Факторы персистенции сальмонелл при их внутриклеточном паразитировании Рищук, Сергей Владимирович

Введение к работе

Актуальнооть проблеми, Среди оотрых кишечных инфекционных заболеваний значительный удельный вео имеют сальмоноллези, роот эвболоваемооти которыми отмочаетоя во многих отраних мира (А.Б. Блпгер о ооавт., 1975; Р.И.Рудакова, А.И.Кортев, 1976; П.М.Попова, Н.А.Чайка, 1982; Б.Л.Черкаоокий о ооавт., 1991). Сальмонеллоя нанооит существенный в; іл здоровье лодой и экономический ущорб обществу (D.И.ПокровокиИ, И.Л.ІІЬханино, ІУ79). Труднооти в борьбе о сальмонеллезом обусловлены недостаточной изученноотью патогенеза отой инфекции СВ.И.ПокровокиИ, А.Л.Килооо, Н.д.Ющук, I98IJ, и в чаотности, механизмов внутриклеточного паразитирования возбудителя внутри макрофагов и эгсителиоцитов и длительной пероиотенции сальмонелл в оргинизме хозяина (А.Ф.Блюгер о ооавт., х980; M.U. Войно-Нсенецкий, 1901).

Среди механизмов бактериальной пероиотенции в пооледнее время приковано внимание к таким факторам, как онтилизоцимная (О.В. Бухарин, Б.Я.Уовяцов, 1902), антиинтерфероновая (0. .ьухарин, В.Ю.Соколов, 1909), антииммуноглобулиновал (К.іЗ.Чернохвоотова, 1987; .А.Михайлова и др., 1990; Lifiola.bt G. el «-,1986), антикомплементарная (и.А.ьрудастов, 1992) активности, и установлена широкая их встречаемость у патогенной и условно-патогенной микрофлоры (0. й.Бухарин, 19Ь7, 19У2).

Доказана значимость антилизоцимного признака во внутриклеточном паразитиросании сальмонелл (А.П.Малышкин, 1986) и шигзлл (В.Е.Герасимов, 1988), а также роль антиинторфероновой активности в персистзнции гаиголл (В.Ю.Соколов, 1990). Предполагается, что антиинтерфероновый фактор также может влиять на способность сальмонелл к внутриклеточному порпзнтиро'к'.ни*.,. Ло этому вопросу в ля--,.-ригу те сведения отсутствуют. іи-о ,-;jv4iit:e пі слота в;;ястся акту-

альным, так как открывает пути для вияснення биологической роли этого признака персистяродашш сальмонелл, что и предопределило побудительные мотиви данного исследования.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы - определить биологическую роль антиинтерфероновой активности сальмрнелл в оочетании с антилизоцимным признаком при их внутриклеточном пара итировании.

Для реалигации этой цели были поставлены оледующие задачи:

1. Изучить связь персистентных характеристик оальмонелл о показателями фагоцитоза на модели перитонеальных макрофагов и ней-трофилов человека, а такжо цитопагичеоким действием микроорганиэ-мов но клетках Нер-2.

2. На модели экспериментальной оальмонеллезной инфекции у мы-іївй изучить динамику изменений пероистентных овойотв возбудителя

и сопоставить ее с длительностью персиотенции и иммуноморфологическими изменениями селезенки зараженных животных.

3. ConocTf-зить персистентные характеристики оальмонелл о кли
ническим течением инфекции и длительноотьп бактериовыделения воз
будителя у больных.'

Положения, вынооимие на защиту:

І. Антииктерфероновый фактор сальмонелл нарушает процесо их внутриклеточного киллинга, оникая акгивнооть катионных ое«ков фагоцитов.

'L. Аутиинтерферонопкй признак оальмонелл, способствуя развитие цитопатичсокого аффекта, определяет тяжесть течения инфекционного процесса и длительность пероиотироввния бактерии в организ ме.

Научная новизна. Впервые экспериментально установлено связь . антиинтерфероновой активности оальмонелл а их опоообноотыо угнетать фагоцитарную реакции в макрофага льном звене и нейтрофилах

человека. Обнаружено выраженное лнутрифагоцитарное и внутриэпите-лиалькое размножение бактерий о актиинтерфвроновык признаком к их цитотокеический эффект на эпителиоцпты человека.

Экспериментально выявлена более продолжительная первисгенция сальмонелл, облодиющих сочетанием двух признаков: ангиинтерфаро-новчм и антилизоцимным. Определено отсутствие специфического влияния антиинтерферонового фактора сальмонелл но гуморальный иммунный ответ в эксперименте

Доказано наличие овязи между ЛИА в сочетании с АЛА у сальмонелл и длительности их бакториовыделения от больных, Антиинтер-фороновый Признак оальмонелл определял тяжесть клинического течения заболевания.

Практическая ценность Теоретическое значение работи заключается в расшифровке роли отдельных персистентных характеристик оальмонелл при внутриклеточном их париэитировании.

Полученные данные попользованы в процессе преподавания курса медицинской микрооиологии по разделу "Кишечные инфекции".

Практическое значение работы определяется возможностью прогноза характера течения оальмонеллезной инфекции у больных и фор- > мирования у них бактерионооительотва по наличии антиинтерферонового и антилиэоцимного признаков выделенного возбудителя.

Апробация работы, ионовные положения работы доложены и об-оуждени на:

3. Пятой научно-практичеокой конференции врачей-инфекциони-отов, микробиологов, эпидемиологов и паразитологов Оренбургской облооти (Оренбург, 199ІЛ

4. 10-й итоговой конференции молодых ученых - медиков "Молодые ученые - здравоохранению" (Оренбург, 1991).

5. Конференции молодых ученых-медиков "Иолодио ученые - здравоохранении" (Оренбург, 1992).

k. 1І—а итоговой конференции молодых ученых-медиков "Молодые ученыо - здравоохранению" (Оренбург, 1993).

5. Международной конференции "Загрязнение окружающей среды. Проблемы токсикологии и эпидемиологии" (Мооква - Пермь, 1999).

Публикации. По теме диооертации опубликовано 6 работ.

Объем и отруктура диссертации. Диосортация представлена на {2Є страницах машинописного текота и ооотоит из введения, пяти глав, заключения, выводов и указателя литературы, включаючого II? отечественных научных литературных иоточников и UZ иноотранных. Текст иллюстрирован 7 таблицами и їв рисунками.

Материал и методы и следования. При выполнении зкоперимен-
тальной части работы исрользовалиоь изогенные Итамны оальмонелл
(5. e-n/e^l/left's ), отличающиеоя по антиинтерфероновому признаку,
переданному путем конъюгационного скрещивания о донороким втвмнон
кишечной палочки по методу Дк. Миллера (1986). Выбор отого вида
микроорганизмов был но случайным, так как, по данным В.И.Ооргев-
нина и РоА.Михалева (і983), е также БЛ»Черздосхого о совет.
(1991;, основным возбудителем оальмонеллова л нвотояцвв время яв-
ляотоя S. е«// '

Исследование роли факторов пероиотенции сальмонелл при их внутриклеточном пара оптировании проводили но модели перитонеаль-ных макрофагов кыиэй по Учитель И«Я. (197б)_е нейтрофильнык лейко-цитов человека » по Иванову А.И« и Чухдовику Б.А» (1967) и Пига-ревокому В.. U979)₀ культуры клеток Нвр-2 «по Арбуїовой В.Ао (I97U)o

Изучениз овязи AM и АЛА о пероиотенцизй сальмонелл проводили путем вкутрибрюаынноге заракзнмя 250 мишей динки СВД изогоннк-мі атаммамм о последующим их покрытием и забором крови, хоотног Mosra,, почви₀ печени и звквзенхк на бактериологическое иослэдовв-ни«<, Параллельно производили определение Т- и В-яимфоцитов в село-

звнко (Н.А.Нраокина и ооавт., 183), а также количества антител в крови к 0-антигону в РШ'А. ійотологичеокий анализ оелезекки мышей ооущеотвляли путем морфометрии фолликулов и герминативных 8-зин на оерийных орезах (Г.Г.Автгмідилов, 198*0.

Значение факторов пероиотекции в клиничеокой пьтологии было раокрыто на 158 клиничеоких и 63 музейных штаммах сальмонелл, принадлежащих к 8 видам. Иопользовалиоь общепринятые методы идентификации бактерий и изучение антиинторфероновой (О.Б.Бухарин, З.Ю. Соколов, 1990) и антилизоцимной (О.В.Бухарин, Б.Я.Уовяцов, 1982) активностей. Связь антиинтерферонового и антилизоцимного признаков возбудителя о длительноотьо бактериовыделения и тяжеотьп течения оальмонеллеза устанавливали на ЧЪ штаммах сальмонелл, вное'янных от больных о гаотроинтеотинальнои форіой заболевания и однотипным лечением гентамицином.

Статистичеокая обработка результатов проводилаоь общеприняты-кя методиками.о использованием критерия Оьвдента, однофакторного и двухфакторного диоперсиокного анализов (Г.ф.лакин, 1990).