Введение к работе
Актуальность теглн. Бациллы как возбудитеш ішігкцііокнцх заболеваний и объекты- биотєхнологлческого применения е последнее Бремя привлекают позышенн::й интерес. Специфика их клеточной организации и функционирования существенно отличны от хорошо изученное гргпилихутіікх бактерий и исследованы недостаточно. Остаются во многом неизвестными механизмы реализации патогенгтичес-[сих функций'у бацилл, синтеза ими биологически активных веществ как токсины, ферменты, возникновения и распсстранения мноязот-пенной лекарственной устойчивости. Бее это затрудняет изыскание іутей экспериментального управления изменением свойств бацилл, придания ем нужных признаков и качеств, конструирования продуцентов бкотехнологического назначения, разработки приемов преодоления лекарственной устойчивости. Решение всех этих зопросоЕ представляется^ актуальной задачей современной микробаологии.
Основная причина, определяющая отставание в изучении отмеченное аспектов у бацилл, усматривается в ограниченней способности їх клеток к внесению и реализации новой генетической информации. Зл исключением небольшого числа трансформабельиых видов'и шта'л-.'.оь большинство звдов бацилл инертно в запрограммированном гене-гьческоі.і обмене. Это побуждает искать новые лут::.-и приемы зез-;ейстзия ка іфиродную конституцию бацилл.
:{ началу выполнения настоящей работы в литературе появились :дш:кчные указания на возможность феноменологических проявлений ' нетрэ^сфоркабелькых видовв*сіііиз отдельных признаков гибрид-іой плазміцш грациликутногс'происхождения EP4::Mu cts 62 в усло-їіьі\ ее переноса кон'ьпгатпвноподобн'їм путе:.-. Принцилиацьная но-тзн& такого подхода для бнц/лл побудпла нас к обстоятельному 1->:;ЧЄКІ!Ю этого явления.
—А.—
Цель и задачи исследования. В соответствии с вшієизлояенним целью настоящей работы явилось изучение переноса генов лекарственной устойчивости гибридной плазмиды HP4::Ku cte62 ИЗ Escherichia соїів Зао.роіудуха , их передачи йёвду разными відали . бацилл, стенотипического выражения и наследования в бациллах.
В -задачи работы входило: -выяснить возможность мезссемгйственного перекоса плазмиды RWs :Mu otB62H3E.coli вЗао.роІушуха ,стабильность ее фенотппиче-ского выракения' в бациллах и сегрегацию, установить структурные изменения плазмиды в трансципиентах при переносе и термоиндукцщ -осуществить мзавидовой перенос плазмиды у разных бацилл, определить их донорскую способность к прямой и обратной передаче, провести физическую идентификацию плазмиды у трансципиектов;
-определить способность плазмиды к транспозиции профага liu ctst в трансципиентах бацилл и индукции у них аукоотрофных мутаций с их идентификацией по питательным потребностям;
-оценить действие плазмиды на скорость роста и размножения траксцишентов, на ультраструктуру их'клеток.
Научная.новизна. Оригинальными результатами работы является следукхдие:
-впервые осуществлен конъюгатизноподобный перенос гибридной плазмиды RPA::llu ctso2 изЕ.соїі в фирыакуткый зад Бпс.роіувца» с выявлением фенотипического выражения признаков, детерминируемых плазшдсй, ее физической идентификацией в трансципиентах бацилл;
-впервые показана зозмояноеть переноса плазмиды R?4::Mu cte62 из
ТрОИСЦИПиеита Вас.сегеия -В йацИЛЛП ВЗДОЕ 3ac.thuringiens5B,Btc.
polymyxa, B.e.rr.esente.ricuFa їакхе обратного ее переноса из трглс-
..-3-щшиента Bac.thuriA^lensis в Bac.cereus с функциональной экспрессией маркеров шшзмэды;
-у грансцшшентов установлена способность генома фага Ш ots62 с транспозиции и опосредованная им возможность индукции ауксо-грофаых мутантов;
-показаны особенности наследованля и экспрессии плазмидн HP4::iiu оінбг в траксцшшентах бацилл, выракащиеся в ее кестабкль-юстя, сегрегации и элиминации, возможности отбора стабильных слонов в условиях селективного давления;.
обнаружен множественный оффект плазмидн K?4s :l?U eta62 на низне-[елтельность траксциггаентов бацилл, проявляпцийся в снижении пи-ііієсдосойеооти;лслєтск, их ускоренном аутолйтичеоком распада, за- . іедлении роста и размножения клеток, нарушении ультраструктури леточной оболочки.
Практическая значимость.Установление возможности переноса лазмиды грациликутного происхождения в клетки фирмтсутного вода ацплл и приобретение трансцшшентали бацилл донорской функции к ередале плазмидн с экспрессией ее маркеров по антибиотикорезис-ентности кокет моделировать новий путь распостранекия мнояест-оиной лекарственной устойчивости в природных ассоциациях бакте-!'.Л. Полученные .результаты обосновывают возможною концепцию о эвнх расширенных горизонтальных путях формирования мноаествен-лі лекарственной устойчивости у микроорганизмов.
Эффективный выход ауксотрофнкх мутантов в процессе термоин-пщии траноцшиентов может быть использован в научнс—практичео-)й работе с бациллами, имеющими невыраненную способность к ыу-'генезу.
Положения, вкносимиа на защиту. Обоснована возможность менсемейственного переноса плазмидн ПР4: :Ku cts62 H3EGcherichia coli в Вас.роїулцоса. Пачученные транс-
-4-ципнекты характеризуются'нестабильность» наследования- маркеров плазмиды, однако в условиях селективного давления возможно получение ста'шльшх клонов.
2.Доказана возможность коныогативноподобаого переноса.плазмиды грациликутксго происхождения у разных видов бацилл с экспрессией детерминируема ею признаков -Жвгтс и термочувствительное, но без продукции полноценного $ага.
3.Показано, что при мекзидоьой передаче плазмиды RP4«: Mu cts62y
; бацилл стабильность наследования ее признаков сзязана с постоян
ным наличием селективного давления. '
4.Индукция стабильных трансциниентов сопровождается множествен
ными ауксотрсФкима кутацшпли.
5 .Полученные тракснипиенты характеризуются изменениями скорости
роста и размножения, биологических свойств и ультраструктури
клеточной стенки. :
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы. Работа изложена на ПО страницах, иллюстрирована 20 рисунками и 4 таблицами. Библиография представлена 160 источниками отачеотвенной и зару-беиной Литературы.