Введение к работе
Лгстуальпость проблемы. Секреция один из важнейших процессов клеточного метаболизма. Изучение механизмов регуляции биосинтеза внеклеточігих белков может способствовать решению ряда фундаментальных проблем, в частности проблемы межклеточного узнавания, рецепции клетками сигналов из внешней среды и многих других. Внимание к процессу секреции в значительной степени обусловлено успехами в использовании микроорганизмов для полурн'ия бнотогическн активных вешеств.
Проведенные в последние годы исследования позволили получить доказательства принципиальной общности секреции у высших и низших зукариот. Это открыло широкие возможности для использования грибов и, в частнисти дрожжей, в качестве объектов для изучения механизмов транспорта белков.
На сегодняшний день для дрожжей показана возможность
экспорта высокомолекулярных гликопроїеннов за пределы клеточной
стенки. Несомненна важность этого процесса не только с
теоретической, но и с прикладной точкк зрения, поскольку дрожжи
являются наиболее популярными объектами для получения белков
животного происхождения (папрігмер, интерферон н инсулин). К
сижалению, механизмы проникновения секретируемых
гликоферментов за пределы клеточной стенки абсолютно не изучены. В этой связи полезными могут оказаться сведеіпія о структурной организации этих белков. С другой стороны, знание основных показателей динамики экспорта глнкопротеїшои в среду культивирования может быть использовано при оптимизация процессов производства белков с помошыо дрожжей.
Цель н задачи псследошшия. Целью данной работы являлось изучение механизмов экспорта белков в среду культивирования у дрожжей Saccharorayces cerevisiae на примере секреции кислых фосфатаз. В связи с этим были поставлены следующие задачи: 1. изучите динамики секреции кислых фосфатаз а среду культивирования: 2. изучение особенностей структуры внеклгточпых кислых фосфатаз.
Научшиа воанзиа. В данной работе показано, что секреция конститутивной н репресснбельной кислых фосфатаз приурочена к определенным стадиям роста дрожжей Saccharorayces cerevUiae, что позволяет предположить различную функциональную роль этих глнкоферментов, а также различие в путях их секреции.
Получены высокоочищенные препараты внеклеточных
репресснбельной н конститутивной юісльгх фосфатаз, а также
шгаертазы. Изучен субъедшшчпый состав кислых фосфатаз.
Показана общность структурной организации секретируемых
гликофериентов дрожжей, ;'.:''"'
Апробация работы. Материалы диссертацші доложены на II
Международной школе-конференшш молодых ученых
социалистических стран (Пушино, . 1987), на IV Всесоюзной конференции "Биосинтез . ферментов микроорганизмами" (Ташкент, 1988), на XII! Всесоюзной конференции по электронной кикроскотш (Звенигород, 1988), на II Международной конференции по биохимическому разделению (Кештели, 1988), на I конференции "Проблемы и : : перспективы биотехнологии" (Братислава,; 1989). Работа прошла апробацию на кафедре микробиологии . .биологического факультета МГУ им. М.ВЛомоносова.
Публшсашш. По материалам диссертации опубліковано 9 печатных работ:
Объем н структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследовашія, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и сгшска литературы, включающего 200 наименований. Работа изложеііа ла 176 страницах машинописного текста, содержит 13 таблиц и 29 рисунков.