Введение к работе
Актуальность исследования. На особом месте в клинике внутренних и хирургических болезней стоит проблема диагностики заболеваний, сопровождающихся деструкцией тканей.
Для диагностики степени воспалительно-деструктивных процессов чаще всего используют белки-маркеры острой фазы: С-реактивный белок, продукты деградации фибриногена, ферритин (Ф), связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ), и другие (Трубников Г.А., Никулина Д.М., Балашов В.И. и соавт, 1971 – 2001; Балашов В.И., 1975; Алешкин В.А., 1988; Долгов В.В., 1997; Камышников В.С., 2002; Титов В.Н., 2004; Никулина Д.М. и соавт., 1980 -2006) и другие.
Ф занимает особое место среди маркеров деструкции. Исследования, проведенные в разных областях медицины, показали значимость теста на Ф как маркера деструкции тканей при некоторых острых и хронических заболеваниях печени, воспалительных заболеваниях бронхолегочной, мочевыводящей, костной, пищеварительной и других систем (пневмония, пиелонефрит, остеомиелит и т.д.), аутоиммунных процессах (ревматоидный артрит, системная красная волчанка), травмах, инфаркте миокарда (Грачева Л.Н., 1981; Прокопенко П.Г., 1975; Blake D.R, 1981; Jacobs A., 1981; Митерев Ю.Г., 1983; Левина А.А., 1984; Halliday J., 1984; Klockars M., 1985; Tamura S., 1988; Hann H.W.L., 1990; Кчибеков Э.А., 2005; Савенков М.С., 2006).
В настоящее время определение Ф при онкологических заболеваниях убедило клиницистов в том, что он, являясь неспецифическим показателем, достоверно отражает как активность опухолевого процесса, так и тяжесть состояния больного (Alpert, E., 1978; Niitsu Y., 1978; Drysdale J.W., 1978; Bullock S., 1980; Arosio P., 1984; Komatsu M., 1987; Zavagno G., 1987; Tamura S., 1988; Yinno A., 1988; Грязнова И.М., 1990; Hann H.W.L., 1990; Воробьев В.Г., 1991; Батов С.В., 1996).
Согласно литературным данным различают тканевой и сывороточный Ф (Worwood M., 1982). Несмотря на значительное число публикаций, посвященных сывороточному Ф при различной патологии, в литературе мало данных об определении тканевого Ф при диагностике заболеваний, сопровождающихся деструкцией тканей (Лебедев М.Ю., 2000; Трубников Г.А., 2001). Поэтому изучение взаимосвязи между тканевым и сывороточным Ф при патологических деструктивных состояниях, особенно в хирургической практике, представляет теоретический и практический интерес.
Следует также отметить, что в доступной литературе фактичес-ки нет сведений об особенностях распределения Ф в тканях в процессе эмбриогенеза, а также в дефинитивных и патологически измененных тканях.
Кроме того, в нашей лаборатории Д.М. Никулиной с соавт. (1985, 2000) описаны и частично изучены два термостабильных межорганных антигена, обозначенных как термостабильный межорганный антиген 1 (ТМ1) и термостабильный межорганный антиген 2 (ТМ2), диагностическое значение которых как маркеров деструктивных процессов в организме, показано лишь при некоторых травмах и опухолях (Никулина Д.М. и соавт., 1985; Белопасов В.В. и соавт., 1988-2002).
Цель исследования:
Улучшение диагностики и оценки эффективности лечения заболеваний, сопровождающихся воспалительно-деструктивными процессами в тканях, на основе новых данных иммунохимического изучения Ф и других термостабильных тканевых белков в биологических субстратах в норме и патологии.
В задачи исследования входило:
-
Оптимизировать методы выделения и очистки термостабильных тканевых белков - Ф, ТМ1, ТМ2.
-
Получить компоненты и смоделировать иммунохимические тест-системы на Ф, ТМ1,ТМ2.
-
Изучить распределение термостабильных тканевых белков (Ф, ТМ1, ТМ2) в тканях организма человека в онтогенезе.
-
Определить клиническое значение количественных изменений термостабильных тканевых белков в биологических жидкостях и тканях при воспалительно-деструктивных и опухолевых заболеваниях.
-
Изучить зависимость между уровнем Ф в сыворотке крови и в патологически измененных тканях при холециститах и синуитах.
Положения, выносимые на защиту:
-
Модифицикация метода выделения и очистки Ф по Granick поз-воляет получать препарат этого белка достаточной степени чистоты для использования его в качестве антигена при получение соответствующих антисывороток.
-
Ф выявлен во всех исследуемых тканях человека. Наибольшее содержание Ф установлено в печени и селезенке новорожденных. Содержание Ф в материнской части плаценты в разные сроки гестации выше, чем в ее плодной части.
-
Частота выявления ТМ1 и ТМ2 в тканевых экстрактах от 33,3 до 85,71% случаев свидетельствует о разной концентрации этих белков в различных органах. Особенно это касается ТМ1.
-
Корреляционный анализ содержания Ф в тканях желчного пузыря и сыворотке крови больных холециститом указывает на прямую резко выраженную взаимосвязь (r = + 0,78). Наибольшая концентрация Ф в сыворотке крови и тканях желчного пузыря наблюдается при флегмонозном холецистите.
-
Усиление активности воспалительно-деструктивных процессов в тканях гайморовой пазухи сопровождается увеличением средней концентрации Ф как в сыворотке крови, так и в экстрактах биопсийного материала. Но при этом коэффициент корреляции содержания Ф составляет лишь + 0,25.
-
Изменение содержания Ф в пунктатах кист молочных желез (свыше 8,0 мг/мл на 1 у.е. общего белка) может указывать на риск злокачественного перерождения.
-
Выявление антител к ТМ2 в сыворотке крови беременных с гестозом и больных с гломерулонефритом свидетельствует об усиленном катаболизме и нарушении элиминации этого белка из организма человека (частота выявления составила соответственно 100% и 89,5%).
Научная новизна:
Впервые получены результаты по содержанию Ф в дефинитивных тканях, позволяющие уточнить роль Ф в обмене железа.
Впервые получены результаты исследования Ф в различных структурно-функциональных частях плаценты в зависимости от сроков гестации и морфофункционального состояния плода.
Впервые получены данные по содержанию Ф в тканях при гнойно-воспалительных заболеваниях в зависимости от степени выраженности патологического процесса. Получены убедительные доказательства корреляционной зависимости между уровнем Ф в сыворотке крови и в патологически измененных тканях.
Впервые обоснованы подходы к формированию интегральной ИФА тест-системы на основе трех термостабильных тканевых белков для увеличения диагностической возможности теста на деструкцию тканей.
Научно-практическая значимость работы:
Разработанный метод выделения и очистки Ф из экстракта плаценты позволяет получить его препарат высокой степени чистоты без применения дефицитных реактивов.
Разработаны рекомендации по использованию иммунохимичес-ких тест-систем на термостабильные белки в клинической практике для оценки активности патологического процесса, сопровождающегося деструкцией тканей, а также для характеристики обмена железа в организме человека на разных этапах развития.
Иммунохимические тесты на термостабильные тканевые белки повышают точность диагностики в хирургии, онкологии, терапии, акушерстве и гинекологии, благодаря своевременному определению степени выраженности деструкции по изменению концентрации этих белков в биологических жидкостях и патологически измененных тканях, а также позволяют оценить эффективность лечения и прогноз течения заболевания.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции и школе-семинаре для молодых ученых с международным участием «Белки-маркеры патологических состояний», Астрахань, 2003; на научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань-Москва, 2004; на научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань-Волгоград-Москва, 2006; на VIII Международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря», Астрахань, 2005; на научно-практических конференциях АГМА, Астрахань, 2005, 2006, 2007; на заседании проблемной комиссии АГМА «Теоретическое и практичес-кое изучение белков маркеров патологических состояний», 2004.
Результаты исследования используются в научной и практической работе кафедры биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики АГМА.
Публикации: По теме диссертации опубликовано 15 научных работ.
Структура и объем работы: Диссертация изложена на 136 страницах, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы. Иллюстрированный материал представлен 18 таблицами, 20 рисунками. Библиография включает в себя 120 отечественных и 109 зарубежных автора.
