Введение к работе
Актуальность темы
Лекарственная терапия опухолей является актуальным разделом современной медицины. Однако большинство химиопрепаратов обладают рядом недостатков, к которым относится недостаточная избирательность действия и, вследствие этого, высокая общая токсичность, а также устойчивость опухолевых клеток к проводимой химиотерапии. На сегодняшний день описано много механизмов, приводящих к множественной лекарственной резистентности. Поэтому создание рациональных лекарственных форм, позволяющих наиболее полно реализовать возможности противоопухолевых препаратов, является актуальной задачей.
Существует ряд подходов к увеличению эффективности лекарственных препаратов, среди которых использование новых фармацевтических технологий для создания систем транспорта известных противоопухолевых лекарственных веществ (ЛВ). Одним из наиболее оптимальных вариантов для повышения их доставки к опухолевым клеткам является использование носителей, таких как липосомы.
Опухолевые ткани отличаются от нормальных наличием деформированных капилляров с проницаемыми стенками и замедленным кровотоком. Благодаря данным эффектам, наноразмерные лекарственные формы, такие как липосомы, накапливаются в опухолевой ткани, тем самым повышая терапевтический эффект ЛВ, которое они переносят.
Липосомы представляют собой везикулы, состоящие из одной или нескольких фосфолипидных мембран, внутри которых находится водное пространство. В их водное пространство могут быть включены водорастворимые лекарственные вещества, а в липидный бислой – гидрофобные. Липосомы способны транспортировать ЛВ, снижать его общетоксическое действие, увеличивать терапевтический эффект. Основываясь на этих свойствах, липосомальные системы доставки противоопухолевых препаратов могут обуславливать фармакологическое преимущество перед нелипосомальными формами лекарств.
В настоящем исследовании при создании липосомальных лекарственных форм (ЛЛФ) в качестве модельного препарата использовали отечественное противоопухолевое ЛВ аранозу.
Арабинопиранозилметил нитрозомочевина (араноза) — отечественный противоопухолевый препарат, производное нитрозомочевины, синтезирована в конце годов в лаборатории органического синтеза, лекарственная форма «Араноза лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 0,5 г» создана в лаборатории разработки лекарственных форм Онкологического научного центра АМН СССР. В результате клинических испытаний в конце 80-х годов установлена эффективность препарата при меланоме. Несмотря на преимущества перед аналогами (производными нитрозомочевины) – большая широта терапевтических доз и возможность применения в амбулаторных условиях, араноза обладает недостаточной селективностью действия.
В РФ в настоящее время ЛЛФ аранозы не производятся, импорт дорогостоящих зарубежных препаратов резко сужает возможность применения лекарственных препаратов в отечественной клинической практике. Разработка и производство ЛЛФ аранозы для лечения онкологических больных позволит увеличить эффективность проводимой химиотерапии.
Цель исследования
Получение липосомальной лекарственной формы противоопухолевого лекарственного вещества аранозы для увеличения селективности доставки в опухоль.
Задачи исследования
-
На основе технологических исследований выбрать состав ЛЛФ аранозы.
-
Разработать способ получения устойчивой при хранении лиофилизированной ЛЛФ аранозы для внутривенного введения.
-
Определить показатели качества для стандартизации ЛЛФ аранозы и разработать методики качественного и количественного анализа.
-
Сравнить цитотоксическую активность известной лекарственной формы «Араноза лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 0,5 г» и новой ЛЛФ «Араноза липосомальный лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 100 мг» в опытах in vitro и противоопухолевое действие в опытах in vivo.
Научная новизна результатов исследования
Впервые предложен состав и разработана технология получения отечественного противоопухолевого препарата – липосомальной аранозы в виде лиофилизата для приготовления раствора для инъекций. Изучено влияние различных криопротекторов на стабильность липосом с аранозой до и после лиофилизации. Разработан режим лиофилизации липосомальной аранозы.
Предложены методики качественного и количественного анализа ЛЛФ аранозы: определение компонентов лекарственной формы методом тонкослойной хроматографии и спектрофотометрическое определение содержания действующего вещества в лекарственной форме. Выбраны показатели качества лиофилизированной ЛЛФ аранозы. Показана стабильность лекарственной формы в процессе исследуемого срока хранения.
В экспериментах in vitro и in vivo по изучению цитотоксического и противоопухолевого действия показано, что липосомальный препарат обладает большей избирательностью действия по сравнению со свободной лиофилизированной формой аранозы.
Практическая значимость полученных результатов
Создана новая липосомальная лекарственная форма высокоактивного противоопухолевого ЛВ аранозы. В лаборатории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН утвержден лабораторный регламент на производство ЛЛФ аранозы.
Разработан проект ФСП на препарат: «Араноза липосомальный лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 100 мг».
Представляется возможность проведения расширенных испытаний in vivo для изучения ЛЛФ аранозы на новых опухолевых моделях.
Положения, выносимые на защиту
-
Состав и технология получения ЛЛФ аранозы.
-
Выбор криопротектора и условий лиофилизации ЛЛФ аранозы.
-
Методики качественного и количественного анализа ЛЛФ аранозы.
-
Данные оценки эффективности действия липосомальной аранозы in vitro и in vivo.
Апробация работы
Материалы проведенных исследований представлены на конференциях: Итоговой всероссийской научной конференции молодых исследователей с международным участием «Татьянин день» (Москва, январь 2011 и 2012 гг.), Х Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 22-23 марта 2011г.), III Всероссийской научной конференции с международным участием «Наноонкология» (Саратов, 6-7 сентября 2011г.), ХI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Нижний Новгород, 31 мая – 1 июня 2012г.), Межкафедральной научной конференции на кафедре фармацевтической технологии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Москва, 31 августа 2012 г.).
Личный вклад автора
Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведена аналитическая и статистическая обработка, научное обоснование и обобщение полученных результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально-теоретической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и их внедрения в практику.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности
Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.01 – Технология получения лекарств. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 1, 3 и 4 паспорта специальности технология получения лекарств.
Связь задач исследования с проблемным планом
Диссертационная работа выполнена в соответствии с комплексной научной темой ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (номер государственной регистрации 01.2.006 06352). Тема включена в план научных исследований кафедры фармацевтической технологии «Разработка научных основ технологии, стандартизации и организации производства лекарственных средств».
Публикации
По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, полностью отражающих ее содержание, в том числе 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ.
Объем и структура диссертации
