Введение к работе
Актуальность проблемы. Кишечные иерсинии - Y. enterocolitica -широко распространены в окружающей среде. Они выделяются из почвенных и водных экосистем, из объектов внешней среды, циркулируют в организме и вызывают заболевания животных и человека. В связи с этим закономерно то пристальное внимание, которое в последнее десятилетие привлечено к кишечноиерсиниозной инфекции как в плане клинической, так и лабораторной диагностики. Вместе с тем до настоящего времении в России не ясны ни истинный уровень заболеваемости кишечным иерсиниозом, ни ее структура и динамика. Это объясняется, с одной стороны, отсутствием раздельной регистрации кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, которая официально введена только в 1992 г., с другой, - несовершенством существующих методов диагностики. Основными факторами, лимитирующими диагностические возможности бактериологических лабораторий, являются отсутствие или острый дефицит в нашей стране коммерческих реактивов и биологических препаратов, в частности типовых ки-шечноиерсиниозных агглютинирующих сывороток, для внутривидового типирования Y. enterocolitica и оценки их вирулентности. Несмотря на то, что в Ростовском-на-Дону противочумном институте и Санкт-Петербургском институте вакцин и сывороток разработана научно-техническая документация, а в 1991-1992 гг. были выпущены по две серии сухих кроличьих кишечноиерсиниозных агглютинирующих сывороток, в настоящее время серийный выпуск этих препаратов не осуществляется. В связи с этим усовершенствование способов получения кишечноиерсиниозных сывороток, а также расширение спектра диагностических препаратов, позволяющих уже на ранних этапах диагностики идентифицировать иерсинии, прежде всего - вирулентные, является актуальной задачей современной микробиологической науки.
Цель работы. Целью настоящего исследования является разработка надежных способов получения в лабораторных и производственных условиях диагностических агглютинирующих сывороток для идентификации, серотипирования и оценки вирулентности Y. enterocolitica.
Задачи работы. Для достижения поставленной цели предусматривается решение следующих конкретных задач:
выбор донора - продуцента, обеспечивающего получение в достаточном объеме целевых антисывороток хорошего качества;
изучение и отбор высокоиммуногенных штаммов иерсинии;
разработка оптимальной схемы иммунизации животных;
разработка технологии и получение видоспецифической (поливалентной), групповых и моноспецифических кишечноиерсиниозных агглютинирующих сывороток;
разработка технологии и получение сыворотки для идентификации вирулентных иерсиний;
апробация полученных сывороток в лабораторных и полевых условиях.
Научная новизна. Предложена эффективная схема иммунизации кроликов, позволяющая в короткие сроки (18 дней) получить высокоактивные (титр антител в объемной реакции агглютинации до 1:104200) кишечноиерсиниозные агглютинирующие сыворотки. Разработаны общие принципы и методические приемы получения видоспецифической (поливалентной), групповой и моноспецифических сывороток. Отработана надежная технология получения сыворотки для дифференциации вирулентных и авирулентных представителей вида Yersinia enterocolitica. Предложен оригинальный способ дозирования, фасовки и хранения иммунных сывороток.
Практическая значимость работы. Предложенная схема иммунизации животных дает возможность в короткие сроки получить высокоактивные кишечноиерсиниозные сыворотки. Разработанная технология получения моноспецифических сывороток позволила внести дополнения в нормативно-техническую документацию на этот препарат - регламент № 220-95, ВФС № 42-200ВС-89 и инструкцию по его применению. Разработана технология получения видоспецифической (поливалентной) кишечноиерсиниозной сыворотки. На основе полученных данных составлены и утверждены "Методические рекомендации по получению поливалентной агглютинирующей кишечноиерсиниозной сыворотки". Апробация сывороток на базе микробиологического отдела Иркутского противочумного института, бактериологических лабораторий отделов особо опасных инфекций Новосибирского, Сахалинского областных, Алтайского, Красноярского краевых и Якутского (Саха) республиканского центров санэпиднад-зора показала эффективность и надежность полученных диагностических кишечноиерсиниозных агглютинирующих сывороток. Предложен оригинальный и высокоэкономичный способ дозирования, фасовки и хранения иммунных сывороток (авторское свидетельство № 1678371).
На защиту выносятся следующие предложения:
-
Схема иммунизации кроликов, позволяющая в короткие сроки получить высокоактивные кишечноиерсиниозные агглютинирующие сыворотки.
-
Технология получения высокоспецифических (поливалентных), групповых и моноспецифических кишечноиерсиниозных сывороток.
3. Способ дозирования, фасовки и хранения иммунных сывороток.
Работа выполнена в отделе биологического контроля Иркутско
го научно-исследовательского противочумного института Сибири и
Дальнего Востока в соответствии с планом НИР в рамках двух тем:
"Разработка технологии получения типовых моноспецифических групповых и поливалентных агглютинирующих сывороток" (№ государственной регистрации 01910033791); "Изучение эколого-эпи-демиологических закономерностей иерсиниозов в Сибири и на Дальнем Востоке" (№ государственной регистрации 01910033778). Апробация работы. Материалы диссертации обсуждались на:
Всесоюзной научно-практической конференции "Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии". Махачкала, 1990.
Научной конференции Иркутского государственного медицинского института, посвященной 70-легию образования санэпид-службы Иркутской области. Иркутск, 1993.
Российской научной конференции "Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций". Саратов, 1993.
Научной конференции, посвященной 60-летию Иркутского ордена Трудового Красного Знамении научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока. Иркутск, 1994.
Научных конференциях Иркутского научно-исследовательского
противочумного института Сибири и Дальнего Востока.
Материалы диссертации представлены в отчетах о научно-иссле
довательской работе.
Публикации. По материалам диссертации опубликованы шесть научных статей, получено и опубликовано авторское свидетельство на изобретение № 1678371. Одобрены ученым советом (протокол № 3 от 20.04.95) и утверждены директором института "Методические рекомендации по получению поливалентной агглютинирующей кишечноиерсиниозной сыворотки".
Объем и структура диссертации. Рукопись диссертации содержит введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, изложение собственных экспериментальных результатов, заключение, выводы и список литературы. Объем рукописи 103 страницы, включая 15 таблиц. Список литературы содержит 56 отечественных и 88 зарубежных источников.