериментальных исследований по репродуктивной токсичности. В данных исследованиях оценивается способность вещества оказывать токсическое воздействие на репродуктивные органы с последующим снижением половой функции и способности к размножению, а также патологическое воздействие на развитие потомства. Для этого проводятся эксперименты на различных животных, преимущественно грызунах. Результаты экспериментов по репродуктивной токсичности дают возможность, во-первых, оценить риск применения препарата и предотвратить развитие бесплодия у пациентов, во-вторых, исключить негативное влияние на плод, с последующим влиянием на новорожденного ребенка. В результате, если репродуктивная токсичность вещества превышает допустимые нормы, будет изменена концепция применения препарата, внесены дополнительные сведения в инструкцию по медицинскому применению. При этом выявленные неблагоприятные параметры репродуктивной токсичности, не означают отзыв лекарственного препарата из обращения. Эта ситуация инициирует дополнительные доклинические исследования по выявлению дозы, при которой сохраняется необходимый терапевтический эффект, а репродуктивная токсичность не манифестирует [40].
Влияние лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов на антенатальный период развития потомства
В данном разделе представлены результаты исследования влияния ЛПИС на антенатальное развитие.
В результате проведенных исследований установлено, что поведение и внешний вид крыс-самок, получавших ЛПИС в различные периоды беременности в исследуемых дозах, не отличались от таковых в контрольных группах. Животные не проявляли признаков беспокойства и агрессии, имели хороший аппетит, были подвижны, имели гладкий шерстяной покров. Динамика массы крыс, получавших лекарственное средство во время беременности, представлена в таблице 5.
Установлено, что масса тела животных после 7-ми дневного введения ЛПИС в высшей дозе не отличалась от фоновых значений (исторический контроль), но достоверно снижалась по сравнению с контролем. Однако, это не отразилось на общем приросте массы тела за весь период беременности. Достоверное возрастание в исследуемом показателе, по сравнению с фоном (первый срок наблюдения, ТД), не является результатом действия ЛПИС, т. к. в контроле он оказался увеличенным по сравнению с фоном.
Данные по изучению влияния лекарственного средства на эмбриональное развитие крыс представлены в таблице 6.
Установлено, что число желтых тел, мест имплантации, преимплантационная гибель при введении лекарственного средства в высшей дозе не отличалось от контрольных значений. Однако, число живых плодов имело выраженную тенденцию к снижению. Это привело к достоверному возрастанию постимплантационной гибели по сравнению с контролем и фоном.
Эмбриотоксический эффект ЛПИС имел дозозависимый характер и при введении ТД не выявлялся. Средняя масса и размер плодов крыс обеих экспериментальных групп статистически не отличались от контрольных значений.
При макроскопическом осмотре живых плодов грубых внешних аномалий развития обнаружено не было. Однако, введение ЛПИС беременным самкам в ВД приводило к возрастанию у них числа плодов с наружными кровоизлияниями по сравнению с фоном. При снижении дозы этот токсический эффект сохранялся и даже оказался более выраженным. Количество плодов мужского и женского пола в сравниваемых группах оказалось сходным (таблица 7).
Аномалий развития скелета у плодов (n = 158, из них 102 плода экспериментальных групп), полученных от самок, которым вводили лекарственное средство c 1–19 день беременности, обнаружено не было. Результаты изучения влияния лекарственного средства на скорость процессов оссификации представлены в таблице 8.
Установлено, что введение беременным крысам лекарственного средства, в высшей дозе, оказывало влияние на скорость процессов оссификации скелета животных. Так на 20-й день беременности выявлялось снижение числа точек окостенения плюсны, а также количества плодов со сформировавшимися костями черепа, по сравнению с контрольными и фоновыми показателями. При снижении дозы ЛПИС количество точек оссификации в экспериментальной группе не отличалось от контрольных и фоновых значений.
Результаты осмотра внутренних органов плодов методом Вильсона (n = 184, из них 126 плодов экспериментальных групп) представлены в таблице 9. Анализ полученных данных показал, что введение лекарственного средства в высшей дозе c 1–19 день беременности приводило к возрастанию числа плодов с гемоперикардом (по сравнению с контролем и фоном), с обширными кровоизлияниями (по сравнению с контролем). Возрастание количества плодов с умеренными кровоизлияниями, с полнокровием сосудов печени, по сравнению с фоном, очевидно, не являются следствием действия ЛПИС, так как в контроле эти показатели увеличены по сравнению с фоном. При снижении дозы препарата возрастания количества плодов с гемоперикардом не выявлялось. Однако, увеличилось число плодов с полнокровием сосудов печени (по сравнению с фоном и контролем), с холестазом (по сравнению с контролем и фоном). Возрастание количества плодов с умеренными кровоизлияниями, по сравнению с фоном, не является результатом действия ЛПИС, т. к. в контроле этот показатель увеличен по сравнению с фоном.
Таким образом, установлено, что среди возможных эмбриотоксических свойств ЛПИС, реализуемых в антенатальном периоде при введении крысам-самкам в ВД в течение всего периода беременности, возрастает гибель плодов после имплантации, у живых плодов отмечалось возрастание количества наружных кровоизлияний, патологических изменений внутренних органов, торможение процессов оссификации. При снижении дозы ЛПИС до терапевтической, большинство токсических эффектов не выявлялось.
Исследование эффективности и переносимости лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов у женщин с хронической венозной недостаточностью, возникшей на фоне приёма комбинированных оральных контрацептивов
Эстроген-индуцированная ХВН имеет существенные этиологические отличия от диабетической или анатомической. Принимая во внимание субъективность применяемой шкалы VCSS – VenousClinicalSeverityScore для оценки ХВН, а также не ослеплённый и нерандомизированный дизайн клинического исследования, нами решено модифицировать трактовку конечного результата. Сохранение одного клинического симптома классификации VCSS расценивалось как частичная эффективность проведённого лечения, сохранение двух – как отсутствие эффективности, полное исчезновение симптомов трактовалось, как полная эффективность терапии ХВН.
В таблице 45 представлены данные по эффективности применения ЛПИС у женщин основной группы в соответствии со шкалой VCSS.
Почти в половине случаев применения ЛПИС отмечается достоверная полная (по 3 параметрам) эффективность. Частичную эффективность (2 параметра) тоже следует считать, как успех проводимой терапии, что вкупе позволяет считать вероятность успешного лечения эстроген-индуцированной ХВН применением ЛПИС в 87 %.
Болевой синдром является наиболее значимым для пациента с любым заболеванием, в том числе и при патологии вен. На рисунке 18 представлена динамика болевого синдрома после проведённой терапии. ЛПИС по своим фармакологическим свойствам не является прямым анальгетиком, но за счёт устранения локального отёка, уменьшения тканевой гипоксии приводит к снижению генерации болевых импульсов. Данное обстоятельство со всей очевидностью выявлено в данном исследовании – курсовой приём ЛПИС в 44 % случаев устраняет болевой синдром.
Блок функциональной активности при ХВН следует рассматривать изолированно от болевого блока, поскольку характер заболевания при определённом психологическом состоянии, не ограничивает существенно повседневную двигательную активность. Проведённый анализ (рисунок 19) демонстрирует улучшение функциональной активности на 22 %, что не выглядит также убедительно, как болевой компонент, но, очевидно, обладает фактическим улучшением.
Психологический статус пациенток улучшился на 19 % (рисунок 20), что лишь опосредованно можно включить в показатели эффективности, поскольку исследование не было ослеплённым и отсутствовал эффект плацебо. Сам факт приёма нового лекарственного препарата мог, уже сам по себе, вызвать положительные эмоции женщин и повлиять на трактовку показателей психологического блока шкалы CIVIQ.
На рисунке 21 наглядно отражена динамика показателей шкалы CIVIQ. Очевидно, что применение ЛПИС однозначно улучшает качество жизни женщин с эстроген-индуцированной ХВН на 25 %.
Материалы исследований по изучению репродуктивной токсичности лекарственного препарата на основе иммобилизированных субтилизинов
Этот раздел диссертационного исследования выполнен в строгом соответствии с общепринятым в России Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств [40], и главная его задача заключалась в оценке возможности применения ЛПИС не только во время беременности (тератогенность, эмбриотоксичность), но у лиц детородного возраста (токсическое действие на созревающие гаметы).
На основании проведённых исследований, по общей токсичности ЛПИС относится к 4 классу – малоопасные вещества (ГОСТ 12.1.007) [23]. Однако, выводы по параметрам общей токсичности совершенно невозможно экстраполировать на организм беременных лабораторных животных. В результате проведенных исследований в антенатальном периоде, установлено, что поведение и внешний вид крыс-самок, получавших ЛПИС в различные периоды беременности в исследуемых дозах, не отличались от таковых в контрольных группах. Животные не проявляли признаков беспокойства и агрессии, имели хороший аппетит, были подвижны, имели гладкий шерстяной покров.
Установлено, что масса тела животных после 7-ми дневного введения ЛПИС в высшей дозе не отличалась от фоновых значений (исторический контроль), но достоверно снижалась, по сравнению с контролем. Однако, это не отразилось на общем приросте массы тела за весь период беременности. Достоверное возрастание в исследуемом показателе по сравнению с фоном (первый срок наблюдения, ТД), не является результатом действия ЛПИС, т. к. в контроле он оказался увеличенным, по сравнению с фоном. Полученные в этой части исследования данные, выглядят вполне логичными и прогнозируемыми, поскольку судьба введённого в организм лекарственного препарата во многом определяется его фармакокинетикой. Фармакокинетика ЛПИС указывает на то обстоятельство, что наряду с высокой энтеральной биодоступностью, ЛПИС не депонируется в тканях и, соответственно, не может вызывать существенных морфофункциональных повреждений. Ранее изучено и является очевидным положительное влияние терапевтических доз ЛПИС на периферическое кровообращение [23; 24; 32], что также не способствует негативной функциональной кумуляции в организме беременной крысы.
Данные по изучению влияния ЛПИС в терапевтической дозе на эмбриональное развитие крыс подтвердили наше предположение об отсутствии негативного влияния, ввиду низкой тканевой кумуляции. Даже при введении ЛПИС в высшей дозе, число желтых тел, мест имплантации, преимплантационная гибель не отличалась от контрольных значений. Однако, при введении ЛПИС в 151 высшей дозе с 1 по 19 день беременности число живых плодов имело выраженную тенденцию к снижению. Это привело к достоверному возрастанию постимплантационной гибели, по сравнению с контролем и фоном. Таким образом, фетоплацентарный комплекс беременной самки оказывается уязвимым для 10-кратного повышения дозы ЛПИС. Можно предположить, что высокие дозы ЛПИС вызывают избыточную перфузию материнской части плаценты с формированием локальной гиперемии и последующего отёка, что, в свою очередь, понижает диффузионную способность в фетоплацентарном комплексе. Это предположение согласуется с некоторыми особенностями формирования и функционирования фетоплацентарного комплекса крыс [25], у которых с 16 дня беременности происходит уменьшение материнской части плаценты до 32 % со снижением капиллярной перфузии.
Результаты исследования демонстрируют отчётливый дозозависимый эмбриотоксический эффект ЛПИС. Установлено, что введение беременным крысам ЛПИС в высшей дозе, оказывало влияние на скорость процессов оссификации скелета животных. Так, на 20-й день беременности выявлялось снижение числа точек окостенения плюсны, а также количества плодов со сформировавшимися костями черепа, по сравнению с контрольными и фоновыми показателями. При снижении дозы до терапевтической, количество точек оссификации в экспериментальной группе уже не отличались от контрольных и фоновых значений. Анализ полученных данных осмотра внутренних органов плодов методом Вильсона (n = 184, из них 126 плодов экспериментальных групп) показал, что введение ЛПИС в высшей дозе c 1–19 день беременности приводило к возрастанию числа плодов с гемоперикардом (по сравнению с контролем и фоном), с обширными кровоизлияниями (по сравнению с контролем). При снижении дозы препарата до терапевтической, возрастания количества плодов с гемоперикардом не выявлялось. Также отмечено, что введение ЛПИС беременным самкам в высшей дозе приводит к возрастанию числа плодов с наружными кровоизлияниями, по сравнению с фоном. Таким образом, совершенно очевидно, что ЛПИС обладает уникальной способностью к 152 фетоплацентарному транспорту и проявляет свои фибринолитические свойства в крови эмбрионов.
В следующем разделе проведённых исследований показано влияние ЛПИС на постнатальное развитие. Установлено, что внешний вид самок, получавших ЛПИС в высшей дозе с 6-го по 20-й день беременности, не отличался от такового в контроле (крысы вели себя активно, имели гладкий шерстяной покров, хороший аппетит). Введение ЛПИС не оказывало влияния на динамику массы тела беременных крыс. Беременность всех используемых животных закончилась благополучными родами на 22–23-й день беременности, что соответствует видовой норме. Численность крысят в пометах в экспериментальной и контрольной группах оказалась сходной. Сравниваемые группы крысят не отличались друг от друга по срокам отлипания ушных раковин, появления первичного волосяного покрова, прорезания резцов, открытия глаз. Внешних аномалий развития у потомства крыс-самок опытной группы, как и в контроле, при рождении обнаружено не было.
Описанные ниже патологические параметры постнатального развития проявились при введении 10-кратной терапевтической дозы. Установлено, что потомство крыс, получавших ЛПИС в 10-кратной терапевтической дозе, характеризовалось более поздними сроками опускания семенников и открытия влагалища, по сравнению с контролем. Крысята крыс-самок опытных групп родились с нормальной массой тела (этот показатель не отличался от контрольных значений), но впоследствии (на 21, 28 дни жизни) они набирали вес хуже, чем контрольные животные. Наряду с этим, установлено, что потомство крыс-самок, получавших ЛПИС в 10-кратной терапевтической дозе, характеризовалось сниженной жизнеспособностью, отставанием в физическом развитии, в скорости формирования сенсорно-двигательных рефлексов. Индексы выживаемости потомства в первые дни и до 14 дня жизни в сравниваемых группах оказалось сходными. Однако, впоследствии, количество крысят потомства самок экспериментальных групп стало сокращаться. Следует отметить, проявление этого токсического эффекта не зависело от принадлежности крысят к полу. На 28-й день жизни численность пометов экспериментальной группы сократилась, более чем в 2,5 раза. При изучении способности крысят удерживаться на горизонтальной веревочке на 15-й день жизни установлено, что у крысят (самок и самцов) опытной группы время удерживания передними лапами оказалось достоверно сниженным, по сравнению с контрольными животными. При изучении способности к обучению потомства в тесте «условный рефлекс пассивного избегания», что в первый день опыта все исследуемые животные обладали «норковым» рефлексом, т. е. заходили в темный отсек камеры. Во второй день опыта этот показатель у потомства экспериментальной группы оказался статистически значимо сниженным, по сравнению с контрольными значениями. Полученные данные свидетельствуют о том, что введение ЛПИС в 10-кратной терапевтической дозе беременным самкам, приводит к снижению способности их потомства к обучению. Введение ЛПИС беременным самкам в 10-кратной терапевтической дозе не приводило к нарушению адаптивного поведения их потомства, но крысята осуществляли эту реакцию в течение более продолжительного времени, чем контрольные. При изучении поведения крысят в тесте Хандерсона в модификации Бондаренко установлено, что все крысята опытной и контрольной группы подныривали под край внутреннего цилиндра.