Введение к работе
~>у
Актуальность работы. Жгутиковое простейшее Trypanosoma crazi -возбудитель болезни Чагаса, остающейся серьёзной проблемой Южной и Центральной Америки.
Интересная особенность этого паразита - открытый в 1931 году Г.И. Роскиным и Е.В.Экземплярской антагонизм между T.cruzi и процессом злокачественного роста, что легло в основу нового направления современной онкотерапии - биотерапии злокачественных заболеваний (Клюева, Роскин, 1946, 1957). Трипаносома оказалась способной предпочтительно перед нормальными клетками размножаться и развиваться в раковых клетках хозяина и таким образом подавлять опухолевый рост или приводить к полной регрессии новообразований. Эта противораковая активность T.cruzi распространяется и на злокачественные заболевания человека.
Противораковое начало сохраняется в культуральных (эпимастиготных) формах и убитых клетках T.cruzi, на основе чего из них производились два противоопухолевых препарата: круцин в России и трипаноза во Франции.
Механизм противоракового действия T.cruzi до сих пор нельзя считать выясненным. Уже в первых работах Г.И. Роскин высказал предположение об участии в этом феномене нескольких факторов. И в настоящее время появились данные, свидетельствующие о том, что эффект T.cruzi не сводится только к прямому воздействию на раковые клетки и что в противораковом феномене участвуют иммунологические механизмы.
Известно, что в патогенезе болезни Чагаса значительное место занимают аутоиммунные процессы, развивающиеся в результате общности антигенов паразита и тканей хозяина. Такая общность достаточно хорошо описана в отношении антигенов миокарда и нервной ткани. В последние годы появились данные об экспрессии на поверхностных структурах T.cruzi муцинов, сходных по строению с муцинами малигнизированных клеток.
В настоящее время показано, что вид T.cruzi в высокой степени структурирован генетически, а степень противораковой активности различна у штаммов данного вида, неодинаковых по биологическим свойствам.
СПетсрв}! О»
Возможность исследования противоопухолевых свойств T.cruzi не на штаммах, а на клонах, т.е. генетически чистых линиях этого высоко дифференцированного вида, появилась только теперь. Первые исследования показали, что клоновые культуры могут быть продуцентами активного начала и степень эффекта соответствующих лизатов ііь vitro зависит от дринадлежности клона к определенной генетической группе (Шекдакова, 003),
Цель работы: Изучение противораковой активности in vivo лизированных эпимастигот T.cruzi различных генетических линий и участия иммунологических механизмов в этом эффекте. В соответствии с поставленной целью сформулированы следующие задачи:
-
Изучить противораковую активность in vivo лизатов из различных клонов T.cruzi;
-
Исследовать общность антигенов T.cruzi и аденокарциномы Эрлиха;
-
Провести анализ гуморального иммунологического ответа на прививку опухоли и введение лизатов;
-
Оценить влияние антител против T.cruzi на рост опухоли;
-
Сравнить рост клонов T.cruzi на различных искусственных питательных средах.
Научная новизна.
В настоящей работе получило продолжение использование в биотерапии опухоли генетически чистых линий (клонов) T.cruzi. Их обнаруженный ранее эффект на раковых клетках in vitro (Шеклакова, 2003), в данной работе впервые подтвержден в отношении аденокарциномы Эрлиха мышей in vivo. Показано, что эффект зависит от дозы вводимого препарата.
Впервые выявлена общность антигенов T.cruzi и аденокарциномы Эрлиха.
Выявлено, что противораковое действие препарата из T.cruzi осуществляется in vivo на фоне значительного пула антител (AT) к трипаносоме: фоновых, индуцированных опухолью и возникших после введения лизатов.
Установлено, что все указанные AT оказывают ингибиторное влияние на рост прививной опухоли мышей.
При культивировании на искусственных питательных средах (среды LIT, NNN, махачкалинская) выявлены различия клонов по динамике роста, накоплению клеток и способности к длительному культивированию в этих условиях.
Практическая значимость работы. Полученные данные вносят определенный вклад в изучение феномена противораковой активности T.cruzi и его связи с генетической гетерогенностью этого вида. Показана возможность использования клоновых культур T.cruzi в качестве продуцента противоопухолевого начала.
Выяснено, что даже у интактных мышей имеются фоновые антитела к T.cruzi, что заставляет более строго относиться к контролю в опытах по исследованию противоопухолевой активности трипаносомы. Для выбора сред и клонов продуцента, способных культивироваться в достаточных для производства количествах, важны найденные клоновые
различия T.cruzi при культивировании на искусственных питательных средах.
Основные положения, выносимые на зашиту.
-
Лйзаты клонов T.cruzi обладают противораковой активностью in vivo, но ' различаются по её степени в зависимости от клоновой принадлежности определенным генетическим группам
-
T.cruzi имеет общие антигены с аденокарциномой Эрлиха.
-
Лйзаты T.cruzi обладают иммуногенностью и вызывают in vivo гуморальный ответ.
-
In vivo противоопухолевый эффект препаратов из T.cruzi осуществляется на фоне различных антител к трипаносоме, которые важны для противоракового эффекта.
-
Клоны различных генетических групп T.cruzi различаются по характеру роста на искусственных питательных средах.
Апробация работы. Диссертация выполнена в соответствии с научным направлением кафедры микробиологии медицинского факультета Российского Университета Дружбы Народов и программой совместных исследований с Московским Государственным Университетом. Результаты исследований и основные положения диссертации доложены и обсуждены на конференции кафедры микробиологии РУДН (2003, 2004), международной конференции и III съезде Паразитологического общества при РАН (Петрозаводск, 2003), форуме монгольских студентов, обучающихся в Вузах РФ (Москва, 2004).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.
Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, выводов и библиографического указателя. Работа изложена на ПО страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблицами, 24 рисунками. Список литературы содержит 169 работ: 32 российских и 137 зарубежных авторов.
