Введение к работе
Актуальность проблемы. Гнойно-воспалительные заболевания (ГЯЗ) в настоящее время являются актуальной проблемой здравоохранения. Значительную роль в этиологии этих заболеваний продолжают играть стафилококки (Мустафин Д.Г., 1990; Grosaero-deM.H., WenzelR.P., 1991; Salae S. et al., 1991). Острота проблемы ГВЗ связана, в частности, с широким распространением внутрибольничной инфекции, ведущая роль в этиологической структуре которой принадлежит штаммам Staphylococcus aureus. Стафилококки обусловливают различные гнойные заболевания (Буя- t нов В.М. с соавт., 1989; Григорьев В.Е. с соавт., 1989; Павлова Е. В. с соавт., 1990; Шутова А.П. с соавт., 1990; Симонен-ко В.В., 1993; Galezak W., Micolajczyk Я., 19В9; Solt К., 1989; Peters G., 1991; Goat2 A., Muder R. , 1992). Чаще регистрируются в последние годы случаи заболеваний, вызванные коагулазоот-рицательнымя стафилококками (Gemmell C.G., 1987; Mclntype P. et al., 1989; Muller R., VotgtH.U., 1991; Patrick C.H. et al., 1992).
Лечение стафилококковых заболеваний антибиотиками, химиотерапевтическими препаратами затруднено в связи с тенденцией приобретения стафилококками высокой устойчивости к ним, а также из-за побочного негативного действия этих препаратов на организм больного. В этих условиях становится весьма важным поиск безвредных и более действенных средств и способов лечения стафилококковой инфекции.
Одним из высокоэффективных препаратов специфического действия является стафилококковый бактериофаг. Однако, он производится в настоящее время по технологии, которая несовершенна и не обеспечивает высокое качество препарата. Очистка стафилофага по этой технологии ограничивается фильтрацией фаголизатов через свечи Шамберлана для их освобождения от нелизировавшихся клеток и других микровзвесей. Полученные таким образом фаголизаты содержат значительное количество продуктов метаболизма бактериальных клеток. Применение таких препаратов с невысокой степенью чистоты чотет вызывать нежелательные побочные реакции организма. Следует также отметить недостаточно высокую литическую активность выпускаемого препарата; существующая технология малопроизводительна и трудоемка.'
В этой связи весьма актуальными являются исследования по разработке новой технологии производства препаратов стафилофага.
- 4 - .-.-
которая предусматривала бы получение фаголизатов с высокой литической активностью, их очистку, а также выпуск разнообразных лекарственных форм.
Цель исследования. Основная цель исследования заключалась в разработке современной производственной технологии получения лечебно-профилактических препаратов очищенного концентрированного стафилококкового бактериофага, обладающих высокой литической активностью.
Задачи исследования:
1. Изучить репродукцию стафилококкового бактериофага на
различных питательных средах. ,
С 2. Разработать способ культивирования стафилококкового
бактериофага для применения в условиях производства.
-
Отработать методы очистки и концектрирования больших объемов стафилококковых фаголизатов.
-
Изучить возможность создания лекарственных форм препарата стафилококкового бактериофага, отвечающих запросам практического здравоохранения.
-
Научное и экспериментальное обоснование создания новой технологической линии.
Научная новизна и практическая значимость работы: Разработан способ реакторного культивирования стафилококкового бактериофага, позволяют "й получать его с высокой литической активностью в производственных условиях. Способ дает возможность увеличить выход стафилофага в 10-100 -аз. Впервые отработаны методы концентрирования и очистки больших объемов стафилококковых фаголизатов с использованием ионообменной хроматографии на ДЭЛЭ-целлюлозе и мембранной фильтрации. Созваны новые лекарственные формы препарата стафилофага:. жидкий концентрированный очищенный, сухой таблетнрованный с кислотоустойчивым покрытием и линимент. Все лекарственные формы обладают высокой литической активностью и служат для лечения различных заболеваний стафилококкрвой этиологии.
На разработанную технологию оформлена нормативно-техническая документация:
1. Изменение к регламенту производства "Бактериофаг
стафилококковый жидкий" II 168-80;
-
Изменение к ФС 42-103-ВС-88 "Бактериофаг стафилококке.їй жидкий";
-
Изменение к ФС 14-189-80 "Бактериофаг стафилококковый мазь";
-
ВФС 42 . . . "Бактериофаг стафялококкозый очіицснняй- сухой.
- s -
с кислотоустойчивым покрытием*.
Нозая технология производства стафилококкового бактериофага обеспечппает получение препарата высокого качества.
Приоритетность исследования подтверждена авторским свчдетельством* на изобретение N 1526225 "Способ получения стафилококкового бактериофага". Препарат удостоен серебряной медали ВДНХ СССР.
На защиту выносятся следующие положения:
-
Отработан режим реакторного культивирования стафилококкового бактериофага, позволяющий увеличить литическую активность и выход фага в 10-100 раз.
-
Впервые разработаны методы концентрирования и очистки больших . объемов стафилококкового бактериофага, применимые в условиях производства.
-
Созданы три новые лекарственные формы препарата стафилококкового бактериофага, отличающиеся высокой литической активностью и стабильностью.
Структура диссертации. Диссертационное исследование состоит из введения, обзора литературы, главы "Материалы и методы", трех глав собственных исследований, заключения , выводов и списка литературы. Работа изложена на 115 страницах машинописи, иллюстрирована 2 рисунками и 12 таблицами. Список литературы содержит 192 отечественных и 76 зарубежных источников.
Публикации. По тема диссертации опубликовано 8 научных работ.
Апробация диссертации. Материалы диссертации были доложены на научной конференции Уфимского НИИВС (апрель, 1986), республиканской научной конференции в г.Уфе (апрель, 1988), итоговой научной конференции Уфимского НИИВС, посвященной дню науки (апрель, 1989), конференции молодых ученых в Московском НИИЭМ им.Г.Н.Габричевского (март, 1991), республиканской научно-практической конференции-семинаре" в г.Уфе (февраль, 1993). Диспертация апробирована на заседании Научно-технического Совета Уфимского НИИ вакцин и сывороток НПО "Иммунопрепарат" 06.07.93 г.