Введение к работе
Актуальность проблемы диагностики и лечения заболеваний, вызванных Herpes simplex virus (вирусом простого герпеса- ВПГ) определяется ее высоким удельным весом в общей заболеваемоаи, Широкому распространению герпесвирусной инфекции во многом способствует тот факт, что инфекция наиболее часто протекает в средне-тяжелой и легкой формах, субклинически, вплоть до бессимптомного вирусоноси-тельсгва (Коломиец А.Г. и др.1988, Stagno S.d.al.1985). Первичное заражение вирусом ведет к практически пожизненному вирусоносительству, а заболевание, как правило, носит латентный или хронически характер и передается в последующих поколениях.
Герпетическая инфекция у иммунокомпетентньгх лиц обычно представлена локальными везикулярньши заболеваїпіями ограниченных зоь тшзистых оболочек.Пациенты со сниженным иммунным статусом могут ра^ивать.тяжелые хронические или прогрессирующие инфекции (GaffieyM.G. еы 1991).
Активация лаг<^-пН0 существующей герпетической инфекции может происходить в резулкі-т» воздействия широкого спектра факторов, способствующих снижению имм^тета в результате экологически неблагоприятных условий проживания, гоР,огальных изменений во время беременности, различного вида травм и стреи.од (Семенова Т.Б. и др. 1990, . 1990).
В то же время, вирус простого герпеса обладает лчмуноде-ирессивной активностью, вызывая ингибирование Т-клеточнол пролиферации, иногда в сочетании с дефектом гуморального ответа, подаьяя-ет фагоцитарную активность макрофагов, снижает процесс интерферо-нообразования (Иванов СВ. и др. 1990, Львов Н.Д. и др. 1990, Кульчар Г.И. и др. 1990, Johnson J.R. et.al. 1992). Субклиническое течение герпетической инфекции и бессимптомное вирусоносительство среди женщин детородного возраста значительно затрудняют диагностику и создают опасность инфицирования плода, что может приводить к развитию врожденных уродств, локализованных и генерализованных форм герпеса новорожденных. Инфицированные новорожденные, не развившие в неонатальном периоде каких-либо патологических состояний, представляют собой группу риска по развитию вирусной инфекции в последую-
щие годы жизни, что может повлечь за собой развитие целого рада патологий органов и тканей.
Хронические и латентные формы герпетической инфекции наиболее сложны в диагностике в результате многообразия клинических проявлений и отсутствия четких клинических критериев оценки природы заболевания и его стадии, что диктует необходимость диагностирования инфицирования по результатам лабораторного исследования. Б настоящее время для идентификации вируса простого герпеса активно используются серологические и молекулчрно-биологические методы, разработанные в научно-исследовательских учреждениях. Однако, не все они еще нашли широкое применение в клинической практике, например, метод молекулярной гибридизации, с помощью которого возможна индикация генома в биологических пробах. Для широкого внедрения метода необходима его адаптация к запросам клиники. В настоящей работе на примере групп пациентов с риском реактивации герпе-свирусной инфекции (недоношенные новорожденные дети, их матери и дети, проживающие на загрязненных радионуклидами территориях) были разработаны критерии оценки степени инфидарованности вирусом простого герпеса методами молекулярной гибридизации, иммунофлюоресценции и иммуноферментного анализа.
Использование современных методов диагностики (молекулярная гибридизация, иммунофлюоресценция и иммуноферментный анализ) для индикации вируса простого герпеса непосредственно в клинических пробах с целью разработки диагностических критериев степени инфицирования в сопоставлении с тяжестью заболевания у обследованных.
-
Адаптировать лабораторный вариант метода молекулярной гибридизации на клиническом материале, полученном от недоношенных новорожденных детей и их матерей, разработав количественную оценку выявляемых нуклеотидных последовательностей вируса простого герпеса в сопоставлении с тяжестью клинического состояния обследованных.
-
Разработать количественную шкалу оценки выявляемых методами иммунофлюоресценции (ИФ) и иммуноферментного анализа
- л-
игенов вируса простого герпеса в крови, слюне и моче недоношен-южденных детей п сопоставлении с их клиническими характери-
пределить с помощью метода иммуноферментного анализа диаг-и значимые величины титров противогерпетических антител класти, выявляемых в сыворотках крови недоношенных новорожденных ; матерей.
)ценить, используя методы молекулярной пібридизации, иммуно-енции и иммуноферменгного анализа, эффективность реафероно-іа основании динамики изменения количественного содержания игенов вируса щюстот і ериеса.
азработать комплексную систему оценки, основашгую на одновре-.швлении генома возбудителя и его антигенов, для дифференциации :ительства и хронического инфекционного процесса, ассоцииро-вирусом простого герпеса у детей, проживающих в загрязненных шдами территориях.
ыявить широту распространения и формы (моно- и смешанный ха-:рпесвирусного инфицирования среди недоношенных новорожден-, их матерей и детей из зоны радиационного контроля, сертационная работа вьшолнена в Московском научно-тельском институте педиатрии и детской хирургии МЗМП РФ і и научный консультант работы - академик РАМН, проф. 10. Е. в). Реализация поставленных задач и цели осуществлялась на базе диационной экопатологии (рук. д.м.н. Л.С. Балева), отдела физио-1Т0Л0П1И новорожденных (рук. Г. М. Дементьева) МНИИНДХ, отде-нологии (рук. д.м.н. М. М. Гараев) и отдела сравнительной вирусо-к. д.м.н. Баринский И. Ф.) института вирусологии им. Д. И. Иванов-ірусологической лаборатории ВНИИГБ совместно с к.б.н. Пугакар-L и лаборатории интерферонотерапии отдела гаггерферонов (рук. ювекая) МНИИЭМ им. И. Ф. Гамалея
і НАУЧНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
помощью методов молекулярной гибридизации, иымуно-
(енции и иммунофермеїггного анализа разработана оригинальная
(енная шкала оценки степени инфицировагаюсти вирусом простого
позволившая установить взаимосвязь между стс-
пенью инфицирования и тяжестью клинического состояния обследованных.
Методами молекулярной гибридизации, иммунофлюоресценции и иммуноферментного анализа проведен диагностический контроль, позволивший в ранние сроки оценить эффективность реаферона и предложить длительность индивидуального курса терапии.
Предложены диагностические критерии вирусоносительства и хронических форм инфекционного процесса, ассоциированного с гер-песвирусами, позволяющие прогнозировать тяжесть состояния обследованных и назначать этиотропную терапию.
Выявлена зависимость между высокой степенью инфициро-ванности герпесвирусами детей из зоны радиационного контроля и степенью загрязнения территории.
Методами молекулярной гибридизации и иммунофлюоресценции была установлена высокая частота встречаемости герпесвирусного инфицирования среди недоношенных новорожденных детей, их матерей и детей, проживающих на экологически неблагоприятных территориях.
Предложены параметры количественной индикации вируса простого герпеса методами молекулярной гибридизации, иммунофлюоресценции и иммуноферментного анализа, а также комплекса этих методов для использования в клинической практике.
Определение стадии инфекционного процесса по данным количественной многофакторной системы оценки результатов вирусологических исследований (активная фаза или хроническая вялотекущая инфекция) позволяет формировать группы риска по развитию инфекционной патологии, ассоциированной с. вирусом простого герпеса (ВПГ), в доклиническом периоде инфекционного процесса, назначать применение этиогропной терапии в период активной фазы инфекционного процесса, когда терапия наиболее эффективна.
Результата работы использованы в клинической практике Московского Научно-Исследовательского Института Педиатрии и Детской Хирургии МЗМП России.
По материалам работы полнены удостоверения на рационхчи-заторские предложения^ 989 от 21.09.93 "Модификация метода ИФ и оценка результатов его анализа"^ 990 от 21.09-93 "Расширенная диагностика герпетической инфекции по данным методов МГ,ИФ и ИФА"; N 991 от 21.09.93 "Способ оценки тяжести состояния инфицированных ВПГ детей;Ьт 992 от 21.09.93 "Дополнительные показатели тяжести состояния детей при герпесвирусной инфекции"^ 993 от 21.09.93 "Эффективность диагностического контроля, проводимого методами МГ, ИФ и ИФА по выявлению герпесвирусных агентов в клинических образцах новорожденных детей при реаферонотерапии";К 994 от 21.09-93 "Способ оценки результатов анализов методом прямой иммунофлюоресценции при диагностике герпетической инфекции в биологических жидкостях"; N 995 от 21,09-93 "Способ оценки адекватности применяемой терапии с помощью диагностического контроля, проводимого методом МГ"; N1019 от 18.09-94'' Маркеры риска развития полиорганной соматической патологии, ассоциированной с персистентными герпесвирусной и хламидий-ной инфекциями у детей, пострадавших в результате ЧАЭС-аварии"; N1020 от 18.09.94 "Способ количественной многофакторной системы оценки результатов вирусологических исследований для выявления герпетической инфекции".
Основные положения настоящей работы обсуждены на совместном заседании отдела радиационной экопатологии и отдела физиологии и патологии новорожденных МНИИ Педиатрии и Детской Хирургии МЗМП России.
Материалы диссертации опубликованы в медицинской печати (6 работ).
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ