Введение к работе
Актуальность проблемы. Седьмая пандемия холеры, основным этиологическим агентом которой является холерный вибрнон биотипа эльтор, характеризуется быстрым и ширдхим распространением в мире. В последние годы вепншки холеры и отдельные случаи заболевания имели место в Еврбле, Австралии, GLA, Японии,. Африке и'других регионах мира (йол. ВОЗ, 1985; Shahid K.S. at al.,I984; Gefjald К. e.t al.,I988).
Растущее загрязнение водоемов сточными водамк и хозяйственно-фекальными стоками способствует более длительной циркуляции холерных вибрионов. Поверхностные водоемы оказались инфицированными холерными вибрионами различной вирулентности даяе в местностях, где заболевания холерой не региетрирсзались 'Бичуль К.Г.. 1973; Стогова А.Г. и др., 1973; Гайдонокая й.А. и др.; 1984).
Исследования ряда авторов (Дрожевкика М.С. и др., 1981; Сергиев В.П. и др., Ї98І; Сергиев В.П. и др., 1988) свидетельствуют о том, что вода открытых водоемоз может быть благоприятной средой для накопления, сохранения и обитания холерных вибрионов. Нередко из воды t скрытых водоемов на различных ї<;рри?о-риях СССР выделяются культуры холерных вибрионов с иэмененнши морфологическими, фаголизабельнши, агглютянабельнычи свойствами и со сниженными холерогенностью (Семиотрочев В.П. и др.,1978; Дрожевстна М.С. и др., 1978).
ирецполэ.гается, что изменение биологических свойств холерных вибрионов, з том ^шеле и патогенных, является результатом адаптации их к условиям существования.вне организма (АдамоЕ А.К. и др., 198-1; оеляяоз З.Д. и др.,.1986,1987). Но существует и пругая течка зрения, согласно которой присутствие экзогенных ют.зкид ксг.ет юеезти к изменении биологичесжх свойств, ИИЄВЦЙХ вх-.ііоцїайссноміїчйскоз значение ПИагинян И.А. и др., 1978;
Hamood Н.Е. et al., 1986).
Вполне возможно, что изменение некоторых, свойств возбудители холеры, в том чксле и втруленткоеги, возникая? з результате коныогационной передачи, ему вкехромоооыного материала, так как з окружающей срздэ могут создаваться благоприятные для подобной передач» условия уевд* холерными вибрионами к другими предстазителями аикрофлоры. Теы не ыэкее, роль внехромэсомных факторов наследственности у воэоудителя холеры и возможное влияние на фенотип является недостаточно изученными.
Цель настоящей рабой: заключалась в изучении влия.ия экзогенных й--плазмид на биологические свойства холерних вибрионов.
Поставленную цель предполагалось достичь ршением следующих задач:
-
Установить реципиентные возыонности штаммов холерных вибрионов 01 к не 01 групп в отношении R -плаэмид кишечной палочки.
-
Выяснить оптимальные условия коньшгациокной ' зредачи холернім вибрионам &яяогеикых ше^ромссомных факторов различных групп несовместимолти.:
-
Огфеделить уровень вкспрессии пдазгишой устойчивости к антибактериальным препаратам в новом хозяине. -.
.. .4. Исследовать. влияние гетерологцчных R-плазашд на экспрессии основных факторов патогенности реципиента. '... Научная новизна. Впервые устаноазсено, что штаммы холерных вибрионов 01 и не.01.групп,. выделенные'.на'различных территориях СССР,.могут, использоваться .в качестве аффективных реципиентов для. экзогенных R-плагмид "киаючяой палочки.'Проведенные експерименти позволили определить оптимальные условия контюгационной передачи экзогенных н-ш&змгр .ходериш.гвибрионом.. Впервые'потесано, что плазштда кишечной палочки рОАбоїг С группы кесовме-
4 стимости мояэт стабильно наследоваться холерными, вибрионами классического и зльтор биотипов, существенно'влияя при этом на основные патогенные свойства новых хозяев. Предложен гипотетический механизм, объясняющий т'ранзиторнсе ингибирущее влияние пдазмняи PGA6012 на вирулентность холерного вибриона.
Практическая ценность. В ходе выполнения работы установлены оптимальные условия проведения ионыогационной передачи экзогенных плазмил холерным вибрионам 01 и не 01 групп. Экспериментальные данные легли в основу методических рекомендаций по "Конъюгацнонной передаче н-плазмид кишечной палочки холерным вибрионам", которые рассмотрены и одобрены на заседании ученого совета 10.04.1986 года директором Иркутского Научно-исслелова-теяьского противочумного института.
В процессе выполнения работы получены трансконъиганты с измененными агглвтинабельными, фаголизабельныни, адгезивными свойствами, со сниженным уровнем синтеза нёйрйжнядазы, токсина и цАМФ. На основе экспериментальных данн"Х представлена в Госком-изобретение СССР заявка на изобретение "Способ получения нехоле-рогенных, цАМФ-кегативных холерных вибрионов", на которую получено положительное решение (4888422/I3/II63S8).
Положения, выдвигаемые на защиту:
1. Холерные вибрионы 01 и не 01 групп могут воспринимать и
аффективно экспрессировать экзогенную генетическую информацию,
нахоиотіуюся в составе плаэмид различных групп несовместимости.
2, Подбор условий проведения конъюгации позволяет оптимизи
ровать частоту передачи плазмил при использовании в качестве ре-
ципие-та холерного вибриона.
3. Холерные вибрионы 01 группы могут стабильно наследовать R-плазмиду С группы несовместимости, детерминирующую устойчивость к большой группе антибактериальных химиопрепаратов (канамицииу, тетрациклину, стрептомицину, хлорамфениколу и норсульфазолу).
-
Дяазкида кишечной палочки j>ga012,, оказызавдая транэи-торное снижение вирулентных свойств у вибрионов,может невольно-, ваться в качестве модели >.ля изучения причин появления холерных ьибрионоа со сниженными патогеткнш свойствами.
-
Механизм сналмИия вирулентных свойств,холерных.вибрионов в присутствии плазмиды рйлбоїг предполагает координированное изменение ряда патогенных свойств у транскоиъгагантов холерных вибрионов.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы долонз-ны на конференции молодых ученых лротивочзтлной сотшы 'I9S2,T984> ( на Всесоюзной конференции специалистов противочумных учреждений (1984), на Всесоюзной конференции по холере (Ї988.) « на научных конференциях Иркутского противочумного института.
Публикации. По материалам опубликовано девять работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из вве-дения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов и списка' использованной литература 354, включ*оиего 157 работ отечественных и 197 - зарубе, шх авторов. Материалы изложены на 144 страницах, иллюстрированы 12 рисунками и 14 таблицами.