Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМИ:Оценка эффективности иммунизации против чумы продолжает оставаться актуальной просимой, что обусловлено большим количеством существующих приропкых очагов чумы, протекающими в них эпизоотиями и необходимостью в связи
С .?"" "-"""ылпрг-Липэитчии Г.ППТПЙТСТВУКЕИХ контингєнтов населення іКугнсцова h,A. ,і9ьО;Гнаосгіии Д.С. с езаст. 102_; '/.с:";"""" А. И. с соавт.:, І989; Топоркоз S. Г., І969].
Лица, подлежащие иммунизации живой чумной вакциной (ЖЧВ), должны проходить предварительное иммунологическое обследование, а также систематический иммуномониторинг после вакцина-' цин, так как введение в ослабленный организм ЖЧВ монет иметь нежелательные последствия для иммунной системы макроорганизыа. Поэтому возникает необходимость в подборе методик, даияих сценку палинологической потенции организма в ответ на введение антигена, с целью достижения напряженного иммунитета.
До недавнего времени научение процессоз формирования иммунитета к чуме проводилось, как правило, в плане оценки гуморального авена шаіунитета. В'связи с выявлением ключевой роли ('"сточного звона н!.г*'читета в иммуногенезе данное да^екции, большое значение уделяется поиску методик для. оценки участия Т
лимфоцитов и клеток системы мононук-леарных Ф2ГОЦИТОВ (СМФ) в ч. иммунном ответе на вакцинацию КЧВ.В кзетатвгес бремя воствточко полно освецена роль"Т системы [Герасимова К.И., 1990; Саяппна Л. В.. 1991; Ледванов М.Ю. с соавт., і991]^кейтрзфильннх лейкоцитов прИ формировании , иммунитета ь чуме [Стукоза Н. Д 1991]. Однако, учитывая, что чумной микроб является факультаттеным
внутриклеточным паразитом и исход его взаимодействия с манро-организмом зависит от киллерной активности фагоцитирующих клеток, необходимо признать, что ведущее значение в обеспечении противочумного иммунного ответа принадлежит Ш» [Васильева Г.И. ссоавт.. 1983-19ЭЗ; Куклева Л.М.Д98Є8].
В связи Q этим поиск практически удобных и информативных методик для оценки функциональной активности ыакрофагальных
клеток в процессе Формирования резистентности:к чуме является актуальным. Учиткеая, что современныз представления о роли системы мононуклеарных фагоцитов связаны с её функциональной гетерогенностью (Фрейдлин И. С. ,1984; . Земсков Б. М. ,1986; Васильева Г.И.,19911,большое значение приобретают тесты.'оценивающие её активность на популяционном. и субпоПуляционном уровнях. 8 связи с этим представляется целесообразным углубленное, всестороннее изучение динамики Популяционных и субпопуляцион-ных пу/'ов Мф и их перераспределения при формировании резистентности к чуме, а также создание на основе полученных данных модельных систем для иммуномониторинга вакцинного противочум-
- ного процесса у людей.
В настоящее время проводятся исследования по разработке методов массовой иммунизации людей в максимально короткие сроки. Особенно привлекательна в этом плане аэрогенная вакцинация, позволяющая создать защиту не только от легочной чумы, йр лот других способов заражения этой инфекцией [Самойлова Л. Б. 1983; Гапочко К. Г. с соавт. 1990; Чичерин Ю.В. с со-авт. ,1991; Васильспа Г.И.. 199Я.
На протяжении трех последних десятилетий разработка ингаляционной «ахцннацин ведется довольно широко, одначе и до каст
- 4. -.
тоящего времени остаётся актуальным вопрос о рациональном
фракционно дисперсном составе (ФДС) аэрозолей вводимых вакцин. Степень диспергирования частиц аэрозоля имеет значение, с од-нон стороны, в развитии полноценного иммунного ответа макроор-гаьизма, а с другой стороны - в сенсибилизации и проявлении токсического действия изоднаого препарата. В связи с этим,
ги прививок. проводимых аэрозолями разной дисперсности. Подбор наиболее рационального ФДС аэрозолей с помощью новых, современных иммунологических тестов даст возіложность снизить дозу антигена, что в настоящее время является весьма своевременным ввиду массовой аллергизации населения. .
.ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: изучение возможности оценки эффективности противочумной иммунизации їм модуляции функциональной активности клеток СМФ в процессе формирования резистентности к чуме при разных способах вакцинации.
І.Изучить влияние противочумной вакцинации при ингаляционной и подкожной аппликации КЧВ на динамику уровня ыиелогшрек-сидазы (МПО). рпьфа-Ніфтел-АС-ацстатзствразн (КЗ) и лкзосо-!..-Льно-натионнь;х белков фагоцитирующих клеток.
2. Исследовать динамику композиционного состава альвеолярных Мф у морских свинок при аэрогенной иммунизации разными дозами вакцины и аэрозолями разной дисперсности. ,
3.Выявить корреляционные связи между индексом перераспределения субпопуляций альвеолярных макрофагов (МФ) при аэрогенной иммунизации и резистентностью к чуме.
4. Опрсдел>*гь показатели макрофггальной трансформации мо-
ноцитов периферической крови (ПМТМ) уинтактных и иммунных животных и выявить корреляционные связи между ПМТМ и резистент-. ностью к чуме.
' 6.Изучить влияние способов аппликации, доз вакцины и аэ-
розолей с различными ФДС.на ПМТМ. - .. '
6.Разработать новые экспериментальные модели для характеристики иммунологической эффект- зности вакцинных штаммов чумного клкроба И'его антигенов, а также для подбора оптимальной дозы вакцины и' адекватного ФДС аэрозоля.
7.Ло,гобрать простой и информативный метод определения эф
фективности противочумной вакцинации у люаей при подкожной и
аэрогенной вакцинации. ;
НАУЧНАЯ НОВИЗНА: расширены наши представления о механиз
мах формирования г.оства:сцинального противочумного иммунитета и
. установлены его особенности в зависимости от способа апплика-
ции вакцины. ' ":'''.
Установлено, что вакцинация 8MB приводит к активации клеток СМФ, особенности которой существенно зависят от способа введения вакцины, дозировки аэрозолей и их дисперсности.
Получены данные о влиянии ЖЧВ на ферментные системы Ыф и их секрегорную функцию в зависимости от способа и дозы аппликации вакцины.
Впервые выявлены особенности композиции альвеолярних Мф в
зависимости от различных ФДС аэрозоля и дозировки вакцины и
установлена корреляция индекса перераспределения субпопуляций
(ИПС) данных Нф с резистентностью экспериментальных животны; к
чума . f
Выявлено влияние дозы вакцина на ПМТМ и корреляция ПМТМ с
' "e."
выживаемостью животшх при заражении их вирулентным иташом чумного микроба.
Показана всшоаность оценки с помощью ПМТМ эффективности противочумной иммунизации при подкожной и аэрогенной аппликации жчв.
Впервые с помощью ПМТМ подобрана оптимальная доза противочумной вакцины при аэрогенной иммунизации, позволяющая снизить пнімренну'} нагрузку нл организм.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ рабо;ы заключена в разработке и внедрении в .практику научных исследований новых клеточных моделей для:
оценки эффективности противочумной вакцинации экспериментальных животных и людей;
определения нммуногенности субкультур вакцинного штамма чумного микроба и его антигенов;
подбора оптимального способа аппликации и доЬы вакцины;
определения рационального ФДС вакцинных аэрозолей;
скрининга иммуномодуляторов, стимулирующих противочумный иммунитет.
Предложена модификация ПМТМ для оценки формирования иммунитета у людей.
-,-. Доступнрсть моноцитов периферической коови человека, информативность. и простота исполнения этого метода в нашей модификации позволяют рекомендовать его для наблюдения за динамикой вакцинного процесса и в качестве критерия оценки эффективности противочумной иммунизации.
Предложенные ылдоли и методы внедрены в практику научной работы Ростооского-на-Дону пр<-тивочумного института, Санкт-Пе*
" - 7 -
тербургского института Военной Медицины. СЗО Черноморского
Флота и применяются при выполнении научно'уисследовательских
плановых тем. .-,-''_.. . .
По данным диссертации составлены методические рекомендации: "По оценке противочумного иммунитета по модуляции функциональных свойств СМФ в иммунном организме" которые утверждены Учёным Советом Ростовского-на-Дону научно-исследовательского противочумного института (протокол N 13 от 20.ІІ.9ІГ.) .
По материалам диссертации оформлено изобретение, на кото-, рое получено авторское свидетельство за N 1818348 " Способ определения иммуногенности противочумных вакцин. " . .
ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:'
-
Существует прямая корреляция меаду эффективностью аэрогенной иммунизации против чумы и индексом перераспределения субпопуляций альвеолярных Мф у иммунизированных животных.
-
Характер изменения композиции субпопуляций альвеолярных Мф зависит от дозы и ФДС' апппицированного аэрозоля ЯЧВ.
3.Иммунизация людей и экспериментальных животных, против, чумы модулирует показатель макрофагальной трансформации моноцитов периферической крови, на динамику которого влияет доза и сгособ аппликации вакцины.
' . 4.Существует прямая корреляция между резистентностью экспериментальных животных к чуме и ПМЖ
5. Способ аппликации, дозы \\ ФДС вакцинного аэрозоля ЖЧВ влияют на бактерицидные.системы альвеолярных Мф.
. 6. Корреляция с эчфективностьо противочумной вакцинации, высокая чувствительность, простота выполнения и информативность ПМТМ и ИЛС позволяют использовать их для оценки клеточпо-
го иммунитета у привитых против чумы.
7. Доза ЖЧВ О.I ЧД столь же эффективна, как и 1 ЧД. что позволяет рекомендовать ее применение для снижения антигенной нагрузки на макроорганизм при аэрогенной аппликации вакцины у лсдей.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ: материалы, изложенные в диссертации обсуждались на:
мононуклеарных фагоцитов в' норне 'л при патологии" (Новоси
бирск.. 1990);. - .
Первом съезде иммунологе» России (Новосибирск. 1992); -Международном симпозиуме по аллергологии и клинической иммунологии (Алма-Ата, 1992);
Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы вакцинопро-филактики ООН" (Киров. 1991);
Всесоюзной конференции "Иммунология и специфическая профилактика 00И" (Саратов. 1993).
Диссертация обсуждена и одобрена на общеинститутской научной конференции Ростовского - на - Дону государственного научно-исследовательского противочумного института е апреле 1994 года.
ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ: основные положения 'диссертации отражены в 15 опубликованных научных работах.
' СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ: диссертация изложена на'іЗб страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, і ґлао, результатов собственных исследований, заключения, аыоодов и указателя литературы, включающего 219 работ отечественных и
зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 14 рисунками. 4 таблицами.