Введение к работе
Актуальность темы. Продолжающееся в последние годы ухудшение экологической ситуации, сложная социально-экономическая оостановка, широкое часто бесконтрольное применение населением антибиотиков и хнмиопрепаратов, воздействие других неблагоприятных факторов, приводит к изменению иммунологической реактивности организма и нарушению микроэкологии пищеварительного тракта, которое характеризуется резким снижением содержания представителей анаэробных бактерий и возрастанием пропорции в общем пуле микроорганизмов условно-патогенных бактерий и грибов. В силу морфологической и функциональной незрелости пищеварительной и иммунной систем наиболее подвержены подобным воздействиям дети раннего возраста, у которых нарушение баланса между организмом и его микрофлорой сопровождается различными клиническими проявлениями, среди которых наиболее распространены кишечные заболевания, сопровождающиеся диарейным синдромом (С.Д.Митрохин, 1990; А.А.Морунова, 1990; И.Б.Куваева, К.С.Ладодо, 1991; Б.А.Шендеров, 1987, 1994; O.II.Braun, 1988; A.Lidbeck et al., 1991).
Исследованиями последних лет установлено, что в этиологии диарейных заболеваний у детей раннего возраста важная роль принадлежит условно-патогенным энтеробактериям родов Proteus, Klebsiella, Citrobacier, Salmonella и их ассоциациям ( Е.П.Хубка и соавт., 1990; Э.Н.Симованьян и соавт., 1990; Г.А.Бокова, 1991; В.И.Кузнецов и соавт., 1991; Е.А.Семенова и соавт., 1993; H.E.Muller, 1989] P.Williams, J.M.Tomas, 1990).
В структуре сальмонеллезов превалируют заболевания, вызванные S.typhirnurium (так называемыми «госпитальными штаммами»), однако в настоящее время увеличивается процент" других видов сальмонелл (В.И.Покровский и соавт., 1989; О.В.Нарвская, В.В.Бабков, 1990; Б.И.Маракуша и соавт., 1995; В.А.Петрюк и соавт., 1996; Л.Б.Хазенсон и соавт., 1996; I.S.Hyam eta!., 1980; R.Helmuth et al., 1985; Gories Bradley D. et a!., 1994). : Условно-патогенные микроорганизмы, попадая в организм ребенка, способны вызывать инфекционный процесс благодаря наличию у них факторов патогенносте. К таким факторам относят способность к адгезии и колонизации кишечника, синтез энтеротоксннов, ферментов ' патогенноеги, различные' внеклеточные структуры, обеспечивающие селективное преимущество и лекарственную устойчивость (Ю.В.Езепчук, 1985; С.С.Г'изатулина іі соавт.,
4-.
1988; Е.А.Семенова и соавт., 1993; Л.В.Пархоменко и соавт., 1993; В.В.Высоцкий, 1994; В.М.Бондаренко и соавт., 1994, 1996; Ю.А.Белая, О.Ф.Белая, 1996; J.M.Tomas et al., 1986; P.Williams, J.M.Tomas, 1990; J.L.Zarsen, 1992; S.Grund, A.Seiler, 1993; C.L.Wells etal., 1993).
Условно-патогенные энтеробактерии, вызывающие диарсйные заболевания, устойчивы к действию широкого спектра антибиотиков. В связи с этим применение последних в качестве этиотропиых средств лечения малоэффективно, а также вызывает у детей раннего возраста нежелательные побочные реакции, приводит к дальнейшему формированию лекарственно устойчивых штаммов, снижению колонизационной резистентности кишечника, развитию дисбиозов (Б.В.Пинегин и соавт., 1984; А.МЛитяева, Е.С.Закопаева, 1989; А.М.Лянная, Э.П.Козлова, 1989; Л.Н.Милютина, Н.В.Воротынцева, 1993; C.E.Nord, C.E.Edlund, 1991).
Сформировавшиеся'дисбиозы кишечника трудно поддаются лечению и для полного выздоровления, сопровождающегося нормализацией микрофлоры кишечника и восстановлением эубиоза, требуется длительное время. Используемые в настоящее время для лечения кишечных расстройств биологические препараты из микробов-эубиотиков, оказывают, в целом, благоприятный эффект, но требуют длительных курсов терапии и не всегда эффективны в остром периоде болезни (В.Г.Дорофейчук и соавт., 1988; В.А.Новокшонова и соавт., 1994; В.М.Коршунов, 1995).
Учитывая, что число факторов, способствующих развитию заболеваний, сопровождающихся диарейным синдромом у детей раннего возраста велико и спектр их возрастает, разработка эффективных средств профилактики и лечения кишечных расстройств различной этиологии является одной из важнейших проблем современной медицины.
Коллективом авторов Ростовского-на-Дону НИИ микробиологии и паразитологии разработан и внедрен в практику здравоохранения новый класс безвредных, физиологичных, экологически чистых и высокоэффективных биопрепаратов - иммунных лактоглобулинов из молозива вакцинированных коров, основным действующим началом которых являются иммуноглобулины, адаптированные к пищеварительному тракту и обладающие антибактериальной активностью по отношению к целому ряду условно-патогенных энтеробак-терий. Эти разработки получили высокую оценку педиатров, коллектив авторов удостоен Государственной премии Российской Федерации в области науки и техники за 1996 год.
Являясь соавтором разработки второго препарата этого класса — лактогло-булина против условно-патогенных бактерий и сальмонелл, принимала участие в испытаниях препарата'на всех этапах его доклинического изучения на этапе государственных клинических испытаний. Итоги этой работы представлены в диссертации.
Цель исследования: охарактеризовать микробиоценоз толстого кишечника детей, больных диарейными заболеваниями, вызванными условно-патогенными энтеробактериями, в процессе лечения иммунным лактоглобулином, обосновать некоторые механизмы коррекции микробиоценоза кишечника препаратом.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи: 1. Изучить специфическую антибактериальную активность препарата в эксперименте на животных и на клиническом материале.
-
Исследовать особенности качественного и количественного состава микробиоценоза толстого кишечника детей, больных диарейными заболеваниями, в динамике лечения лактоглобулином против услозно-патогенных бактерий и сальмонелл.
-
Изучить динамику биологических свойств и факторов патогенності! условно-патогенных энтеробактерий, выделенных от детей до начала лечения и в процессе лечения препаратом.
-
Исследовать некоторые механизмы действия препарата на микробную клетку условно-патогенных энтеробактерий.
Научная новизна: Охарактеризованы факторы патогенное условно-патогенных энтеробактерий и сальмонелл при экспериментальной моио- и ассоциированной сальмонеллезной инфекции, а также при диарейных заболеваниях у детей в процессе лечения препаратом - иммунным лактоглобулином. Выявлено значительное снижение токсигенных и вирулентных свойств, ДНК-азной и каталазной активности, повышение чувствительности к антибиотикам энтеробактерий, выделяемых в сроки, предшествующие полной элиминации возбудителя из организма. Показано, что утрата штаммами токсигенностн и повышение чувствительности к антибиотикам не связаны с элиминацией плазмид из бактериальной клетки.
Теоретическая и практическая значимость работы:
установлен высокий специфический антибактериальный эффект лактоглобулина в эксперименте, на разработанных иероралышх моделях моно-
и ассоциированной сальмонеллезной инфекций у животных, и на клиническом маїериапе;
в процессе лечения лактоглобулином против условно-патогенных бактерий и сальмонелл выявлено значительное снижение токсигенных и вирулентных свойств, ДНК-азной и каталазной активности, повышение чувствительности к антибиотикам выделяемых штаммов, с чем связана эффективность лечебного действия препарата;
показано, что утрата штаммами токсигенности и повышение чувствительности к антибиотикам не связаны с изменением плазмидного профиля бактериальной клетки;
полученные в результате работы данные о действии препарата на возбудителей инфекции вошли в отчет о государственных испытаниях препарата, обосновали критерии применения лактоглобулина, были использованы при составлении «Инструкции по применению лактоглобулина против условно-патогенных бактерий и сальмонелл».
Положения, выносимые на защиту:
- Микрофлора толстого кишечника детей раннего возраста, больных
диарейными заболеваниями, вызванными S.typhimurium, P.vulgaris, P.mirabilis,
K.pneumoniae и их ассоциациями, характеризуется на фоне высокой высевае
мое і и из кишечника детей возбудителей инфекции, нарушениями в микробио
ценозе кишечника, характерными для 1-ой, 2-ой, 3-ей степени дисбактериоза.
под влиянием иммунного лактоглобулина штаммы условно-патогенных эшеробактерии - возбудители инфекций, выделяемые в сроки, предшествующие полной элиминации из организма, теряют токсигенность, снижается вирулентность, ДНК-азная и каталазная активность, повышается чувствительность к антибиотикам.
- у грата штаммами токсигенности и повышение чувствительности к антибио-
іикам не связаны с изменением плазмидного состава бактериальной клетки.
Апробация работы. Материал диссертации доложен на II Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, апрель 1995 г.); всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию основания МНИИЭМ им. Габричевского «Дисбактериозы и эубиотики» (Москпа. март 1996 г.). Апробация диссертации проведена на конференции лаборатории микробиологии и разработки иммунобиологических препаратов
Ростовского-на-Дону НИИ микробиологии и паразитологии 15 октября 1996 г., а также на заседании Ученого совета РНИИМП 22 октября 1996 г.
Публикация материалов иссіедования. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Габога изложена на 159 страницах машинописного текста, иллюстрирована П рисунками и 34 таблицами. Список литературы включает 145 отечественных и 68 зарубежных источников.