Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Гордина Екатерина Михайловна

Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства
<
Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства
>

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Гордина Екатерина Михайловна. Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства: диссертация ... кандидата медицинских наук: 03.02.03 / Гордина Екатерина Михайловна;[Место защиты: Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, www.iegm.ru].- Пермь, 2015.- 139 с.

Содержание к диссертации

Введение

ГЛАВА 1. Обзор данных литературы 11

1.1. Морфология, классификации и биологические свойства стафилококков 11

1.2. Экология стафилококков 22

1.3. Значение стафилококков в патологии человека 26

1.4. Роль стафилококков в патологии млекопитающих и птиц 30

Экспериментальная часть

Глава 2. Материалы и методы исследования 34

2.1. Общая характеристика обследованных людей 34

2.2. Дизайн исследования 36

2.3. Методы исследования 37

2.3.1. Микробиологические методы 37

2.3.2. Молекулярно-генетические исследования 42

2.3.3 Статистические методы 43

ГЛАВА 3. Видовой спектр и антибиотикочувствительность стафилококков, изолированных из различных источников 45

3.1. Видовой спектр стафилококков, изолированных из различных источников 45

3.2. Антибиотикочувствительность стафилококков, изолированных из различных источников 51

ГЛАВА 4. Биологические свойства стафилококков, изолированных из различных источников 59

4.1. Факторы вирулентности стафилококков, выделенных из различных источников 59

4.2. Факторы персистенции стафилококков, выделенных из различных источников 69

4.3. Фаготипирование S. aureus, выделенных из различных источников , 78

4.4. Определение эковариантов S. aureus, выделенных из различных источников 80

ГЛАВА 5. Молекулярно-генетические характеристики стафилококков, изолированных из различных источников 84

Заключение 95

Выводы 107

Практические рекомендации 109

Список условных сокращений 110

Список литературы

Значение стафилококков в патологии человека

Стафилококки отнесены к группе грамположительных факультативно -анаэробных кокков в соответствии с определителем бактерий Берджи [87], где выделены в род Staphylococcus. Они представляют собой сферические клетки 0,5 -1,5 мкм в диаметре, формируют скопления неправильной формы, не образуют спор, неподвижны.

В настоящее время род Staphylococcus включает 45 видов и 24 подвида, которые по результатам секвенирования гена 16S РНК можно отнести к 11 кластерам и 4 кластерам по секвенированию gap-гена [134].

При изучении gap-гена все стафилококки разделены на 3 клада. Кладистика рассматривает группы организмов - их сходство, родство, последовательность возникновения. Клад - группа организмов, которые являются потомками единственного общего предка [45]. Среди кладов выявлены 4 родственные группы (кластеры) стафилококков:

Представителей рода Staphylococcus помимо особенностей строения, объединяет целый ряд признаков (физиологических и биохимических), например, по типу питания они хемоорганотрофы и факультативные анаэробы по типу дыхания (кроме видов S. saccharolyticum и S. aureus subsp. anaerobius). Стафилококки являются каталазоположительными бактериями. Несмотря на присутствие в их клетках цитохромов, представленных обычно двумя типами (а и Ь), в большинстве своем они оксидазонегативны. Чувствительны к лизостафину, который нарушает пентаглициновые мостики, связывающие мурамовую кислоту с тетрапептидами в пептидогликане клеточной стенки [21, 87].

По возможности коагулировать плазму стафилококки принято разделять на 2 группы. S. aureus, S. intermedius, S. hyicus, S. delphini, S. pseudintermedius, S. schleiferi subsp. coagulans относятся к коагулазоположительным стафилококкам (КПС). Остальные виды являются коагулазоотрицательными (КОС) [89, 144, 150].

В течение последнего десятилетия появляется все больше таксономических изменений. Так, штаммы, ранее относившиеся к виду S. intermedius, в настоящее время относят к S. pseudintermedius [150]. Последние выделены в 2005 году после молекулярного анализа штаммов, изолированных от кошек, собак и др. [113].

Несмотря на широкое видовое разнообразие рода Staphylococcus, наибольший практический интерес представляют S. aureus, известные как возбудители различных, в основном инфекционно-воспалительных, заболеваний человека и животных [83, 85, 97, 147, 154, 160, 165, 170, 179, 189, 222, 229 и др.].

Как уже указывалось, представители этого вида способны коагулировать плазму [33]. На основании этого критерия, в практической диагностике, как правило, и идентифицируются штаммы S. aureus. Способность вызывать коагуляцию плазмы связана с наличием секретируемого внеклеточного термолабильного протеина (молекулярная масса 44к). Однако коагулаза стафилококков действует на фибриноген только в присутствии протромбина, в результате взаимодействия которых образуется комплекс стафилотромбин, который обеспечивает эволюцию фибриногена в фибрин [21]. Следует также отметить возможность существования коагулазоотрицательных штаммов S. aureus, имеющих дефекты в «работе» коагулазного гена. S. aureus способны образовывать клампинг (clamping) - фактор, так называемую «связанную коагулазу». В отличие от истиной плазмокоагулазы, ее механизм обусловлен неферментативной преципитацией фибриногена [21].

Важным признаком S. aureus является также наличие фермента гиалуронидазы. Этот экзофермент деполимеризует соименную кислоту, которая является полимером глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина, входящий в состав соединительной ткани [21, 39].

Еще одним характерным свойством данного вида является образование специфических венчиков вокруг колоний на средах, содержащих желток куриного яйца (лецитиназный тест). Данный тест положителен при наличии у S. aureus лецитиназы и липазы. Лецитиназа вызывает расщепление липовителлина, а липаза отвечает за формирование поверхностной радужной пленки [33]. В то же время описаны штаммы S. aureus, не обладающих данным признаком [21, 33], с другой стороны и КОС могут характеризоваться наличием лецитиназы.

Штаммам S. aureus присуще наличие фермента ДНК-азы, обладающего эндо-и экзонуклеазной активностью, который в присутствии ионов кальция расщепляет фосфодиэфирные связи в молекулах ДНК и РНК. Частота встречаемости данного признака у S. aureus почти 99%, в то время как для других видов встречаемость ДНК-азы варьирует в широких пределах. Важным отличием ДНК-азы от других нуклеаз является ее терморезистентность (ТНК-аза). Однако существование ТНК-азы в настоящее время выявлено и для других видов стафилококков (S. intermedius, S. hyicus, S. caprae, S. carnosus, S. simulans, S. capitis) [21].

Одним из характерных свойств штаммов S. aureus является способность образовывать протеин А. Располагаясь на поверхности бактериальной клетки он неспецифически связывает Fc-фрагменты иммуноглобулинов различных классов, а также взаимодействует с фактором Виллебранда (антигемофильный фактор VIII) [202,212,213,217].

Различные виды стафилококков, и прежде всего S. aureus, обладают также способностью вырабатывать различные мембраноповреждающие вещества [179]. В частности, они способны к продукции разнообразных гемолизинов, среди которых самым активным является а-гемолизин. При взаимодействии с цитоплазматической мембраной он вызывает формирование пор, в результате происходит осмотический лизис клетки. Другие гемолизины менее активны - Р-гемолизин (сфингомиелиназа С), а- и у-гемолизины. Обнаружено, что Р-гемолизин проявляет признаки холодового гемолизина: активного при низких температурах [21].

Все перечисленные факторы вирулентности широко используются для идентификации S. aureus и дифференциации его от других видов стафилококков.

В последние годы все чаще публикуются данные о возможной роли различных видов КОС в патологии человека и животных [88, 91, 117].

Все КОС по отношению к новобиоцину принято разделять на 2 группы: «новобиоцинчувствительные» и «новобиоцинрезистентные». Способность к росту в присутствии этого препарата отражает особенность строения их клеточной стенки, являющейся мишенью для данного антибиотика [21].

Отличаясь по химическому составу отдельных компонентов клеточной стенки и по некоторым биохимическим свойствам, представители КОС имеют и ряд общих фенотипических характеристик. Среди них: способность к образованию липолитических ферментов - липаз, фосфолипаз и эстераз, продукция различных ДНК-аз, бактериолитических энзимов (в частности лизоцима) [11, 21, 87], а также гемолизинов [179]. Указанные факторы вирулентности могут встречаться у отдельных видов. Так, бактерии вида S. simulans способны продуцировать бактериолизины, липазы, эстеразы, ДНК-азы и активные в отношении человеческих эритроцитов гемолизины, а штаммы S. lungunensis характеризуются и наличием клампинг-фактора. Штаммы некоторых видов, такие как S. sciuri, S. lentus, S. gallinarum способны ферментировать сахар целлобиозу, что является их отличительной особенностью. Данные виды также обладают выраженными сахаролитической, казеолитической и желатиназной активностями. Эти свойства и отсутствие у них факторов патогенности характеризуют их как наиболее древних, способных к существованию в абиотической среде [21].

Стафилококки способны выживать при различных неблагоприятных воздействиях окружающей среды, а также противостоять факторам резистентности макроорганизма [137, 156, 198, 209 др.]. Иными словами, они обладают рядом факторов персистенции. К их числу относят биопленкообразование, которое является способом существования бактерий и одним из ведущих механизмов сохранения жизнеспособности микробов в неблагоприятных условиях [20, 26, 81, 107, 133, 145, 202, 212, 217, 221, 224 и др.].

Под биопленками принято понимать живое, постоянно обновляющееся сообщество одного или нескольких видов бактерий, которые закрепились на биогенном или абиогенном субстрате и окружены полимерным материалом (матриксом), предохраняющим их от вредных воздействий окружающей среды [76].

Прикрепление стафилококков к определенному материалу основано на гидрофобных и электростатических контактах с поддерживающим субстратом. В качестве такого субстрата в организме человека выступают кожа и слизистые оболочки.

Микробиологические методы

Исследования выполняли на базе Института экологии и генетики микроорганизмов. Тотальную ДНК S. aureus выделяли модифицированным методом, предложенным J. Marmur. В реакции амплификации использовали произвольные праймеры с различным процентом GC пар: праймер A (GTTTCGCTCC), праймер 6 (GAGACGCACA), праймер 7 (CAGCCCAGAG) (синтезированы в ООО «НПФ Синтол», г. Москва, Россия). Первоначально эти праймеры были предложены для типирования грамотрицательных бактерий вид Burkcholderia pseudomallei [140]. В последующем установлена возможность их использования для определения родства стафилококков [4].

Амплификацию проводили на термоциклере DNA Engine Dyad Thermal Cycler ("Bio-Rad", США). Протоколы ГЩР соответствовали рекомендациям авторов, предложивших используемые праймеры. Температурный режим реакции состоял из денатурации при 94 С в течение 30 сек, отжига праймеров при 36 С в течение 30 сек. Элонгацию проводили при 72 С в течение 120 сек. Электрофоретическое разделение продуктов реакции осуществляли в 1,2% агарозном геле при напряженности электрического поля 6 В/см. Визуализацию полос и документирование данных выполняли с помощью системы гельдокументации Gel DocXR ("BioRad", США). В качестве маркера использовали маркер молекулярных весов ДНК Ledder 100-1500 bp (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва). Результаты оценивали по наличию или отсутствию фрагментов ДНК определенного размера на диаграммах, построенных с применением компьютерного обеспечения QuantityOne (версия 4.6.1, Bio-Rad Laboratories, США) [4].

Для статистической обработки полученных данных использовали программу Statistica 6.0, также пакет статистического анализа Microsoft Exel-2010 в соответствии с рекомендуемыми методиками [16, 52]. Изученные количественные параметры представлены в виде М±т, где М - среднее арифметическое, m -ошибка среднего арифметического.

Сравнение бинарных признаков осуществляли с помощью точного критерия Фишера однонаправленного (р) при построении четырехпольной таблицы сопряженности. В случаях если распределение признака по критерию Шапиро-Уилкса не было нормальным, сравнение величин полученных значений проводили с помощью критерия Манна-Уитни (р). О статистически значимых различиях полученных результатов сравниваемых величин, судили по величине цифровых значений р. За критический уровень значимости принимали 0,05. Корреляционный анализ осуществляли путем расчета коэффициента ранговой корреляции Спирмена (г).

Стафилококки, как представители нормальной микробиоты, могут колонизировать различные биотопы человека [120, 141, 162, 167], животных [35, 85, 91, 93, 123, 174] и существовать в ассоциациях друг с другом или с другими микроорганизмами [11, 14]. От здоровых людей, как правило, выделяют до 10 традиционных видов стафилококков [21], появление в их числе других видов может указывать на данных штаммов роль в развитии инфекционных заболеваний [21]. В настоящее время появляется все больше данных о возможном значении коагулазоотрицательных (КОС) стафилококков в этиологии гнойно-воспалительных заболеваний человека. Постоянный контакт сотрудников птицефабрики с птицами, которые могут быть источником «нетипичных» видов стафилококков для человека, представляет потенциальную опасность для их здоровья. Отсюда следует, что важно определить, какие виды стафилококков чаще вегетируют у птиц и влияет ли постоянный контакт сотрудников с курами на колонизацию их биотопов этими микроорганизмами.

Как уже указывалось, для изучения видового спектра стафилококков проведено бактериологическое исследование 159 проб, полученных от 53 сотрудников крупной птицефабрики Пермского края, по роду своей профессиональной деятельности непосредственно контактирующих с птицами. Материалом для исследования служили смывы со слизистой оболочки носа, зева и кожи рук.

Группу сравнения составили 39 практически здоровых лиц (студентов). У них исследовали смывы со слизистой оболочки носа и зева.

Выполнено также бактериологическое исследование 612 образцов внутренних органов 151 птицы: печень, сердце, селезенка, легкие и др. Материал получали от бройлеров различных возрастов (от 2-х до 45 суток), в процессе вынужденного забоя. В результате бактериологического исследования материала от сотрудников и птиц было выделено всего 535 штаммов стафилококков 30-ти видов. В том числе от сотрудников птицефабрики, непосредственно контактирующих с птицами, выделено 126 культур стафилококков 16 видов (Таблица 3).

Из представленных данных следует, что количество штаммов, изолированных со слизистой оболочки носа и зева, было больше - 78, тогда как с кожи - 48. Независимо от характера биотопа преобладали коагулазоотрицательные стафилококки (КОС) - 115 штаммов, 14 видов. Частота встречаемости различных видов в биотопах отличалась. С кожи рук выделено 14 видов, со слизистой оболочки носа и зева - 12. Что касается штаммов S. aureus, то всего изолировано 10 штаммов (со слизистой оболочки выделено 8 штаммов, с кожи - 2).

Стафилококки, изолированные от сотрудников птицефабрики характеризовались значительным видовым разнообразием (Таблица 4). Таблица 4

При сравнении видового спектра стафилококков установлено, что частота встречаемости различных видов в биотопах варьировала. Несмотря на то, что количество видов существенно не отличалось, с кожи рук выделено 14 видов, со слизистой оболочки носа и зева - 12, их спектр был различен. Так, со слизистой оболочки сотрудников изолировали S. equorum и S. intermedius, которые не встречались на коже рук. В то же время, S. saprophyticus, S. sciuri, S.felis и S. schleiferi обнаруживали только на коже рук. Лишь в 15% случаев из различных биотопов одного и того же человека выделяли аналогичные виды стафилококков, характеризующиеся наличием близких свойств. Данные изоляты принимали за идентичные и исследовали как один штамм. Со слизистых оболочек 39 студентов изолировано 65 штаммов стафилококков 13 видов (Таблица 5).

Антибиотикочувствительность стафилококков, изолированных из различных источников

Бактерии рода Staphylococcus встречаются повсеместно. Различные виды стафилококков обладают определенным набором факторов вирулентности и при колонизации биотопов хозяев могут быть причиной инфекционных заболеваний [3, 6, 24, 44, 82, 101, 135, 147, 150, 151, 153, 165, 176, 183, 186 и др.]. Кроме того, стафилококки характеризуются наличием факторов персистенции, которые, в свою очередь, адаптируют их к существованию в определенном биотопе макроорганизма [10, 11, 26, 33, 36, 38, 40, 43, 54, 55, 59, 70, 81, 137, 156, 182, 198, 209 и др.]. Существование микроорганизмов в биотопах различных хозяев может способствовать изменению их биологических свойств.

Стафилококки, изолированные от «хозяев» эволюционно отдаленных друг от друга, характеризуются различием биологических свойств и чем дальше биологические виды друг от друга, тем выраженнее будут эти различия. Однако в условиях тесного контакта хозяев в замкнутой, территориально ограниченной системе, логично предположить обмен различными микроорганизмами, в том числе и штаммами стафилококков, при этом в процессе адаптации может наблюдаться изменение фенотипических свойств бактерий.

Частным случаем такой системы является крупная птицефабрика. Циркуляция различных штаммов стафилококков на предприятиях птицепрома представляет потенциальную опасность для сотрудников, инфицирование которых может происходить как при непосредственном контакте с птицами, так и опосредованно (через предметы окружающей среды). В пользу этого положения свидетельствуют и некоторые данные литературы. Так, J. Kawano et al. выделяли КОС от больных цыплят. Основными видами были S. sciuri, S. saprophyticus и S. epidermidis. Эти же виды были обнаружены в воздушной среде птицефабрик [158]. Geert Huys et al. изолируя КОС и S. aureus на всех этапах переработки птицы, пришли к выводу, что стафилококки являются наиболее распространенными микроорганизмами на птицефабрике. Они способны колонизировать и длительно выживать за счет устойчивости к антибиотикам и дезинфектантам [152]. Лыско С. и Макарова О. на основании изучения микробиоты в инкубаториях птицефабрик Западной Сибири установили, что бактерии рода Staphylococcus были одними из превалирующих [35]. Нами проведено бактериологическое обследование 53 сотрудников крупной птицефабрики Пермского края, по роду своей профессиональной деятельности непосредственно контактирующих с птицами, исследовано также 612 образцов внутренних органов 151 птицы. Группу сравнения составили 39 практически здоровых людей (студенты).

Всего от человека и птиц было выделено 535 штаммов стафилококков 30 видов, в том числе от сотрудников птицефабрики - 126 культур 16 видов. Со слизистых носоглотки студентов изолировано 65 штаммов стафилококков 13 видов. Из патматериала птиц выделено 344 штамма 28 видов стафилококков.

Независимо от источника выделения, стафилококки характеризовались значительным видовым разнообразием, преобладали КОС (27 видов). Количество видов, колонизирующих птиц, практически в 2 раза превышало число видов -сотрудников. Кроме того, отмечен факт низкой инфицированности сотрудников штаммами S. aureus (6,4±0,6%), в сравнении с лицами, не контактирующими с птицами (20,0±2,5%). Низкая инфицированность штаммами S. aureus сотрудников птицефабрики, по-видимому, объясняется постоянным контактом с птицами, являющимися носителями существенного количества различных видов стафилококков и, прежде всего, - КОС. Это приводит к колонизации биотопов сотрудников иными видами. Что касается частоты выделения S. aureus от студентов, то в этой связи следует отметить, что резидентными его носителями являются около 20% людей, транзиторными - 60% [130]. Инфицированность патматериала птиц S. aureus составила 21,2± 1,1%.

Основными видом, колонизирующим биотопы сотрудников и птиц, был S. gallinarum - соответственно 20 и 54 штаммов. Необходимо отметить, что последние являются основными представителями нормофлоры птиц. От птиц, наряду с S. gallinarum, достаточно часто изолировали и S. aureus, S. cohnii, S. sciuri. В то же время, эти виды, за исключением S. aureus, не были обнаружены у студентов. Следовательно, в условиях птицефабрики может иметь место широкая циркуляция штаммов стафилококков, в результате чего происходит обмен этими микроорганизмами между птицами и сотрудниками. Так как различные виды стафилококков, в том числе и КОС, обладающие определенными факторами вирулентности, могут быть причиной различных гнойно-воспалительных заболеваний человека [3, 6, 24, 44, 72, 82, 101, 135, 147, 150, 151, 153, 165, 176, 183, 186], то они представляют опасность и для здоровья персонала.

Фаготипирование S. aureus, выделенных из различных источников

Известно, что антибактериальные препараты систематически применяются в условиях птицефабрики. Это снижает экономические потери от инфекционных заболеваний птиц и стимулирует их рост [35], но и ведет к селекции антибиотикорезистентных штаммов, как правило, к тем препаратам, которые используются на птицефабрике [149, 185 и др.].

В соответствии с требованиями стандартов определения антибиотикочувствительности микроорганизмов CLSI [104], а также с учетом технологического процесса выращивания птицы, для тестирования выделенных культур стафилококков применяли следующие группы препаратов: бета-лактамные антибиотики (оксациллин, цефокситин); тетрациклины (доксициклин); линкозамиды (линкомицин); фторхинолоны (левофлоксацин); аминогликозиды (амикацин, гентамицин); макролиды (эритромицин) и ко-тримоксазол.

Независимо от источника выделения, штаммы S. aureus были наиболее чувствительны к действию антибактериальных препаратов, а культуры S. warneri -более резистентны. При этом штаммы S. aureus, выделенные от сотрудников, чаще характеризовались чувствительностью к тестируемым препаратам, в сравнении с «птичьими». Наиболее четко эти закономерности прослеживались в отношении линкомицина, доксициклина, эритромицина.Так, более 90% изолятов птиц были резистентны к линкомицину и лишь 35% штаммов, изолированных от сотрудников. Среди КОС также выявлен значительный процент штаммов резистентных к линкозамидам и тетрациклинам. В этой связи следует отметить, что линкомицин в составе комбинированных препаратов (например «Акваприм»), в течение длительного времени применялся в условиях птицефбрики. Интересно отметить, что среди всех изолятов S. aureus лишь 1 штамм был резистентен к бета-лактамным антибиотикам (MRSA).

По данным Ehsan М. М. et al., у клинических изолятов КОС резистентность к линезолиду регистрировали у 0,8% штаммов, изолированных от птиц, 24,7% - к доксициклину [117].

Если штаммы S. aureus, выделенные от сотрудников, как правило, отличались более выраженной чувствительностью к тестируемым препаратам, то в отношении изолятов S. warneri таких четких закономерномтей выявлено не было. На фоне более выраженной антибиотикорезистентности всех штаммов этого вида, некоторые культуры, изолированные от сотрудников, были более чувствительны к одним антибиотикам, в ряде случаев такой же чувтсвительностью характеризовались «птичьи» изоляты. Аналогичные данные получены при изучении антибиотикочувствительности штаммов S. gallinarum и S. xylosus. Так, если все культуры S. gallinarum, изолированные от птиц, существенно чаще проявляли чувствительность к левофлоксацину (р=0,038), то штаммы этого вида, выделенные от человека, чаще были чувствительны к доксициклину.

Таким образом, независимо от видовой принадлежности и источника выделения, практически все изученные штаммы были резистентны к линкозамидам и наиболее чувствительны к аминогликозидам.

Резистентность изолятов к линкомицину, и, прежде всего, выделенных от птиц, возможно связана с широким применением на птицефабрике комплексных препаратов, в состав которых входят линкозамиды, в соответствии с технологическим процессом выращивания домашней птицы. Штаммы S. aureus, выделенные как от сотрудников, так и от птиц, чаще проявляли чувствительность к тестируемым препаратам, в сравнении с представителями КОС. Отношение «птичьих» штаммов к антибактериальным препаратам в значительной мере определялось использованием этих групп антибиотиков в процессе выращивания птиц. Важно отметить, что ряд культур, выделенных от человека, по своим антибиотикограммам практически не отличались от таковых штаммов птиц, что свидетельствует об их колонизации биотопов человека.

Инфицированность сотрудников антибиотикорезистентными штаммами стафилококками птиц представляет потенциальную опасность. Такие штаммы могут быть причиной различных гнойно-воспалительных заболеваний, а проводимая антибактериальная терапия не будет эффективной [86, 130, 153].

В этиологии подобных заболеваний могут иметь значение не только штаммы S. aureus [160, 199], но и антибиотикорезистентные представители КОС, в том числе S. xylosus и S. warneri, значение которых в патологии человека с каждым годом возрастает [88, 91, 94, 117].

Следующим этапом было изучение факторов вирулентности выделенных культур стафилококков: гемолитическая, лецитовителлазная и ДНК-азная активности (качественная и количественная оценка).

Независимо от источника выделения, как и можно было ожидать, штаммы S. aureus, чаще, чем представители КОС обладали факторами вирулентности. Среди последних эти свойства в большей мере были присущи штаммам S. xylosus.

Анализ частоты встречаемости факторов вирулентности в зависимости от источника выделения показал, что «птичьи» изоляты всех видов стафилококков, включая S. aureus, как правило, в большей степени характеризовались наличием факторов вирулентности, чем культуры, выделенные от сотрудников птицефабрики. Особенно существенную разницу регистрировали в отношении лецитовителлазной активности. Если штаммы, выделенные от сотрудников и студентов, обладали данным признаком соответственно в 40,00±10,69% и 38,46±10,67% случаев, то «птичьи» изоляты - в 82,35±19,92%. Сопоставление наличия факторов вирулентности у штаммов S. aureus, изолированных от студентов и сотрудников, показало, что первые в большем проценте случаев дезинтегрировали ДНК и особенно лизировали эритроциты человека 0 группы.

Обращало на себя внимание близость ряда штаммов сотрудников (4 культуры) и студентов (7) по встречаемости изученных признаков. В то же время некоторые культуры, выделенные от сотрудников (4), по этим характеристикам были близки к «птичьим» штаммам (9).

Таким образом, в результате изучения факторов вирулентности стафилококков, изолированных от различных хозяев, выявлены некоторые внутривидовые различия свойств штаммов, в зависимости от источника их выделения. Культуры тестируемых видов, изолированные от птиц, чаще обладали изучаемыми факторами вирулентности, в сравнении с изолятами человека. Исключением явились только штаммы S. aureus, выделенные от сотрудников, гемолитическая активность которых была несколько выше. Близость ряда штаммов, выделенных от сотрудников и птиц, по изученным фенотипическим признакам свидетельствует о возможном обмене штаммами стафилококков в условиях «производственного» контакта.

Следующий фрагмент наших исследований был посвящен изучению факторов персистенции, которые, как известно, способствуют выживанию бактерий в неблагоприятных для них условиях [1, 20, 26, 36, 40, 54, 55, 59, 70, 81,137, 156, 182, 198,209,217].