Введение к работе
Актуальность штабісти. .
В последние годы возросла роль стафилококков в этиологии заболевании инфекционной природы человека и гагвотных. Эти мик-
.роорганизмы вызывают инфекции к оглых покровов, глаз, ушей, мочеполового тракта, системные инфекции (Смирнова A.M., Трояш-кин А.А., Падерина E.iJ., 1977; Акатов А.К., Зуева В.С,1983; Bailey R.R. , 1973; Love D.N., Іюїпаз G., Bailey M. et al. 1981; Burchard K.W. , Minor L.B., - Slotman C.J. et al. , 1984; Gemraell C.G. , 1987; Hamory B.H., Parisi J.T. , 1987;
..Pidalgo S., Vazquez P., Mendosa M.C. et al. ,1990;
Lammller Ch. , 1990; Arber N., Militiariu A., Ben-Yehuda A. et
al. , 1991). ' '
.,1 В составе рода в настоящее' время признано 19 видов и несколько видов еще'находится в исследовании.
Проведение видовой идентификации стафилококков,' особенно коагулазонегативних встречает серьезные трудности. Методы определения видовой принадлежности, предложенные зарубежными и . отечественными исследователями (Акатов А.К., Зуева B.C., 1983; Акатов А.К., 1988; Kloos w.e., Schieiier К.Н. , 1975) с использованием дифференциально-диагностических сред традиционного приготовления являются трудоемкими, требуют длительной инкубации, большого набора питательных сред, вследствие этого они мало приемлемы для клинических лабораторий.
Стремление к ускорению И"стандартизации анализа реализо
вано разработноіі за рубежом большого' числа различных диагности
ческих систем для идентификации, микроорганизмов, в том числе
и стафилококков, основанных >на выявлении их ферментных систем.
Наиболее широко используются для идентификации стафилококков
следующие тест-системы: API- STAPH , API- Staph-Ident , Staphy-
test. ''.. ;
В нашей стране в Нижегородском НИШЫ разработан набор систем индикаторных бумажных (СИБ) для идентификации стафилококков, в НПО "Цитательные среды" (г.Махачкала) создана ыикро-тестсистема. Однако производственный выпуск данных препаратов отсутствует.
Принцип функционирования тест-систем основан на кшкро-культуральных методах. Ускорение биохимических реакций достигается небольшим объемом ингредиентов при относительно большой количестве ьаоеваемой культуры. Применение таких систем для :дцфференциации позволяет стандартизировать лабораторную диагностику, сократить трудоемкость, потребность в лабораторной посуде, питательных средах и ускорить сроки идентификации. Кроме того, преимуществом применения подобных систем является возможность автоматизации отдельных этапов исследования, перехода во многих системах к компьютерной обработке результатов.
Поскольку большинство устройств для идентификации запатентовано и технология их изготовления полностью не раскрыта, то разработка новых диагностических препаратов для вкзимоиден-тифнкащш стафилококков составляет задачу специальных исследований.
Работа выполнена в рамках научной тематики Нижегородского НИИЭЫ по договору * 3-107-78 в соответствии с целевой программой научных исследований ИЗ РФ по проблеме "Медицинская биотехнология" на І99І-І995 гг.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлась разработка метода идентификации стафилококков с помощью стандартной тест-системы однократного применения.
В соответствие с целью были поставлены следующие задачи:
I. Провести отбор тестов для идентифицирующей панели. -А-
-
Осуществить конструирование микрокультуральных субстратно-индикаторных сред.
-
Разработать технологию производства пластинчатой тест-системы для идентификации стафилококков.
-
Разработать цифровой каталог кодов и программное обеспечение для упрощения и ускорения этапа интерпретации результатов, полученных с помощью ІВДС.
-
Изучить информативность, наделшость метода идентификации с помощью ПВДС в модельных опытах на музейных и свепе-выделошшх культурах и в практической работе бактериологических лабораторий.
Научная новизна исследования
Разработан новый вид стандартного диагностического препарата - Пластина биохимическая, дифференцирующая стафилококки, включающего набор из 17 микрокультуральных субстратно— индикаторных сред.
Впервые разработаны каталог кодов и программное обеспечение, облегчающие и унифицирующие эяап интерпретации биохимического тестирования стафилококков.
Практическая ценность работы
Составлена и утверждена в Минздраве РФ 31.07.92 г. нормативно-техническая документация на препарат:
-
BSC 42-353 ВС-92 "Пластина биохимическая дифференцпрую-щая стафилококки".
-
Инструкция по применению пластины биохимической дифференцирующей стафилококки.
-
Регламент производства Пластины биохимической диффе-ренцирующой стафилококки ІІ 34.
Проведена апробация разработанной тест-спстемы совместно с сотрудниками бактериологических лабораторий в конкретных -і
условиях лабораторной практики.
Проведены мероприятия для внедрения нового метода иденти-С'-ігации стафилококков в лабораторную практику, включающие обучение на рабочих местах, ежегодных республиканских курсах повышения квалификации врачей бактериологов в соответствии с планами Минздрава РФ.
На защиту выносится следующее положение:
Скомпавованный набор тестов для одноэталной идентификации, каталог кодов и програмное обеспечение позволяют создать тест-систему 1ЩС, что унифицирует, упрощает к ускоряет процесс видовой идентификации стафилококков.
Апробация диссертации
Основные положения работы доложены на конференция молодых ученых Нижегородского медицинского института "Актуальные вопросы медицины" (Горький, 1990), на УІ Всероссийском съезде микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (Н.Новгород, 1991), на заседании эпидемиологического семинара Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии (Н.Новгород, 1990,1993), на заседании Ученого Совета Нижегородского НИИЭМ (Н.Новгород, 1993).
По материалам диссертации опубликовано 5 статей.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов. Работа содержит 121 страницу машинописного текста, 27 таблиц, 7 рисунков, I схему, список литературы включает 169 источников, в том числе 123 зарубежных авторов..