Введение к работе
Актуальность темы. Проблема получения высокоочищенных лекарственных препаратов (особенно инъекционных форм) является достаточно трудной задачей в связи с тем, что отечественные технологии большинства из них не соответствуют международным правилам GMP. Особенно это касается ряда инъекционных лекарственных препаратов, для которых очень жесткие требования по содержанию пироге иных примесей. Часто технология их получения несовершенна и длительна по времени, особенно для белковых препаратов; это приводит к микробной обсемененности продукта, что в свою очередь вызывает загрязнение готового лекарственного средства бактериальными эндотоксинами. Последние же являются наиболее распространенными пирогенными примесями, присутствующими на различных технологических стадиях получения лекарственных препаратов. Бактериальные эндотоксины являются компонентами клеточной стенки грамотрицательных микроорганизмов и представляют собой высокомолекулярные липополисахариды.
3 связи с этим является актуальной разработка методов выделения и очистки, а также анализ бактериальных эндотоксинов.
Цель и задачи исследования. Цель работы заключалась в получении эндотоксинов из клеток бактерий PS. putt do р6)и.со&' с применением твердофазного и глубинного культивирования, их идентификация, а также изучение возможности применения макропористых сополимеров для разделения эндотоксинов и балластных примесей с целью получения максимально очищенного препарата эндотоксинов.
Конкретные задачи были следующими:
- получить бактериальные эндотоксины из клеток бактерий Е. сои
(vulgaris) и Рз. putida (36) , используя твердофазный и глубинный
метод культивирования;
провести сравнительный анализ полученных экстрактов эндотоксинов, исследуя их компонентный состав;
изучить закономерности сорбции эндотоксинов и белковых примесей на молекулярных сорбентах с модифицированной и немодифи-цированной поверхностью;
провести кянетико-динамический анализ сорбции эндотоксинов и белковых примесей;
провести оптимизацию фронтального процесса выделения и очистки бактериальных эндотоксинов.
Научная новизна работы. I. Впервые было предложено использовать для получения бактери-
альных эндотоксинов не твердофазный, а глубинный метод культивирования. Показана целесообразность использования глубинного способа культивирования для получения бактериальных эндотоксинов.
2. В качестве источника для получения бактериальных эндоток
синов были также впервые использованы клетки бактерий
Pi. put/с/а (3S) » выделенные из отечественного препарата "Путидойл" производства Бердского химического завода.
-
Для выделения и очистки бактериальных эндотоксинов впервые предложены макропористые неионогенные сополимеры и их карбонизированные аналоги.
-
Впервые проведена оптимизация сорбционно-хроматографиче-ского процесса разделения эндотоксинов и белковых компонентов по скорости протекания раствора через колонку.
-
Впервые предложена принципиальная схема выделения бактериальных эндотоксинов непосредственно из культуральной жидкости, что позволило получить эндотоксины в достаточно большом количестве и с высокой степенью чистоты.
Практическое значение. На основании экспериментальных данных был предложен эффективный способ выделения и очистки бактериальных эндотоксинов. Получена апирогенная вода, используемая для приготовления инъекционных препаратов, удовлетворяющая требованиям ФС. Предлагаемый способ выделения и очистки бактериальных эндотоксинов позволил сократить время процесса в 3 раза, а также получать максимально очищенный препарат эндотоксинов, который в дальнейшем может использоваться в качестве рабочего стандарта эндотоксинов.
Апробация работы. Основные результаты работы доложены на Всероссийской научной конференции: "Химия и технология лекарственных веществ", г.С.-Петербург, 1994?; семинаре "Теория и практика ионного обмена, ионообменная хроматография", Всероссийского химического общества им.Д.И.Менделеева, г.С.-Петербург, 1994,1995г; а также на заседаниях кафедры биотехнологии и микробиологии СПХФИ.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано печатных работ.
Объем и структура работы. Диссертация состоит из введе
ния, о6"зора литературы, экспериментальной части, обсуждения
результатов, выводов, списка используемых литературных ис
точников, включающего наименования. Работа изложена
на страницах машинописного текста, включая рисун-
5
ков, таблиц и приложения на стр.