Введение к работе
Актуальность темы. Урогенитальные микоплаамозы относятся к группе широко распространенных и социально значимых инфекций. По данным ведущих исследователей в последние годы наблюдается тенденция к возрастанию роли микоплавм и уреапдазм в заболеваниях урогенитального тракта (ЛТ) и даже к некоторому преобладанию инфекций, обусловленных ими, над "классическими" венерическими заболеваниями (Okamoto 3.1989). В настоящее время данные о распространенности U.urealyticum и M.hominis среди различных групп населения немногочисленны и противоречивы. Показатели инфицированное по данным разных авторов варьируют для M.hominis,- от 10 до 50Х, для U. urealuticw от 16 до 807.. Большинство исследователей рассматривают виды M.hominis и U.urealyticum как патогенные в полном соответствии с постулатами Коха. Генигальные шкоплазмы могут явиться причиной воспалительных заболеваний мочеполовой системы ( Hay Р., 1994; Horner Р., 1994; Прозоровский СВ., 1995;), бесплодия у мужчин и женщин (Copin Е., 1991), преждевременных' родов и абортоЕ (Robertson J., 1990, Анкирская А.С. 1991;), а также генирализованных инфекции плода и новорожденных (Cassel G 1988; Horowitz S., 1992). Урогенитальные микоплазмозы могут протекать остро, но чаще всего они имеют хроническое рецидивирующее течение. При этом не всегда удается предвидеть продолжительность и последствия микоплазменных инфекций.
Широкое распространение микоплазменных инфекций, трудность установления диагноза урогенитального микоплазмоза только по клиническим симптомам, возможность микоплазмоносительства и длитель-
ное перснетирование возбудителя определяют неоходимость применения новш высокочувствительных и специфичных методов для диагностики микодлазмозов.
3 настоящее время для диагностики мишшзменных инфекции используются, разработанные несколько десятилетии назад, микробиологические и серологические методы. Однако ыикоплазмы, как правили оказывается сложно или почти невозможно выделить и культивировать в лабораторных условиях. Эффективность микробиологического метода ограничена главным образом ввиду широкого спектра питательных потребностей микоплазм, обусловленного их минимальными баоеинтетичеекими возможностями. Слабая иммуногеность микоплазм, наличие у них поверхностных антигенов, идентичных антигенам клеток тканей хозяина, высокий уровень антигенной изменчивости, циркуляция микоплазменных антигенов в периферической крови и в тканях в составе иммунных комплексов осложняет обнаружение ыикоплазм серологическими методами. Кроме того, анализ зачастую приходится проводить в образцах с крайне низкой концентрацией инфекционного агента.
Б связи с этим необходим поиск новых методических подходов для эффективной диагностики микоплазменных инфекций.
Целью нашего исследования явилась разработка амплификацион-ных тест-систем для зкспресс-диагностики урогенитальных МЙКОП-лазмозоЕ и изучение роли персистируодих форм микоплазм при хронических микоплазмозах.
Основными задачами исследования были:
-
Разработка ашшфикациннных тест-системы для выявления патогенных микоплазм: U.urealytlcw, M.hominis, M.fermentans.
-
Подбор надежных и эффективных методов обработки клинического материала для анализа в полимеразной цепной реакции (ПЦР)
-
Применение ПЦР-анализа для изучения персистентной инфекции, обусловленной M.fermentans, у экспериментальных животных.
-
Оценка достоверности ПЦР-анализа в сравнении с методами серологического и микробиологического тестирования при диагностике острых и хронических микоплазмозов.
-
использование разработанных тест-систем для исследования- этиологической роли микоплазм и уреаплазм при хронических инфекциях урогенитального тракта, бесплодии и патологии плода.
Научная новизна работы. -
Разработан.метод экспресс-диагностики на основе ПЦР, позволяющий с высокой чувствительностью (до 500 клеток микоплазм в мл) и строгой видовой специфичностью выявлять U.urealytiom, M.hominis и M.fermntans в клиническом и патологическом материале.
При изучении экспериментальной персистентной инфекции метод ПЦР дал возможность оценить продолжительность и динамику развития инфекционного процесса, выявить очаги локализации микоплазм.
Показаны преимущества метода ПЦР перед методами серологического и микробиологического анализа при диагностике хронических форм микоплазмозов.
При использовании разработанных тест-систем установлена
более частая инфицированность U.urealyticm и 'M.hominis лиц с
хроническими воспалительными заболеваниями УГТ и бесплодней у женщин по сравнению с контрольной группой, что позволяет говорить о причастности этих микроорганизмов к развитию ряда .заболеваний УГТ и бесплодия.
Научно-практическая ценность работы.
Определены оптимальные условия проведения ЩР-анализа для надежного и быстрого обнаружения в клиническом и патологическом материале U.arealytlcum, M.hominls, и M.fermntans. Разработанные тест-системы могут быть рекомендованы при лабораторном обследованию! разных -контингентов урологических и гинекологических больных, беременных, женщин страдающих бесплодием, больных СВДоы. Возможность ранней диагностики позволит клиницистам своевременно проводить зтиотропную терапию.
Апробация, диссертационной работы состоялась на научной конференции отдела Медицинской Микробиологии ЕИИЭУ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН С 4 июля 1996 г). Материалы диссертации доложены на 8-ой конференции микробиологов в Болгарии (1993 г., Варна) и на 1-ой Всероссийской научно-практической конференции (1996 г., Оочи).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 2 статьи и 2 тезисов в отечественной и зарубежной печати.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав, включающих результаты экспериментального исследования, обсуждения результатов, выводов, библиографии. Работа изложена на страницах машинописного текста, включая 16 таблиц, 8 рисунков, и 243 цитированных источников, б