Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 11
1.1. Морфология и фенотипические признаки Я pylori 12
1.2. Современные методы индикации и идентификации Я. pylori 14
1.3. Патогенез хеликобактериоза 18
1.4. Современные методы этиотропной терапии хеликобактериозов 29
Экспериментальная часть
Материалы и методы исследований 38
2.1. Материалы , 38
2.2. Культивирование и выделение Я. pylori 39
2.3. Изучение вирулентности и адгезивности выделенных изолятов Я. pylori 42
2.4. Определение антибиотикограммы выделенных изолятов Я. pylori 43
2.5. Рекултивирование и длительное сохранение культур Я. pylori 44
2.6. Изучение влияния минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» на культуральные и биохимические свойства Я pylori in vitro...45
2.7. Изучение влияния озонированной воды на культуральные и биохимические свойства Я. pylori in vitro 47
2.8.Разработка новых диагностических методов для ускоренной идентификации Я. pylori 48
Результаты исследований 51
3.1. Общие характеристики выделенных изолятов Я. pylori 51
3.2. Антибиотикограммы выделенных изолятов Я. pylori 59
3.3. Влияния минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» и озонированной воды на культуральные и биохимические свойства Я. pylori in vitro 60
З 4. Рекултивирование и длительное сохранение культур Я pylori 62
3 5.Новые диагностические методы для ускоренной идентификации
Н pylori 64
Обсуждение результатов 69
Выводы 78
Приложения 80
Литература 83
- Морфология и фенотипические признаки Я pylori
- Современные методы индикации и идентификации Я. pylori
- Изучение вирулентности и адгезивности выделенных изолятов Я. pylori
- Антибиотикограммы выделенных изолятов Я. pylori
Введение к работе
Актуальность: Заболевания, опосредованные инфицированием организма
человека Helicobacter pylori, составляют важную медико-социальную проблему современной медицины (Григорьев, 1996). Я pylori является широко распространённой бактерией, и по разным данным, инфицированность населения варьирует в пределах 60-90%) (Cave, 1997). В развивающихся странах частота инфицирования Я. pylori составляет от 80-90%; в США от 35-40% (Lacy et al., 2001) и в РФ от 71-90% (Reshetnikov et al., 2001). Я pylori выявляют у 80-100%) больных хроническим гастритом, у 70-80%> страдающих язвой желудка, у 90-100%) — язвой двенадцатиперстной кишки, а также у 100% пациентов с MALT-лимфомами (Alkan et al., 1996; Sipponen, 1992; Sipponen et al, 1999), у 80-95% с аденокарциномами желудка (Lord et al., 2000) и у 60%) больных с диспепсиями неязвенной этиологии (Moran et al.,1996). Кроме того, ряд авторов предполагает наличие взаимосвязи между инфицированием H.pylori и развитием ишемической болезни сердца (Mendall et al., 1994; Sandifer et al., 1996; Roussos et al., 2003).
Известно, что инфицированность H.pylori в четыре раза повышает риск развития язвенной патологии желудочно-кишечного тракта (Forman,1991, 1996). При этом колонизация бактериями слизистой желудка не всегда вызывает развернутую картину хронического гастрита. Чаще можно наблюдать латентный процесс либо бессимптомное носительство (Haas et al., 1994). Только у 15- 20% лиц инфицированы Я. pylori развивается язвенной патологии желудка и двенадцатиперстной кишки (Anand et al., 1996; Figura, 1996; Blaser, 1998; Lacy et al., 2001).
Следует отметить, что, несмотря на определенные успехи, до настоящего времени эффективность рекомендованных схем лечения хеликобактериозов варьирует в пределах 65-87%), но в большинстве случаев она зависит от чувствительности бактерий к применяемым антибактериальным препаратам (Brzozowski et al., 2003; Graham et al., 1996). Длительный прием препаратов, входящих в схему лечения, часто проводит к
развитию резистентности и формированию устойчивых штаммов. В Европе резистентность Я. pylori к метронидазолу в среднем составляет 27% и к кларитромицину 10% (Glupczynski et al., 2001). В частности, в странах восточной Европы, резистентность к метронидазолу и к кларитромицину ^оставляет 40,3% и 10,6% (Boyanova et al., 2002); в Великобритании 59% и 11% (Nicola et al., 2005); и в Голландии 14% и 1% (Janssen et al., 2006). В США резистентность к метронидазолу и кларитромицину составляет 25,1% и 12,9% (Duck et al., 2004) и в странах латинской Америки отмечают до 80% случаев резистентности к метронидазолу (Magalhaes et al, 2002). В странах Азии резистентность хеликобактеров к метронидазолу увеличилось с 22% в 1991 году до 73%) в 1995 году (Ling et al., 1996). Отмечено и стремительный рост резистентности Я. pylori к тетрациклину (Ribiero et al., 2004) и по іанньїм Jeng Yih Wu, (2005г) резистентность Я. pylori к тетрациклину достигает 59%) в Китае.
В РФ резистентность бактерий к метронидазолу у больных, ранее получавших антихеликобактерную терапию по поводу язвенной болезни, может достигать 100%) (Кудрявцева, 1999). Резистентные штаммы Я. pylori значительно труднее поддаются элиминации, что существенно снижает (до 50%)) эффективность проводимого лечения и делает его экономически невыгодными (Иваницкий, 1998; Мерабишвили, 2001; Иваников, 2002). С повышением резистентности бактерий связывают рост осложнений і астродуоденальной патологии, и, следовательно, значительное увеличение затрат на лечение, что является не только медицинской, но и социально-экономической проблемой.
Минерализованные воды и озон нашли применение при лечении гастродуоденальной патологии. Л. В. Игнатко и В. В. Швардака (2001), отмечали, что сульфидная слабоминерализованная вода в дозе 5 мл/кг массы тела в комплексной терапии приводит к эрадикации Я. pylori у детей. Еще в 1994г, Hawrylik и соавторы сообщили об ингибирующем действием бисульфитных и сульфитных катионов на рост H.pylori in vitro. По данным
В.А. Максимова и соавторы (1994), озон воздействует на различные звенья патогенеза язвенной болезни; и внутривенное введение озонированного физиологического раствора на фоне противоязвенной терапии ведет к эрадикацией Я pylori в 40-60% случаев (Каратаев , 2001).
Вышеуказанное делает перспективным поиск и внедрение в практику новых доступных подходов к элиминации Я. pylori, направленных на улучшение результатов лечения язвенной гастродуоденальной патологии.
«Золотым стандартом» бактериологической диагностики
хеликобактериозов является выделение возбудителя из биоптатов слизистой (Баженов и соавт., 1990; Аруин, 1993). Важный момент бак. анализа — выявление уреазы, косвенно свидетельствующей о наличии H.pylori. К настоящему времени предложены различные методики. Тем не менее, можно столкнуться с ложноположительными результатами, связанной с ростом в посевах сопутствующей флоры. Этот факт представляет существенно значимой проблему разработки новых селективных сред и более устойчивых уреазных тестов.
Цель: разработать новые подходы к идентификации и элиминации Я. pylori у пациентов с язвенными поражениями желудка и двенадцатиперстной кишки.
Задачи исследования: В соответствии с целью перед исследованием были поставлены следующие задачи:
1. Изучить влияние озонированной и сульфидной минерализованной
воды на культуральные и биохимические свойства Я. pylori in vitro. 2 Разработать новую питательную среду и модифицировать уреазный
тест для ускоренного выделения Я. pylori. 3. Определить частоту обнаружения Я pylori у пациентов с раком желудка, гастродуоденитами и соответствующими язвенными
поражениями в зависимости от пола и возраста больных и установить
корреляцию между нею и заболеваемостью гастродуоденального
отдела желудочно-кишечного тракта.
ш 4. Определить вирулентные свойства и чувствительность к
антибактериальным препаратам штаммов Я. pylori, выделенных от больных язвенной патологии желудка и двенадцатиперстной кишки.
5. Определить частоту повторного обнаружения Я pylori у
прооперированных больных, получавших курсы премедикации и
послеоперационной антибактериальной терапии и оценить их
эффективность.
6. Изучить возможность длительного сохранения культур Я pylori.
Научная новизна
Впервые установлено, что озонированная вода концентрация озона 5мкг/мл снижает жизнеспособность Я. pylori in vitro, в том числе за счет
* ограничения их подвижности, снижения уреазной активности и подавления
роста на плотных средах. Сульфидная минерализованная вода из источника
санатория «Чувашия» в различных концентрациях проявляет аналогичные
свойства в отношении культур Я. pylori in vitro.
Выявлена корреляция между степенью вирулентности изолятов Я. pylori и тяжестью последовательных патологий слизистой желудка.
Впервые разработан и использован на практике эритрит-сывороточный агар с мочевиной (ЭСАМ) для ускоренной идентификации Я. pylori из клинического материала.
Впервые разработан модифицированный уреазный тест, включающий применение 1% раствора Люголя и фурацилина, для определения уреазной активности Я. pylori в биоптатах.
Предложена методика длительного сохранения выделенных штаммов Н pylori в консервирующей смеси при -10 С.
Практическая значимость
Новые методы выделения и идентификации Н. pylori, предложенные в работе, значительно облегчают культивирование и идентификацию бактерий, выделенных из клинического материала. Разработанная модификация уреазного теста отличается простотой проведения, доступностью и воспроизводимостью полученных результатов.
Положения, выносимые на защиту
Озонированная вода в концентрации 5мкг/мл и сульфидная минерализованная вода из источника санатория «Чувашия» в различных концентрациях снижают жизнеспособность К pylori in vitro, проявляющуюся ограничением их подвижности, угнетением синтеза уреазы и подавлением роста на плотных средах.
Степень тяжести последовательных патологий желудочно-кишечного тракта зависит от степени вирулентности Н. pylori.
Возможно длительное хранение изолятов К pylori при -10 С в консервирующей смеси (сахарозо-желатиновой среде в буферном растворе) на срок до 12 месяцев.
Для ускоренной идентификации Н. pylori из клинического материала можно использовать эритрит-сывороточный агар с мочевиной (ЭСАМ) и модифицированный уреазный тест, включающий применение 1% раствора Люголя и фурацилина.
Апробация материалов работы
Основные положения диссертации доложены на 11-ой научно-практической конференции Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения» (Казань 2004); на 13-ой научно-практической конференции Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения» (Казань 2005); на международном симпозиуме «Научные основы обеспечения зашиты животных от экзотоксикантов,
радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань 2005), на научно-практическом семинаре «Современные возможности выявления Я pylori и кампилобактерий в лабораторной практике» (Казань 2005).
Морфология и фенотипические признаки Я pylori
Хеликобактеры представлены грамотрицательными, короткими, S-образно изогнутыми бактериями; средние размеры 2,5-4 к 0,5 мкм. Бактерии подвижны (лофотрихи); жгутиков обычно 4-5 и имеют колбовидные утолщения на концах. (Marshall, Warren, 1984). Бактерии не образуют спор и капсул. Лучше растут в микроаэрофильных и капнофильных условиях. В аэробных и анаэробных условиях не растут. Температурный максимум — 37 С, но многие штаммы растут в диапазоне 33-41 С, не растут при 25-28 и 42 С (несмотря на определенную термофильность).
Наиболее оптимальными средами для роста являются шоколадный и кровяной агары, но Н. pylori может так же расти (но медленно) и на средах без гемина, например, содержащих 10% сыворотки (что отличает их от прочих кампилобактеров). Бактерии не растут на средах, содержащих глицерин (1%), желчные соли (1%) и NaCl (2-3,5 %). На твердых средах образуют мелкие (около 1 мм) прозрачные, блестящие колонии, содержащие бактерии с характерной морфологией. По мере старения в колониях начинают преобладать кокковидные формы. Некоторые штаммы проявляют і емолитическую активность (а-гемолиз). В жидких средах образуют поверхностную голубовато-серую пленку и незначительное помутнение среды (Баженов и соавт., 1990; Грацианская, Татаринов, 2000; Меджиев и соавт., 2000; Жебрун и соавт., 2002)
Для нормального роста Н. pylori нуждается в ионах железа. Для этой цели он образует сидерофоры для захвата ионов Fe2+ из окружающей среды. Ион Fe входит в состав ферментов Н. pylori и является ко-фактором супероксиддисмутазы (Pesci et al., 1994). При избытке ионов железа в среде они накапливаются в цитоплазме в виде кристаллов, образуемых ими с ферретином (Gancz, 2006; Mai et al., 1992).
В качестве факторов роста и размножения, Н. pylori нуждаются и в ряде готовых аминокислот, в частности в аргинине, гистидине, изолейцине, лейцине, метионине, фенилаланине, валине и серине. Они используют эти аминокислоты не только для синтеза белков, но и как основной источник энергии (Marais et al., 1999).
В неблагоприятных условиях (влияние антимикробных факторов организма, изменение рН, температуры, осмотического давления и т.д.) бактерии быстро теряют характерную морфологию и трансформируются в кокковидные формы (Finlay et al., 1997; Blaser, 1998, 2001). Такая трансформация ведет к утрате многих поверхностных антигенов, способности к размножению, а также к снижению метаболитической ш активности что, по мнению многих авторов, является одним из способов сохранения жизнеспособности по типу покоящихся форм бактерий (Eaton et al, 1995; Willen et al., 2000; Cellini et al., 2001). Однако, не смотря на снижение метаболитической активности, кокковидные формы сохраняют способность колонизировать клетки эпителия желудка и вызывать их повреждение (Benaissa et al., 1996; Ren et al., 1999; She et al., 2003).
В целом, хеликобактеры являются метаболически активными бактериями: они продуцируют уреазу, транспентидазу, супероксид дисмутазу, муциназу, глутамилтранспептидазу, фосфатазу и несколько типов фосфолипаз огЙШеМ et al.,1994): фосфолипазы Аь А2 (Langton et al., 1992) и С (Wetkamp et al., 1993), фукозидазу, нейраминидазу и глюкосульфатазу (Slomianyet al., 1992;Dwarakanath et al., 1995) и протеазы (Markesichet al., 1995). Бактерии образуют H2S, не восстанавливают нитраты, не свертывают молоко. Но проявляют инертность в отношении углеводов, утилизируя только глюкозу (Домарадский, 2002).
Антигенная структура хеликобактеров изучена не полностью, но доказано существование нескольких сероваров, агглютинирующихся неадсорбированными сыворотками к Campylobacter coli. Установлено наличие О- и Н-АГ, а также типоспецифичных поверхностных белковых АГ (Могап, 1996; Ernst et al., 1997).
Современные методы индикации и идентификации Я. pylori
В начале изучения H.pylori методы их индикации были весьма трудоемкими и малодоступными, однако в настоящее время индикация бактерий значительно упрощена. Основные группы методов, разработанные для диагностики Я. pylori представлены в таблице 1.2.
К прямым, или инвазивным методам, относят методы, для проведения которых необходима эзофагогастродуоденоскопия, т.к. материалом для исследования служат биоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Непрямыми, или неинвазивными, называют методы, не требующие эндоскопического исследования (Atherton, 1997; Cohen et al., 1997). Прямые методы позволяют непосредственно выделять Я. pylori, в то время как косвенные методы не более как регистрируют факт наличия бактерий или их метаболитов (что весьма проблематично, т.к. сходные продукты образуют и другие микроорганизмы). «Золотым стандартом» в изучении Я. pylori и ассоциированных с ним патологий, считают выделение Я pylori и изучение его вирулентных свойств (Жебрун и соавт., 2002).
В бактериологической диагностике обычно исследуют биоптаты слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки (могут быть и другие образцы). При доставке биоптатов в лаборатории применяют различные транспортные среды (Стюарта, Portagerm-pylori и др.) для сохранения жизнеспособности бактерий (Glupczynski, 2001; Грацианская, Татаринов, 2000). Для выделения бактерий, применяют как селективные, так и не селективные питательные среды (Меджиев и соавт., 2000). Специфичность бактериологического метода составляет почти 100% (Аруин, 1993).
На практике чаще используют гистологические методы исследования, позволяющие обнаружить Я. pylori в биоптатах и одновременно изучить морфологические изменения, происходящие в слизистой оболочке. По Романовскому-Гимзе бактерии окрашиваются в темно-синий цвет и хорошо видны как на поверхности эпителия, так и в глубине крипт. Частота выявления Я. pylori гистологическим методом составляет не менее 75-80% (Григорьев, 1996; Жебрун и соавт., 2002). Можно варьировать различные варианты окраски препаратов — по Граму, гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону, а также проводить люминесцентную микроскопию, окрашивая бактерии акридиновым оранжевым (Зайцева, 1991).
Для цитологических исследований используют мазки-отпечатки, полученные из антральных отделов слизистой оболочки желудка. При микроскопии биоптатов или мазков-отпечатков, определяют степень обсеменения. Однако, чувствительность данного метода составляет, в среднем 18-20%, так как Я. pylori в препаратах можно выявить только в случае максимального обсеменения слизистой оболочки (Cohen, Laine, 1997).
Для выявления уреазы, косвенно свидетельствующей о наличии Я. pvlori, предложены различные диагностические методы, которые часто также называют биохимическими методами. В диагностические среды, включающие мочевину, антибиотик (к которым Я pylori обычно резистентен) и индикатор феноловый красный, помещают исследуемый биоптат. Если в среде происходит разложение мочевины, то образуется аммиак, рН среды сдвигается в щелочную сторону и жидкость меняет цвет с желтого на малиновый. В настоящее время имеются уреазные тесты промышленного производства (например, Де-Нол тест, СЮ- тест, Pylori Тек).
Результаты уреазного теста, как правило, совпадают с гистологическими данными. С помощью уреазного теста Н. pylori обнаруживается в 56-86% случаев. Некоторые авторы рекомендуют t сочетание уреазного теста и гистологического исследования, как наиболее информативные (Баженов и соавт., 1990; Морозов, 1999; Грацианская, Татаринов, 2000; Меджиев и соавт., 2000; Жебрун и соавт., 2001).
Уреазный дыхательный тест (UBT, urease breath test) является простым неинвазивным методом для выявления К pylori. Биохимический принцип UBT аналогичен таковому экспресс-уреазного теста с биоптатами слизистой оболочки желудка: присутствие в слизистой оболочке желудка значительного количества уреазы приводит к разложению мочевины, меченной изотопами углерода 13С или 14С. Меченая мочевина дается пациенту в составе пробного завтрака. В качестве пробных завтраков наиболее часто применяют Colagen, Ensure и раствор лимонной кислоты. Мочевина разлагается до НС03 и NH». Из НС03 образуется 13С02, появляющийся в выдыхаемом воздухе и измеряемый на масс-спектрометре по отношению к СОг (Дорофейчук и соавт., 1997).Однако противопоказано данный тест у пациентов, которые раньше применили блокаторы Нг-рецепторов гистамина, так как это дает ложноотрицательные результаты (Graham et al., 1996, 1997). Данный метод имеет ряд недостатков, т.к. он является дорогостоящим, представляет определенную опасность (4С радиоактивен и противопоказан детьми и беременным женщинам), степень гидролиза мочевины может существенно зависить от особенностей метаболизма исследуемого лица (Atherton, 1997).
Изучение вирулентности и адгезивности выделенных изолятов Я. pylori
Вирулентность выделенных штаммов определяли по способности воспринимать краситель Романовского-Гимзы по методике, предложенной Л.В. Григорьевой и соавт. (1992) для сальмонелл и эшерихий.
Для этого на свежевыросшие колонии наносили по 5 мл красителя Романовского-Гимзы (разведенного 1:10) и оставляли на 5 минут при 18 С. Затем краситель удаляли и учитывали результат. Степень вирулентности определяли по интенсивности окрашивания. Колонии вирулентных штаммов окрашивались от синего, зеленого до светло-голубого и светло-зеленого цвета. Колонии авирулентных штаммов оставались бесцветными или окрашивались только по периферии в светло-голубой и светло-зеленый цвет. Выраженность окрашивания колоний соответствовала степеням вирулентности: «++++» - колонии темно-синие; «+++» — колонии синие или зеленые; «++»— колонии светло-голубые или светло-зеленые; «+»— колонии окрашены по периферии в светло-голубой или светло-зеленый цвет; «-» — колонии не окрашены.
Для изучения адгезивных свойств выделенных штаммов Н. pylori применяли реакцию прямой гемагглютинации на стекле в присутствии D-маннозы по методу, предложенному Б.Г Каральником и соавт. (1990) для Citrobacter. На предметное стекло наносили три капли физиологического раствора с D-маннозой. В первую каплю вносили петлей культуру и 3% взвесь соответствующих эритроцитов. Во вторую каплю (контроль 1) вносили только исследуемую культуру (для исключения спонтанной , агглютинации). В третью каплю (контроль 2) вносили каплю 3% взвеси ритроцитов (для исключения спонтанной гемагглютинации). Пробу ставили в холодильник на 5-7 минут и затем учитывали результаты по степени просветления жидкости и образованию конгломерата: «++++» — жидкость прозрачная, агглютинат крупный; «+++»— жидкость мутная, агглютинат крупный; «++»— жидкость мутная, агглютинат едва заметен; «-»— » жидкость мутная, агглютинат отсутствует. Определение чувствительности выделенных изолятов Н. pylori к антибактериальным препаратам
В наших исследованиях мы определяли антибиотикограмм 42 штаммов Н pylori, выделенных у больных гастродуоденитом и язвенной патологией желудка и двенадцатиперстной кишки диско-диффузионным методом со стандартными дисками антибиотиков и производными имидазола (метронидазол и фуразолидол).
Для этого мы выделяли Н. pylori по схеме, описанной выше. Выросшие колонии изучали визуально и устанавливали факт принадлежности микроба к Н pylori по морфологии, оксидазной и каталазной активности. Далее определяли чувствительность выделенной чистой культуры к антибиотикам диско-диффузионным методом. Для этого использовали чашки с КА и стандартный набор дисков антибиотиков и производных имидазола (метронидазол и фуразолидол). На поверхность питательной среды в чашках Петри наносили 1 мл взвеси чистой культуры, мутность которой соответствовала 0,5 стандарта McFarland, равномерно распределяли путём покачивания чашки и удаляли избыток пипеткой. Спустя 10 минут пинцетом накладывали в стерильных условиях по 6 дисков с антибактериальными препаратами на расстояние 2 см друг от друга. Посевы культивировали в микроаэрофильных условиях 5-7 суток. После инкубирования измеряли диаметры зон задержки роста.
Рекультивирование и сохранение культур Н. pylori.
Мы исследовали возможность рекультивирования 20 изолятов Я. pylori, выделенных от обследованных нами больных. Рекультивирование культур Н. pylori проводилось на ЭКАА, посевы инкубировали в микроаэрофильных условиях при 37С в течение 5-7дней. При обнаружении роста культуры Н. pylori проводилось определение культуральных и биохимических свойств, вирулентности, а затем делали повторный посев.
Нами была изучена способность Н. pylori (30 изолятов) к длительному охранению в морозильной камере в модифицированной консервирующей смеси (сахарозо-желатиновая среда в буферно - физиологическом растворе) (приложение №2 и №3). Для защиты клеток Я pylori от отрицательного воздействия низких температур мы использовали криопротекторы двух типов: желатин, который легко переходит через клеточную мембрану и обеспечивает внутри- и внеклеточную защиту, и сахарозу, обеспечивающую защитное действие на наружной поверхности мембраны.
Культуры Я. pylori, выделенные от больных с очаговой патологией желудка, по 3-4 петли помещали на дно агглютинационной пробирки с консервирующей смесью и хранили при -10 С в морозильной камере. Через 6-9-12-15-18 месяцев производили медленное размораживание культур при комнатной температуре с последующим высевом на эритрит - агар и кровяной агар с добавлением 10% бараньей крови, дополненных амфотерицином В. Материал брали пипеткой со дна пробирки и производили посев по 2 капли на чашки с питательными средами. Капли растирали петлей по всей поверхности среды во взаимно перпендикулярных направлениях. Затем чашки культивировали в микроаэрофильных условиях при +37 С в іечение 3 дней.
Антибиотикограммы выделенных изолятов Я. pylori
При изучении свойств штаммов Н. pylori, выделенных после применения, то есть колонии были образованы авирулентными и слабовирулентными антибактериальных препаратов, мы обнаружили следующие изменения. Колонии отличались точечными размерами, в мазках-отпечатках р преобладали инволюционные кокковидные палочки, и ферментативная активность была снижена. Проба с анилиновыми красителями была отрицательной и слабоположительнойштаммами. Таким образом, под воздействием антибактериальных препаратов произошли модификационные изменения, способствующие длительному выживанию при неблагоприятных условиях.
Чувствительность выделенных изолятов Н. pylori к антибактериальным препаратам. В наших исследованиях мы определяли чувствительность 42 изолятов Я pylori, выделенных у больных гастродуоденитом и язвенной патологией желудка и двенадцатиперстной кишки диско-диффузионным методом со стандартными дисками.
Выделенные изоляты чувствительны к кларитромицину, амоксицилину и ципрофлоксацину почти в 85%, 79% и 90% случаев. Чувствительность к тетрациклину и эритромицину составляет около 65% и 60% соответственно. Наименьшая чувствительность выявлена к метронидазолу- 32%. Выделенные нами изоляты обладают высокой устойчивостью к цефазолину, цефалотину и цефалексину- 100%. Результаты представлены в рисунке 3.6.
Рис. 3.6. Чувствительность изолятов Н. pylori, выделенных у больных гастритом, язвенной патологией желудка и двенадцатиперстной кишки, к антибактериальным препаратам. А- Кларитромицин ; В- Амоксицилин ; С- Ципрофлоксацин ; !)-тетрациклин; Е- Эритромицин ; F- Фуразолидол ; G- Метронидазол ; Н- Цефазолин; I- Цефалотин; J- Цефалексин.
Влияние минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» и озонированной воды на Н. pylori in vitro.
Мы изучали влияние минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» на Н. pylori in vitro. В наших опытах были обследованы 22 биоптата, полученные у 22 пациентов. Нами установлено, что минерализованная сульфидная вода из санатория «Чувашия» влияет на подвижность Н. pylori in vitro. Подвижность клеток в присутствии исследуемой воды резко снизилась в отличие от контроля в присутствии физиологического раствора.
Исследуемая вода также влияет на рост Н. pylori in vitro. В опытах при время выдержки посевного материала 30 мин в сульфидной минерализованной воде частота выделения К pylori составляет 27,3% при концентрации сероводорода 25 и 10 мг/л. При концентрации сероводорода 2,5 мг/л частота выделения Я. pylori составляет 45,5 % . Однако после 60 мин выдержки посевного материала частота выделения Я. pylori 22,7% при концентрации сероводорода 25 мг/л; 27,3% при концентрации сероводорода 10 мг/л и 36,4 % при концентрации сероводорода 2,5 мг/л.
